劉全德，唐仕榮，王衛(wèi)東，馮彩霞

(徐州工程學(xué)院食品工程學(xué)院，江蘇 徐州 221008)

響應(yīng)曲面法優(yōu)化超聲波-微波協(xié)同萃取生姜多糖工藝

劉全德，唐仕榮，王衛(wèi)東，馮彩霞

(徐州工程學(xué)院食品工程學(xué)院，江蘇 徐州 221008)

以遠(yuǎn)紅外干燥的生姜粉為原料，通過單因素試驗(yàn)探討超聲波-微波協(xié)同萃取生姜多糖工藝中液料比、微波功率、提取時(shí)間、顆粒大小及超聲波等因素對多糖提取率的影響，利用響應(yīng)曲面法對影響生姜多糖提取率的3個(gè)主要因素即微波功率、液料比和提取時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。分析表明最佳提取工藝參數(shù)：鮮生姜60℃干燥、粉碎過40目篩、純水為溶劑、液料比25:1、微波功率258W條件下提取85s，生姜多糖提取率23.65%，比熱水回流浸提6h所得提取率高21.10%。超聲波-微波協(xié)同具萃取的方法有方法簡單及萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)，可為生姜多糖的提取應(yīng)用提供一定參考。

生姜多糖；超聲波-微波協(xié)同萃??；響應(yīng)曲面；工藝

生姜是世界范圍內(nèi)一種重要香辛調(diào)味料，世界年貿(mào)易量超過2萬噸，也是亞洲傳統(tǒng)的藥食兩用植物[1]。因其具有發(fā)汗解表、鎮(zhèn)痛消炎等作用，外加獨(dú)特的香辣味而深得百姓喜愛。目前，生姜研究主要集中在精油[2]和姜油樹脂[3-4]方面。植物多糖是一種天然功能性食用多糖，抗氧化，具有可溶性膳食纖維和生物活性前體的生理功能[5]，可作為防治腫瘤、冠心病、糖尿病、結(jié)腸癌、便秘等的保健食品配料和天然藥物[6-7]，也可作為糖、脂肪替代物而大量用于低熱量、低糖、低脂食品中[8]。生姜根中含有大量多糖[9]，開發(fā)生姜多糖具有重要意義。

多糖提取多采用熱水浸提法[10]和酶法[11]等。近年來，微波因促進(jìn)反應(yīng)的高效性、強(qiáng)選擇性、操作簡便、副產(chǎn)物少及產(chǎn)率高等優(yōu)點(diǎn)在食品、天然產(chǎn)物、中藥和環(huán)境等領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用[12-15]。超聲波提取技術(shù)也是近年來應(yīng)用于天然產(chǎn)物活性成分提取的一種新的手段，

可大大簡化操作、縮短提取時(shí)間、增加得率等[16-18]。本實(shí)驗(yàn)主要探討生姜多糖的超聲波-微波萃取協(xié)同萃取工藝及其影響因素，為生姜多糖的進(jìn)一步研究提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

鮮生姜 徐州農(nóng)貿(mào)市場；葡萄糖、苯酚、濃硫酸等(均為分析純)。

CW-2000型超聲-微波協(xié)同萃取儀 上海新拓分析儀器科技有限公司；TU-1810型紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司。

1.2 方法

1.2.1 生姜多糖檢測方法

采用改良苯酚-硫酸法[19]。精確移取100μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，各以純水補(bǔ)至2.0mL，然后分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)6%苯酚溶液1.0mL，濃硫酸5.0mL搖勻，于沸水浴中加熱15min，然后置冷水浴中冷卻30min，在波長490nm處測定吸光度。以2.0mL純水同樣顯色操作為空白，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.0133C－0.0253，R2= 0.9994，表明葡萄糖在10～100μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2 生姜多糖的提取方法

新鮮生姜洗凈切片，遠(yuǎn)紅外干燥箱中60℃干燥，粉碎過40目篩。稱取生姜粉5g于250mL萃取儀專用瓶中，加入100mL純水，250W微波處理60s，4800r/min離心15min，取上清液測定生姜多糖提取率。

通過改變微波功率、微波處理時(shí)間和液料比等因素來探討超聲波-微波協(xié)同萃取技術(shù)對生姜多糖提取的影響，通過響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化確定最佳提取工藝參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 提取次數(shù)的影響

多次提取可以提高生姜多糖的提取率，但提取次數(shù)增加會延長提取時(shí)間、增加提取液體積及后續(xù)操作困難等，所以應(yīng)確定合適的提取次數(shù)。生姜粉5g加純水100mL，250W條件下微波處理60s，4800r/min離心15min，殘?jiān)?00mL純水再次處理60s，如此多次處理，分別測定每次提取液中生姜多糖提取率。結(jié)果表明，隨著提取次數(shù)的增加，生姜多糖提取率顯著下降，第二次生姜多糖的提取量約為第一次的10.7%，第三次的約為第一次的1.7%，表明2次即可將絕大部分生姜多糖提取出來，因此，提取次數(shù)選擇2次。

2.1.2 液料比的影響

溶劑用量越多，傳質(zhì)推動力越高，有效成分的提取就越完全，但溶劑用量太多，又容易增加后續(xù)除去溶劑的難度，因此應(yīng)選擇合適的液料比。在其他條件不變的情況，分別加入不同液料比的純水考察液料比對生姜多糖提取的影響。由圖1可看出，純水量較少時(shí)生姜多糖提取率隨液料比增大而增加，當(dāng)液料比(mL/g)達(dá)到20:1時(shí)，多糖提取率趨于平穩(wěn)，表明基本達(dá)到溶解平衡，過高液料比對多糖提取率增加有限，反而會增加濃縮時(shí)間及費(fèi)用。因此液料比選擇20:1。

圖1 液料比對生姜多糖提取的影響Fig.1 Effect of liquid/solid ratio on polysaccharide yield

2.1.3 微波功率的影響

微波功率對生姜多糖的提取有較大影響，功率越高，體系的升溫速度越快，更高的提取溫度可以提高樣品內(nèi)部的擴(kuò)散能力和目標(biāo)組分從樣品中解吸附的能力，從而提高提取效率；然而溫度過高也可能會引起某些成分的結(jié)構(gòu)被破壞。因此，根據(jù)能夠有效提取出目標(biāo)成分的原則，選取不同的功率，考察微波功率對生姜多糖提取的影響。

圖2 微波功率對生姜多糖提取的影響Fig.2 Effect of microwave power on polysaccharide yield

由圖2可知，生姜多糖提取率先隨功率的增大而增加，在250W時(shí)達(dá)到最大。這可能是由于微波對細(xì)胞膜的破碎作用隨著功率增加而逐漸增強(qiáng)，從而有利于提?。欢?dāng)微波功率進(jìn)一步增加時(shí)其強(qiáng)熱效應(yīng)可能破壞某些成分而造成提取率下降。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在較高功率下非常

容易發(fā)生暴沸而影響實(shí)驗(yàn)，所以微波功率選取250W。

2.1.4 處理時(shí)間的影響

在提取過程中，決定生姜多糖提取效率的一個(gè)基本因素就是溶劑與多糖成分的接觸時(shí)間，為實(shí)現(xiàn)盡可能充分的提取就需要足夠的提取時(shí)間，但過長的提取時(shí)間可能引起過熱，造成組分損失，因此，需確定最佳提取時(shí)間。通過選取不同提取時(shí)間以考察時(shí)間對生姜多糖提取的影響。由圖3可知，在80s內(nèi)，生姜多糖提取率隨時(shí)間的增大而增加，當(dāng)超過80s后提取率增加非常有限?？赡苁怯捎谖⒉ㄗ饔孟路肿诱駝蛹涌?，摩擦導(dǎo)致細(xì)胞膜破碎，從而有利于多糖的提?。欢?dāng)時(shí)間較長時(shí)提取液中多糖基本達(dá)到飽和而增加有限。因此處理時(shí)間選擇80s。

圖3 處理時(shí)間對生姜多糖提取的影響Fig.3 Effect of extraction duration on polysaccharide yield

2.1.5 粒度的影響

在提取工藝中，固體顆粒越細(xì)小，提取率越高，提取時(shí)間也越短；但粒度過小會顯著增加粉碎難度，而且也會增加提取后過濾的難度。分別選用不同顆粒大小的物料進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，考察粒度對生姜多糖提取率的影響。由圖4可知，隨著顆粒變細(xì)，提取率有所增加，但增加非常有限，即40目的物料即可滿足微波提取的需要。該結(jié)果也體現(xiàn)了微波在活性成分提取方面的高效性。

圖4 粒度對生姜多糖提取的影響Fig.4 Effect of material particle size on polysaccharide yield

2.1.6 超聲波對提取的影響

稱取生姜粉5g，加入100mL純水，關(guān)閉超聲波僅250W微波處理80s，對比超聲波對提取的影響。結(jié)果表明，關(guān)閉超聲波時(shí)多糖提取率21.32%，協(xié)同作用時(shí)22.93%，表明超聲波對多糖提取有一定促進(jìn)作用。

2.2 響應(yīng)曲面優(yōu)化提取工藝

2.2.1 響應(yīng)曲面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

結(jié)合單因素試驗(yàn)，選擇微波功率、提取時(shí)間和液料比3因素，在超聲波常開條件下，利用Design-Expert軟件，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)曲面試驗(yàn)方案[20]，以微波功率、提取時(shí)間和液料比為自變量，分別用X1、X2、X3來表示，并以+1、0、－1分別代表變量的水平，試驗(yàn)因素水平編碼如表1所示。試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和結(jié)果見表2。

表1 生姜多糖提取工藝響應(yīng)曲面試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and levels in the response surface design

表2 響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Response surface design arrangement and experimental results

利用Design-Expert V7.0.0軟件對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸擬合，得到生姜多糖提取率對以上3個(gè)因素的二次多項(xiàng)回歸模型：

當(dāng)晚他剛進(jìn)家門，就聽趕回家的父親埋怨繼母：“云天遲交學(xué)費(fèi)打什么緊，你不怕耽擱了小兒子治?。俊崩^母囁嚅：“沒想到有這么嚴(yán)重。當(dāng)時(shí)我只想云天的學(xué)費(fèi)遲交好幾天了，我怕他在同學(xué)面前沒面子。”原來徐云天走不久，弟弟疼得直打滾。家里沒錢，廉小花揣上金項(xiàng)鏈賤賣抱小兒子去醫(yī)院，原來徐天任得急性闌尾炎，已穿孔，再晚半小時(shí)，會有生命危險(xiǎn)。

Y/% = 22.71+0.51X1+1.74X2+1.39X3－1.45X1X2+ 0.42X1X3－0.018X2X3－1.92X12－3.12X22－0.51X32

對該模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。由表3可知，模型具有高度顯著性(P=0.0013)，失擬項(xiàng)不顯著(P=0.6335)，R2Adj=0.9377和信噪比為16.067，遠(yuǎn)大于4，可知回歸方程擬合度和可信度均較高，能夠用此模

型對生姜多糖提取率進(jìn)行分析和預(yù)測。

表3 響應(yīng)曲面二次回歸方程模型方差分析結(jié)果Table 3 Analysis of variances for the developed regression model

2.2.2 響應(yīng)曲面分析與優(yōu)化

圖5 微波功率、提取時(shí)間及其交互作用的響應(yīng)曲面圖Fig.5 Response surface plot indicating the interactive effects of microwave power and extraction duration on polysaccharide yield

圖6 微波功率、液料比及其交互作用的響應(yīng)曲面圖Fig.6 Response surface plot indicating the interactive effects of microwave power and liquid/solid ratio on polysaccharide yield

圖7 提取時(shí)間、液料比及其交互作用的響應(yīng)曲面圖Fig.7 Response surface plot indicating the interactive effects of extraction duration and liquid/solid ratio on polysaccharide yield

根據(jù)回歸分析結(jié)果作相應(yīng)曲面圖，結(jié)果見圖5～7。

由圖5～7和表3可知，模型中的提取時(shí)間和液料比、微波功率和提取時(shí)間的交互項(xiàng)、微波功率二次項(xiàng)和提取時(shí)間二次項(xiàng)對生姜多糖提取率有極顯著影響，而微波功率和液料比之間、液料比和提取時(shí)間之間的交互作用較小。提取時(shí)間的影響最大，液料比次之。表明各因素對生姜多糖提取率的影響不是簡單的線性關(guān)系。

2.3 協(xié)同萃取與回流提取的比較

使用同一批原料，對比超聲波-微波萃取協(xié)同法和回流提取法對生姜多糖的提取差異。回流提取法的工藝條件：過40目篩的生姜粉、液料比25:1、100℃回流提取3次、每次提取2h，生姜多糖提取率為19.53%。超聲波-微波萃取協(xié)同萃取85s的生姜多糖提取率比回流提取6h高21.10%，充分體現(xiàn)了超聲波、微波提取快速高效的優(yōu)點(diǎn)。

3 結(jié) 論

通過單因素和響應(yīng)曲面法探討超聲波-微波協(xié)同萃取生姜多糖的工藝條件，確定最佳提取工藝參數(shù)：鮮生姜60℃遠(yuǎn)紅外干燥、粉碎過40目篩、純水為溶劑、液料比25:1、微波功率258W條件下提取85s，提取3次，取平均值為生姜多糖提取率23.65%，比熱水回流浸提6h的高21.10%。體現(xiàn)了微波、超聲波提取方法簡單、高效率等優(yōu)點(diǎn)，具有一定的實(shí)用價(jià)值。

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Response Surface Methodology for Ultrasonic and Microwave Synergistic Extraction Optimization of Ginger Polysaccharides

LIU Quan-de，TANG Shi-rong，WANG Wei-dong，F(xiàn)ENG Cai-xia
(College of Food Engineering, Xuzhou Institute of Technology, Xuzhou 221008, China)

Fresh gingers were dried in a far infrared drying oven and powder to provide a starting material for extraction ginger polysaccharides on an ultrasonic and microwave synergistic instrument. The effects of liquid/solid ratio, microwave power, extraction duration, material particle size and added ultrasonic treatment on polysaccharide yield were explored through single factor experiments. Three main affecting factors, namely microwave power, extraction duration and liquid/solid ratio were selected to carry out response surface optimization based on Box-Behnken experimental design. The optimal extraction conditions were determined as follows: drying temperature for fresh gingers, 60 ℃; sieve mesh size for powdered gingers, 40; extraction solvent; pure water; microwave power, 258 W; and extraction duration, 85 s. The polysaccharide yield obtained under these optimal conditions was 23.65%, higher than that obtained after three-time hot water reflux extraction for 2 hour each time (19.53%). Ultrasonic and microwave synergistic extraction has the benefits of simplicity and high efficiency.

ginger polysaccharide；ultrasonic and microwave synergistic extraction；response surface methodology；processing

TQ929.2

A

1002-6630(2010)18-0124-05

2010-06-21

徐州工程學(xué)院2007年度自然科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(XKY2007223)

劉全德(1958—)，男，副教授，研究方向?yàn)槭称饭こ?。E-mail：lqd@xzit.edu.cn