馮 星，邱細(xì)敏，黃亞林，劉雄志，黎 賽，鄭 妮

(1.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006；2.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院，廣東 廣州 510515)

平江白術(shù)多糖對腺嘌呤致大鼠腎衰模型的保護(hù)作用

馮 星1，邱細(xì)敏1，黃亞林1，劉雄志1，黎 賽1，鄭 妮2

(1.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006；2.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院，廣東 廣州 510515)

目的：探討白術(shù)多糖對腺嘌呤誘發(fā)的慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的保護(hù)作用。方法：采用腺嘌呤灌胃復(fù)制大鼠慢性腎衰模型，將大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、地塞米松組、白術(shù)多糖高劑量組、白術(shù)多糖低劑量組。給藥結(jié)束后，代謝籠動物單獨(dú)喂飼，收集12h尿液，期間禁食禁水，測定總尿量、尿素(BUN)、尿肌酐(CR)、12h尿蛋白(24hU-TP)含量，并測定腎功能指標(biāo)。結(jié)果：與模型對照組比較，白術(shù)多糖低劑量組和白術(shù)多糖高劑量組BUN水平明顯降低(P＜0.01或P＜0.05)，雙腎系數(shù)明顯下降(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)論：白術(shù)多糖對腺嘌呤誘發(fā)的慢性腎功能衰竭的大鼠腎臟具有一定的保護(hù)作用。

白術(shù)多糖；腺嘌呤；大鼠；慢性腎衰；尿素；腎臟系數(shù)

白術(shù)為菊科植物，味苦、甘；性溫；歸胃、脾經(jīng)[1]；有利尿、抗腫瘤、抗菌、消炎、抗糖尿病、抗衰老等作用[1-10]。平江白術(shù)又名“冬術(shù)”、“于術(shù)”，盛產(chǎn)于平江縣三陽、安定、嘉義、長壽、金龍、鐘洞等地區(qū)，故稱為平術(shù)或平白術(shù)[11-12]。白術(shù)作為一種重要的中藥材，在平江縣已有400多年人工栽培歷史，久負(fù)盛名。明代嘉靖《岳州府志》載：“平江產(chǎn)有白術(shù)(以紫花者為上)”。由此可見，平白術(shù)早已是平江的傳統(tǒng)地方特有珍貴中藥材。藥理研究發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能和抗腫瘤的作用。研究證實(shí)白術(shù)可呈現(xiàn)顯著和持續(xù)的利尿作用，其有效成分為β桉葉油醇，能很強(qiáng)地抑制Na+-K+-ATP酶的磷酸化反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)對湖南平江產(chǎn)白術(shù)——平白術(shù)進(jìn)行研究，著重研究白術(shù)多糖對腺嘌呤致大鼠腎衰竭有顯著的保護(hù)作用，觀察不同濃度的白術(shù)多糖對腎衰竭大鼠腎功能的影響，為白術(shù)多糖的進(jìn)一步開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

表1 白術(shù)多糖對腺嘌呤致CRF大鼠腎功能的影響Table 1 Effect of AP on renal function of rats induced by adenine

白術(shù)多糖，由湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系邱細(xì)敏教授提供，采用70%乙醇溶液提取堿沉法，臨用前用生理鹽水超聲溶解；健康雄性SD大鼠(225±25)g由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證：SCK(湘) 2003-003。

醋酸地塞米松片(批號：0712272) 安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司；腺嘌呤(批號：20040415) 中國惠興生化試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AUT-560全自動生化分析儀 日本Olympus公司；電子分析天平 北京賽多利斯天平有限公司；YGL-16M高速臺式冷凍離心機(jī) 長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動物模型的建立

取健康雄性SD大鼠64只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)選出8只，作為正常對照組，以等體積蒸餾水灌胃作對照。其他56只大鼠灌胃腺嘌呤懸濁液250mg/(kg bw·d)，連續(xù)造模21d，使大鼠產(chǎn)生類似于人的腎衰竭癥狀[13]。腺嘌呤懸濁液為腺嘌呤純品與蒸餾水混合后加入少許預(yù)先溶脹好的羧甲基纖維素鈉助懸制得。

1.3.2 動物分組

造模5 d后，將5 6只大鼠隨機(jī)分成4組：模型對照組、地塞米松組、低濃度白術(shù)多糖組、高濃度白術(shù)多糖組，每組1 4只。其中模型對照組和正常對照組灌胃等體積蒸餾水。地塞米松組灌胃地塞米松0.1mg/(kg bw·d)，CPL組灌胃低濃度多糖 400 mg/ (kg bw·d)，CPH組灌胃高濃度多糖 800mg/(kg bw·d)，連續(xù)給藥21d。

1.3.3 指標(biāo)檢測

給藥結(jié)束后，代謝籠動物單喂，分批次收集12h尿液，期間禁食禁水，測定總尿量。每個(gè)樣品都用取樣器精確吸取1mL尿液于帶塞離心管中密封冷藏，于中南大學(xué)湘雅附三醫(yī)院檢測尿素(BUN)、尿肌酐(CR)、24h尿蛋白(24hU-TP)含量。眼眶后靜脈叢采血，離心取血清，測定血清肌酐(Scr)、血尿素氮(B-BUN)、血清總蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量(由中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院檢驗(yàn)斜測定)，測定腎功能指標(biāo)。脫頸椎處死大鼠，剖腹取出腎臟，作病理檢查。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在LENOVO-compatible PC 機(jī)Windows XP系統(tǒng)下采用Excel2009進(jìn)行計(jì)算和6SQ統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并用T-test來分析組間差異的顯著性。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 白術(shù)多糖對腺嘌呤致腎衰竭大鼠12h總尿量的影響

由表1可見，與正常對照組相比，其他4組12h排尿量均有增多，且有極顯著性差異(P＜0.01)；提示腺嘌呤可對大鼠造成明顯損傷；地塞米松組與模型對照組有顯著性差異(P＜0.05)。低濃度白術(shù)多糖組及高濃度白術(shù)多糖組作用后可減少尿量，但與模型對照組相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 白術(shù)多糖對大鼠腎臟系數(shù)和形態(tài)的影響

表2 白術(shù)多糖對大鼠腎臟系數(shù)的影響Table 2 Effect of AP on kidney coefficient of rats induced by adenine

由表2可知，模型對照組與正常對照組比較，模型對照組大鼠的雙腎系數(shù)顯著增大(P＜0.01)，提示腺嘌呤可致大鼠雙腎系數(shù)增大，表明造成大鼠腎衰模型。低濃度白術(shù)多糖組及高濃度白術(shù)多糖組與模型對照組比較，其雙腎系數(shù)均有明顯減小(P＜0.01)，說明白術(shù)多糖對腺嘌呤致大鼠腎衰竭有一定的保護(hù)作用。

2.3 白術(shù)多糖對腺嘌呤致慢性腎衰模型大鼠腎功能的影響

如表1所示，正常大鼠尿液中尿素和尿肌酐的含量

明顯多于模型對照組(P＜0.01)，提示腺嘌呤可致大鼠腎功能損害；低濃度白術(shù)多糖組及高濃度白術(shù)多糖組與模型對照組比較，對尿素的影響非常顯著，可極顯著性地降低腎衰大鼠尿液中的尿素水平(P＜0.01)，說明白術(shù)多糖對腺嘌呤致大鼠腎衰竭有一定的保護(hù)作用；12h尿蛋白的影響雖有差異性，但模型對照組與正常對照組及各給藥組的區(qū)別似乎缺少規(guī)律，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)分析其原因。

3 討 論

腎小管間質(zhì)損傷是導(dǎo)致腎衰竭的主要因素。正常情況下，大鼠的雙腎指數(shù)相對較小，不到1%，即正常大鼠的雙腎質(zhì)量不到其體質(zhì)量的1%。而經(jīng)過腺嘌呤誘導(dǎo)，造成大鼠腎衰后，其雙腎系數(shù)增至原來的4倍以上。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用腺嘌呤誘導(dǎo)大鼠腎衰，結(jié)果表明造模成功，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)一致[14-17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低濃度多糖和高濃度多糖能降低腎衰竭大鼠的尿素氮水平，說明低濃度多糖和高濃度多糖可能抑制病變腎臟濾過屏障泌尿功能和腎小管重吸收功能的衰退。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，低濃度白術(shù)多糖和高濃度白術(shù)多糖提高腎衰竭大鼠代償性尿量，延長高尿量時(shí)間，減輕腺嘌呤代謝物在腎小管中形成的結(jié)晶沉積，說明低濃度多糖和高濃度多糖可以增加腎衰竭腎臟循環(huán)血液量，改善腎小管間質(zhì)區(qū)的缺氧狀態(tài)和腎小管細(xì)胞的營養(yǎng)，抑制Na+-K+-ATP酶的磷酸化反應(yīng)。低濃度多糖和高濃度多糖抑制腎衰竭大鼠腎臟的病理變化，阻止病變腎臟的增生，可能通過抗氧化作用抑制腎臟系膜細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞的增生和細(xì)胞間質(zhì)物質(zhì)(ECM)的積累，降低病理大鼠血Scr、BUN和阻止腎小球數(shù)的減少，其機(jī)制可能是與抑制Na+-K+-ATP的磷酸化反應(yīng)增大腎臟血流量，促進(jìn)腎臟中腺嘌呤代謝物等毒性物質(zhì)的排泄有關(guān)。有關(guān)低濃度多糖和高濃度多糖防治腎衰竭的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Protective Effect of Atractylodes rhizom Polysaccharides on Adenine-induced Renal Failure in Rats

FENG Xing1，QIU Xi-min1，HUANG Ya-lin1，LIU Xiong-zhi1，LI Sai1，ZHENG Ni2
(1. Medical College, Hunan Normal University, Changsha 410006, China；2. Zhu Jiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China)

Objective∶ To investigate the preventive effect of Atractylodes rhizome polysaccharides (AP) on chronic renal failure (CRF) rats-induced by adenine. Methods∶ CRF model was induced by adenine. The rats were randomized into five groups, which were designated as control group, model group, groups administered with AP at the high (APH) and low dosages (APL), and dexamethasone group. After the administration, the rats were fed in metabolism cage. The urine was collected during 12 h period without food or water. The total volume of urine, blood urine nitrogen (BUN), urine creatinine (CR), and 12-hour urine protein (12 h U-TP) were determined. Meanwhile, renal index was also evaluated. Results∶ Compared with the model group, BUN levels of CPL and CPH groups exhibited a significant decrease (P＜0.01 or P＜0.05). Similarly, a significant declined coefficient was also observed (P＜0.01, P＜0.05). Conclusion∶ AP revealed a promising preventive effect on renal failure in rats.

Atractylodes rhizome polysaccharides (AP)；adenine；renal failure；rats；BUN；renal index

R965.1

A

1002-6630(2010)09-0276-03

2009-08-03

湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(08JJ3024)

馮星(1973—)，男，副教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物活性研究。E-mail：fengxing01@hotmail.com