臧瑩安，金緯虎，楊展基，李春玲

(1．仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，廣東廣州510225；2．廣東省梅州市大浦縣畜牧局，廣東大浦 514200；3．廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所，廣東廣州510640)

消毒是預(yù)防和撲滅傳染病最為有效的措施之一，是傳染病防治工作中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，選擇理想的消毒劑是做好傳染病防治工作的關(guān)鍵。近年來消毒劑的研制開發(fā)受到研究者的極大關(guān)注。豬瘟病毒屬披膜病毒科成員，對(duì)外界抵抗力強(qiáng)，對(duì)許多消毒劑有抵抗力。本試驗(yàn)選擇豬瘟病毒為研究對(duì)象，研究百迪Ⅲ，百迪康，迪威安，迪威寧，力保健和消特靈對(duì)豬瘟病毒兔體試驗(yàn)的效果，以期為豬瘟病的防治尋找有效的新型消毒劑。

一、試驗(yàn)材料

（一）消毒劑 百迪Ⅲ（主要成分戊二醛、雙鏈季銨鹽），百迪康（主要成分戊二醛、癸甲溴銨），迪威安（主要成分碘），力保健（主要成分過硫酸氫鉀、氯化鈉），消特靈（主要成分二氯異氰脲酸鈉）。均由廣州邁高化學(xué)有限公司提供。

（二）豬瘟兔化疫苗農(nóng)業(yè)部蘭州生物藥廠生產(chǎn)的豬瘟弱毒疫苗毒(C株),20倍稀釋后使用。

（三）禽巴氏桿菌由廣東省農(nóng)科院獸醫(yī)研究所分離鑒定和保存。

（四）中和劑硫代硫酸鈉，甘氨酸，吐溫-80，氫氧化鈉。

（五）試驗(yàn)動(dòng)物體重2～3 kg的健康家兔，由南方醫(yī)科大學(xué)提供。

（六）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)廣東省農(nóng)科院獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)室自配。

（七）基本實(shí)驗(yàn)儀器恒溫箱(36±1℃)、干燥箱、高壓滅菌器、試管、恒溫水浴箱(46±l℃)、平皿(90)、吸管 (1 ml、10 ml)、酒精燈、滅菌棉簽等常用設(shè)備和器材。

二、試驗(yàn)方法

本次試驗(yàn)均按照獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范( 試行 ) 進(jìn)行。

（一）中和劑的選擇殘留消毒劑的去除通常采用化學(xué)中和法：向消毒液中加入適量的中和劑，使消毒劑濃度得到稀釋，并且消毒作用受到化學(xué)中和。將巴氏桿菌復(fù)蘇計(jì)數(shù)，配成濃度為109/ml，然后稀釋至106/ml按下述方法進(jìn)行涂板計(jì)數(shù)。試驗(yàn)分為6組：

A：未接種的培養(yǎng)基，證明培養(yǎng)基是否污染。

B：菌液接種于培養(yǎng)基，證明菌種與培養(yǎng)基是否適宜。

C：中和劑1ml＋菌液1ml，證明中和劑是否有抑菌作用。

D：消毒劑1ml＋菌液1ml，證明消毒劑在試驗(yàn)濃度下是否有殺菌或抑菌作用。

E ：（ 消 毒 劑 1 ml＋ 菌 液 1 ml）＋中和劑1 ml，消毒劑1 ml和菌液1 ml先作用5 min后再加入中和劑1 ml作用10 min后涂板計(jì)數(shù)；證明中和劑能否中和殘留消毒劑的抑菌作用。

F：（ 消 毒 劑1 ml＋ 中 和 劑1 ml）＋菌液1 ml，消毒劑1 ml和中和劑1 ml作用10 min后再加入菌液1 ml作用5 min后涂板計(jì)數(shù)；證明消毒劑與中和劑的反應(yīng)物有無抑菌作用。

分別取事先準(zhǔn)備好的平板，按上述方法將中和劑、消毒劑和菌液分別混合作用，然后用移液槍各吸100 ml涂板計(jì)數(shù)，D和E組接原液；B、C和F組按1:10稀釋至第3管涂板；每組2個(gè)平行樣本。

結(jié)果判定：如A組不長(zhǎng)菌，B、C、F組菌落數(shù)為90～110個(gè)，D組不長(zhǎng)菌，通過第E組可判別所選中和劑及其濃度適宜。

選用中和劑時(shí)要遵循下面一些原則：試驗(yàn)所用試驗(yàn)指標(biāo)菌應(yīng)為消毒試驗(yàn)選用菌株中抵抗力最弱者，所用試劑、培養(yǎng)基及其他材料都應(yīng)一致，應(yīng)以消毒劑未用中和劑中和時(shí)的最低有效濃度作為試驗(yàn)濃度。酚類消毒劑（3.0%～5.0%）、堿類消毒劑、酸類消毒劑、戊二醛、過氧乙酸（0.1%～0.5%）、含氯消毒劑（0.1%～0.5%）、季銨鹽類消毒劑（0.1%～0.5%）的常用中和劑分別為：吐溫80（3.0%～ 5.0%）、等當(dāng)量酸、等當(dāng)量堿、甘氨酸、硫代硫酸鈉（0.1%～0.5%）、硫代硫酸鈉（0.1%～1.0%）、吐溫80（0.1%～3.0%）。

（二）消毒劑抗豬瘟病毒兔體試驗(yàn)

1.將不同消毒劑分別稀釋到不同濃度：百迪康、百迪Ⅲ和力保健稀 釋 為1:800、1:1000和1:1500；迪威安稀釋為1:300、1:500和1:800；消特靈稀釋為200 mg/L、100 mg/L和50 mg/L。

2.將不同濃度的消毒劑4.5 ml與一萬只家兔最小感染量的豬瘟兔化疫苗0.5 ml混合。同時(shí)設(shè)生理鹽水作為空白對(duì)照組：將4.5 ml生理鹽水與一萬只家兔最小感染量的豬瘟兔化疫苗0.5 ml混合；病毒對(duì)照組：豬瘟兔化疫苗5.0 ml。分別20℃水浴5 min。

3.分別取上述溶液1 ml于另外的滅菌試管，并向其中加入中和劑9 ml，混合后作用10 min。

4. 以上各混合液耳靜脈注射家兔兩只，1 ml/只，所有家兔連續(xù)6 d測(cè)體溫，3次/日。試驗(yàn)兔接毒后36～48 h，測(cè)量體溫超過注射前體溫0.5℃以上2個(gè)溫次者表明該濃度的消毒劑不能有效殺滅豬瘟病毒。

體溫反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)如下：

定型熱反應(yīng)（＋＋）：潛伏期48～96 h，體溫上升呈明顯曲線，至少有3個(gè)溫次超過常溫1℃以上，并稽留18～36 h可判為定型熱。

輕熱反應(yīng)（＋）：潛伏期48～96 h，體溫上升呈明顯曲線，至少有2個(gè)溫次超過常溫0.5℃以上，并稽留12～36 h。

可 疑 反 應(yīng)（±）：潛 伏 期48～96 h，體溫曲線起伏不定，稽留不到12 h；或潛伏期在24 h以上，不足48 h及超過96 h至120 h出現(xiàn)熱反應(yīng)。

無反應(yīng)（－）：體溫正常。

三、試驗(yàn)結(jié)果

（一）平板培養(yǎng)基上細(xì)菌菌落數(shù)

（二）中和劑種類及濃度根據(jù)細(xì)菌平板計(jì)數(shù)結(jié)果(表1)，選定百迪康、百迪Ⅲ、力保健、迪威安、消特靈適用的中和劑分別為甘氨酸（0.008%）和吐溫-80（0.08%）、甘氨酸（0.008%）和吐溫-80（0.08%）、硫代硫酸鈉（1%）、硫代硫酸鈉（1%）和NaOH（0.2%）、硫代硫酸鈉（1%）。

（三）兔體試驗(yàn) 見表2。

由試驗(yàn)結(jié)果可以看出：當(dāng)百迪Ⅲ、百迪康、迪威寧、消特靈的濃度分別 ≥ 1:800、1:1000、1:300、1:700、1:800、200mg/L時(shí)，均可有效殺滅豬瘟病毒。

表1 平板培養(yǎng)基上細(xì)菌菌落數(shù)（個(gè)）

四、討論與分析

本次試驗(yàn)通過對(duì)幾種新型消毒劑對(duì)抗豬瘟病毒兔體試驗(yàn)研究比較，發(fā)現(xiàn)同一種消毒劑的濃度不同，其體溫反應(yīng)也不一樣。大多數(shù)消毒劑在高濃度時(shí)起殺菌作用，低濃度時(shí)則只有抑菌作用。所以當(dāng)消毒液濃度不同時(shí)對(duì)豬瘟病毒作用效果不一樣，當(dāng)濃度達(dá)到一定程度后可以殺豬瘟病毒，所以在生產(chǎn)臨床中對(duì)消毒藥的應(yīng)用要注意濃度。在臨床實(shí)踐中，還要考慮消毒劑的成本、具體的消毒地點(diǎn)、消毒劑的保存及抗藥性等因素而選擇消毒藥。

戊二醛復(fù)合消毒劑是一種新型復(fù)合型消毒劑，其主要活性成分為二甲基可可氯苯甲胺(季胺鹽)和戊二醛。季銨鹽是表面活性類消毒劑，能迅速滲透入胞漿膜脂質(zhì)體和蛋白質(zhì)體，改變細(xì)胞膜通透性，具有較強(qiáng)的殺菌力。它能形成離子化凝膠和膠囊，具有導(dǎo)電性，能影響蛋白質(zhì)表面的溶解度，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，從而破壞酶的活性。戊二醛可以和胞壁脂蛋白發(fā)生交聯(lián)，和胞壁磷壁酸中的酯聯(lián)殘基形成側(cè)鏈，從而封閉細(xì)胞壁，阻礙微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和廢物的排出。從表2可看出當(dāng)百迪康的濃度≥1:1000時(shí)可有效地殺滅豬瘟病毒；當(dāng)百迪Ⅲ的濃度≥1:800時(shí)可有效殺滅豬瘟病毒。

含氯消毒劑的作用機(jī)制為氧化作用和氯化作用，而干擾細(xì)胞代謝。一般說來，有效氯濃度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)，消毒效果越。超氯消毒劑是新一代氯制劑，具有高效、廣譜，無毒無副作用等特點(diǎn)，可用以帶畜消毒，飲水消毒。從表2可看出當(dāng)力保健的濃度≥1:800時(shí)可有效的殺滅豬瘟病毒。

碘主要以分子（I2）形式發(fā)揮殺菌作用，其原理是碘化和氧化菌體蛋白的活性基因，并與蛋白的氨基結(jié)合而導(dǎo)致蛋白變性和抑制菌體的代謝酶系統(tǒng)。試驗(yàn)中迪威安中的碘分子與表面活性劑結(jié)合，制成碘附溶液，當(dāng)用水稀釋時(shí)將緩慢釋放出碘分子，因而是一種高效的殺微生物消毒劑。對(duì)引起家畜和家禽主要疾病的病毒、細(xì)菌和真菌有殺滅作用。由表2可看出當(dāng)?shù)贤驳臐舛取?:300時(shí)可有效的殺滅豬瘟病毒。

消特靈粉是由二氯異氰酸鈉配制而成的粉劑，其有效氯含量大于20%。具有高效、廣譜、快速、低殘留等特點(diǎn)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)。由表2可看出當(dāng)消特靈的濃度≥200 mg/L時(shí)可有效殺滅豬瘟病毒。但據(jù)報(bào)道，動(dòng)物連續(xù)大量攝入含氯消毒劑可在體內(nèi)蓄積并引起機(jī)體慢性中毒，這一點(diǎn)值得養(yǎng)殖生產(chǎn)者注意。

表2 抗豬瘟病毒兔體試驗(yàn)

本次試驗(yàn)只是幾種新型消毒劑抗豬瘟病毒的初步試驗(yàn)，進(jìn)一步的研究還有待于深化。

（略）