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        泉州市318例HIV抗體篩查陽性的確認結(jié)果分析

        2010-03-28 02:11:14楊育紅陳杰毅陳明春劉建忠吳幼玲
        實驗與檢驗醫(yī)學(xué) 2010年1期
        關(guān)鍵詞:初篩艾滋病試劑

        楊育紅,陳杰毅,陳明春,劉建忠,吳幼玲

        (福建省泉州市疾病預(yù)防控制中心,福建泉州 362000)

        艾滋病是我國重點防治的重大傳染病,艾滋病檢測工作是艾滋病防治工作的基礎(chǔ),包括HIV抗體檢測、HIV抗原檢測、核酸檢測、病毒載量測定、CD4細胞和CD8T淋巴細胞檢測等等,其中血清學(xué)HIV抗體的檢測是艾滋病檢測中最常用的方法,它是診斷艾滋病感染者和艾滋病的主要指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)檢測項目。因為HIV抗體是患者感染了HIV后最容易檢出并且持續(xù)時間最長的免疫標(biāo)志物,且抗體檢測的方法多種,大多簡單、經(jīng)濟便于廣泛推廣應(yīng)用。我國《艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定常規(guī)HIV抗體檢測的程序分為初篩(篩查和復(fù)檢)和確認試驗。篩查及復(fù)檢試劑常用的是酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)和快速檢測試劑,如明膠顆粒凝集試驗(PA)、膠體金、膠體硒等,確認試驗?zāi)壳皣鴥?nèi)常用的是免疫印跡試驗(WB)。本實驗室自2008年開展HIV抗體確認工作以來,共對318例HIV抗體篩查陽性的標(biāo)本進行WB確認,為了解篩查陽性標(biāo)本與與確認結(jié)果之間的關(guān)系,對確認結(jié)果進行如下分析。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來源 2008年至2009年泉州市各篩查實驗室送檢的初篩陽性或可疑的標(biāo)本及我室自愿咨詢檢測初篩為陽性或可疑標(biāo)本,共318例。

        1.2 方法與試劑 初篩實驗試劑采用:珠海麗珠試劑有限公司生產(chǎn)的HIV1/2酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)雙抗原夾心法和美國雅培生產(chǎn)的HIV1/2膠體硒試劑或廈門英科新創(chuàng)的膠體金診斷試劑。確認試驗試劑為新加坡Genelabs公司生產(chǎn)的HIV-1/2免疫印跡試驗(Western blot)試劑。所有檢測試劑均在有效期內(nèi)并嚴(yán)格按照各自說明書操作。儀器采用奧地利Anthos公司生產(chǎn)的2010型酶標(biāo)儀,鄭州安圖生物的Anthos fluido型洗板機和MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的Autoblot System 20全自動蛋白印跡儀。方法按 《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》(2004年)的要求,所有初篩陽性或可疑的標(biāo)本先用ELISA和金標(biāo)或硒標(biāo)復(fù)檢,復(fù)檢均陰性按陰性報,均陽性或一陰一陽進一步用WB試劑確認。

        2 結(jié)果

        2.1 318份篩查陽性標(biāo)本經(jīng)WB確認后,227份確認為HIV-1抗體陽性 (71.4%),48份確認為HIV-1抗體不確定 (15.1%),43份確認為HIV-1抗體陰性(13.5%)。

        2.2 在227份WB確認陽性標(biāo)本中,ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)的結(jié)果均為陽性,其中ELISA的S/CO值>11的占98.2%,S/CO值在6~11之間占1.8%,即確認陽性標(biāo)本中ELISA的S/CO值均>6,見表1。

        2.3 在48份不確定標(biāo)本中,45份ELISA陽性,占93.8%,S/CO值平均為 5.43,其中 S/CO值>6占33.3%,結(jié)果見表1。48份標(biāo)本中7份硒標(biāo)或金標(biāo)陽性,其中有5份ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)均陽性。

        2.4 在43份陰性標(biāo)本中,ELISA陽性35份,占81.4%,S/CO值平均為2.51,其中S/CO值>6僅 2例,88.4%S/CO值<4,見表1。43份中有8份硒標(biāo)或金標(biāo)陽性,無ELISA和硒標(biāo)或金標(biāo)均陽性的標(biāo)本。

        表1 ELISA結(jié)果S/CO值與WB確認結(jié)果的關(guān)系

        2.5 在 WB確認陽性標(biāo)本的條帶中,gp160、gp120、p66出現(xiàn)的百分率最高100%,其次是gp41、p31、p24, 為99.6%,p51為 97.8%, p17為 84.1%,p55最少50.7%。在不確定標(biāo)本中,p24出現(xiàn)的幾率最高,為85.4%,其次是gp160(58.3%),與文獻報道的一致[1]。陰性標(biāo)本未出現(xiàn)任何條帶。結(jié)果見表2。

        3 討論

        表2 陽性和不確定WB試驗反應(yīng)條帶

        隨著艾滋病檢測技術(shù)的發(fā)展,HIV篩查試劑的敏感性和特異性也在不斷提高,目前ELISA多使用的是第三代HIV診斷試劑,其敏感性和特異性已接近國際水平,但仍然會有假陽性、假陰性和抗體不確定的結(jié)果等情況出現(xiàn)。分析比較ELISA與WB確認試驗結(jié)果,可見:確認陽性標(biāo)本中的S/CO值較大,均大于6,而確認陰性和不確定的標(biāo)本中S/CO值相對較低,由此可見高S/CO值預(yù)示HIV抗體陽性的可能性較大,而S/CO值較低時HIV抗體陰性及不確定的可能性較大,這與國內(nèi)的一些報道是一致的[2~3]。但也有部分(18份,占5.7%)S/CO值大于6的強陽性標(biāo)本,確認結(jié)果為陰性和不確定,分析其原因,可能①酶免試劑盒問題,如原料和工藝問題,②標(biāo)本問題,可能由于一些傳染病病原體與HIV某些抗原決定簇有交叉反應(yīng)[4]③一些標(biāo)本存在溶血、脂血、微生物污染等現(xiàn)象,增大了HIV抗體假陽性率。

        《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定,復(fù)檢要用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑重復(fù)檢測。我們用ELISA和快速診斷試劑復(fù)檢,結(jié)果為雙陽性的標(biāo)本,確認試驗陽性符合率較高,達到97.8%(227/232),其余2.2%確認結(jié)果為不確定,陰性結(jié)果未出現(xiàn)雙陽性標(biāo)本,反映出ELISA試驗加快速試驗是較好的初篩復(fù)檢手段。

        有文獻報道WB方法經(jīng)常出現(xiàn)可疑雜帶[5],但往往是假可疑真陰性。Tebourski F等采用PCR技術(shù)證明,WB方法所檢出的可疑標(biāo)本應(yīng)該報為陰性[6]。Jackson JB等通過長期跟蹤隨訪WB方法所檢出的可疑標(biāo)本,未能發(fā)現(xiàn)其變?yōu)殛栃訹7]。本實驗室48份確認結(jié)果為不確定的標(biāo)本中,出現(xiàn)的條帶多為p24和gp160,條帶多比較細,顏色較淺或位置不確定,48份標(biāo)本中有10份3個月后進行了復(fù)檢,結(jié)果可疑條帶依然存在,并未衍生出多樣條帶,按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》判定為HIV陰性。由于318份標(biāo)本中不確定占了48份(15.1%),大量可疑標(biāo)本的存在首先給檢驗人員帶來了判斷困難,其次,篩查陽性確認實驗可疑的檢測結(jié)果,使艾滋病流行病學(xué)調(diào)查隨訪和疫情管理變得復(fù)雜,也給被檢者帶來了嚴(yán)重的心理負擔(dān),再者由于復(fù)檢也增加了檢測成本。因此①期待WB確認試劑的質(zhì)量有進一步的完善或有更有效、實用的HIV確認實驗方法盡快出現(xiàn),②通過輔助檢測幫助判斷,如核酸檢測,該法直接檢測HIV-1的核酸而非抗體,可以很好地解決抗體檢測的假陽性,③修改現(xiàn)行的WB試驗陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)。

        鑒于目前HIV感染人數(shù)的不斷增加,以及隨著HIV傳播的加速和對HIV認識的提高,對醫(yī)院患者、高危人群、HIV感染者以及艾滋病病人的檢查率也越來越高。面對如此大量的篩查以及檢測工作,必須有過硬的技術(shù)力量,完善的實驗室管理制度和質(zhì)量控制以及高敏感性和高特異性的檢測試劑作保障。因此,要不斷提高整體檢測能力,優(yōu)先選擇經(jīng)國家參比實驗室評估的、質(zhì)量優(yōu)秀的試劑盒,進行標(biāo)準(zhǔn)化操作,保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確全面無誤,為艾滋病防治工作提供準(zhǔn)確科學(xué)的依據(jù)。

        [1]黑發(fā)欣,張啟云,孫偉東,等.HIV抗體篩查實驗陽性確認實驗可疑和陰性標(biāo)本的對比分析 [J].中國性病艾滋病防治.2006,12(2):4~6.

        [2]鮑作義,李敬云,米獻淼,等.我國現(xiàn)行HIV檢測策略和方法的應(yīng)用評價[J].中國性病艾滋病防治,2001,7(5):304~305.

        [3]李 宏,王 哲,馬麗萍,等.HIV抗體初篩與確認(WB)測試結(jié)果對比分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2003,13(6):752~753.

        [4]李敬云.艾滋病的病原學(xué)診斷[M].北京:軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院出版,1999:28.

        [5]Srivastava BI,Gonzales C,Loftus R,et al.Examination of HTLV-ⅠELISA-positive leukemia/lymphoma patients by western blottinggave mostly negative or indeterminate reaction[J].AIDS Res HumRetroviruses,1990,6(5):617~1627.

        [6]Tebourski F,Slim A,Elgaaied A.The significance of combining WorldHealth Organization and Center for Disease Control criteria to resolveindeterminate human immunodeficiency virus type-1Western blot re-sults[J].Diagn Microbiol Infect Dis,2004,48(1):59~61.

        [7]Jackson JB,Hanson MR,Johnson GM,et al.Long-term follow-up of blood donors with in determinate human immunodeficiency virus type 1 results on Western blot[J].Transfusion,1995,35(2):98~102.

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