葛蓓蕾,陳小讓

(1.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心;2.鄭州大學(xué)藥學(xué)院,河南鄭州450052)

惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康,隨著對腫瘤形成機制研究的深入,化療在腫瘤治療中日益重要。由于傳統(tǒng)的抗腫瘤藥價格昂貴,且對機體均有明顯的毒副作用,因此,研究開發(fā)廉價、低毒的抗腫瘤藥物已經(jīng)成為當(dāng)前面臨的迫切問題。本實驗所用新型八核銅配合物乳劑是由鄭州大學(xué)化學(xué)系無機教研室合成的新型銅絡(luò)合物的納米材料,具有特殊的雙螺旋結(jié)構(gòu),它以抗高血壓藥替米沙坦為配體(見圖1),和8個銅整合在一起的相對分子質(zhì)量為8 723的大分子化合物,其結(jié)構(gòu)式如圖2。其在甲醇、乙醇中的溶解度很小,在二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)、二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)、乙腈、二氯甲烷中溶解度較大。用一定比例的DMSO促溶后,溶解在0.1 mmol?L-1Tris-HCl中比較穩(wěn)定,該溶液在238 nm和296 nm處有較大的吸收,可以用紫外分光光度法定量。

初步的藥效學(xué)和體外篩選實驗已證明該藥具有一定的抗腫瘤活性,細胞毒實驗和周期實驗表明八核銅配合物乳劑是一種作用于細胞周期的藥物。該實驗進行急性毒性實驗研究,初步探討其毒性反應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗動物:SPF級KM小鼠80只,體質(zhì)量(20.0±2.0)g,雌雄各半,河南省實驗動物中心提供(動物生產(chǎn)合格證編號:SCXK(豫)2005—0001)。實驗儀器:1 ml一次性注射器、電子秤、小鼠固定器、碘酒、棉球、鑷子、解剖剪等。藥品:八核金屬銅配合物乳劑:鄭州大學(xué)無機教研室合成。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)試驗 SPF級KM小鼠10只(雌雄各半),自由飲水、進食,尾靜脈注射最大濃度0.2 g?L-1和最大劑量0.4ml一次給藥[1],連續(xù)觀察7 d并記錄,發(fā)現(xiàn)小鼠的生命狀況良好,無死亡現(xiàn)象,故無法測出LD50,改測定最大耐受量(MTD)。

1.2.2 急性毒性實驗 SPF級KM小鼠50只,雌雄各半。自由進食和飲水,環(huán)境溫度20～24℃,相對濕度45%～50%,尾靜脈注射給藥。以0.2 ml∕10 g為最大給藥容積,共設(shè)4個劑量組及一個空白對照組,每組10只,雌雄各半。藥物濃度分別為1.0 g?L-1、0.5 g?L-1、0.05 g?L-1、0.01 g?L-1。給藥后連續(xù)觀察7d,第1、3、5、7 d稱動物體重及觀察每組進食量并記錄,第7 d將小鼠用頸椎脫臼法處死,觀察動物臟器情況并記錄。

1.2.3 最大耐受量實驗 SPF級KM小鼠20只(雌雄各半),自由飲水、進食,尾靜脈注射最大濃度0.2 g?L-1和最大劑量0.4ml,一日內(nèi)間隔6 h 3次給藥,給藥后連續(xù)觀察7 d,記錄給藥后動物的反應(yīng)情況[2]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0 for windows統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察 經(jīng)尾靜脈給藥0.5～1 h后出現(xiàn)自主活動減少、靜臥不動,閉目、反應(yīng)遲鈍[3],6 h后,0.05 g?L-1和0.01 g?L-1組多數(shù)小鼠活動恢復(fù)正常;24 h后,1.0 g?L-1和0.5 g?L-1組多數(shù)小鼠活動恢復(fù)正常,整個過程中沒有出現(xiàn)驚厥、抽搐。無瞳孔大小改變,無腺體分泌增加,無共濟失調(diào)。呼吸平穩(wěn),無異常鼻腔分泌物。大便質(zhì)中,量中,無嘔吐。尿色、尿量正常。背毛正常。7 d內(nèi)小鼠全部存活,7 d后處死動物并解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器,未發(fā)現(xiàn)有腫脹、萎縮、出血、顏色異常、粘連、硬化等異常改變,與空白對照組比較無明顯差異。

2.2 體質(zhì)量 八核銅配合物乳劑尾靜脈給藥對小鼠的生長發(fā)育無明顯影響。與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),見表1和2。

2.3 進食量

表1 八核銅配合物乳劑對實驗動物體質(zhì)量的影響(±s,n=10)

表1 八核銅配合物乳劑對實驗動物體質(zhì)量的影響(±s,n=10)

1 1.00 19.59±0.39 19.91±0.29 22.41±0.26 24.44±0.34 24.92±0.28 2 0.50 18.66±0.42 19.26±0.53 21.39±0.77 22.58±0.81 23.12±0.92 3 0.10 18.88±0.50 20.22±0.57 22.79±0.52 24.29±0.62 25.22±0.60 4 0.05 19.28±0.34 20.47±0.34 22.66±0.45 24.24±0.66 25.33±0.76對照0.00 19.32±0.34 19.95±0.40 21.62±0.34 23.18±0.32 23.89±0.38

表2 八核銅配合物乳劑對實驗動物體質(zhì)量的增加量的影響(±s,n=10)

表2 八核銅配合物乳劑對實驗動物體質(zhì)量的增加量的影響(±s,n=10)

1 1.00 0.32±0.25 1.32±0.14 0.96±0.20 0.48±0.13 2 0.50 0.60±0.30 1.25±0.25 0.10±0.19 0.54±0.20 3 0.10 1.34±0.22 1.53±0.14 0.34±0.20 0.93±0.12 4 0.05 1.19±0.29 1.33±0.16 0.47±0.12 1.09±0.17對照0.00 0.63±0.27 1.16±0.15 0.40±0.11 0.71±0.13

表3 八核銅配合物乳劑對實驗動物進食量的影響(±s,n=10)

表3 八核銅配合物乳劑對實驗動物進食量的影響(±s,n=10)

1 1.00 4.70±0.58 5.84±0.70 5.47±0.10 4.27±0.23 2 0.50 3.89±0.35 5.15±0.35 4.12±0.70 3.57±0.31 3 0.10 3.54±0.08 6.03±1.11 4.81±0.41 4.21±0.21 4 0.05 4.77±0.41 6.13±0.17 5.31±0.05 5.01±0.27對照0.00 3.25±0.45 5.08±0.42 4.90±0.24 4.70±0.28

3 討論

預(yù)實驗結(jié)果顯示該八核銅配合物乳劑的毒性低,未測出LD50,測定結(jié)果表明,該實驗藥物4種濃度經(jīng)尾靜脈一次性最大劑量給藥后觀察7 d均未見任何明顯毒性反應(yīng),處死小鼠解剖后肉眼觀察肝、腎亦未發(fā)現(xiàn)異常改變。急性毒性實驗無小鼠死亡,給藥各組小鼠均未出現(xiàn)急性中毒癥狀和表現(xiàn),并且毛皮光滑,進食、體質(zhì)量增長及大小便正常。處死動物并解剖,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器,未發(fā)現(xiàn)有腫脹、萎縮、出血、顏色異常、粘連、硬化等異常改變[4],與空白對照組比較無明顯差異。

實驗結(jié)果說明該八核銅配合物乳劑的毒性低,可作為一種安全、低毒的藥物制劑,在新型抗腫瘤藥物的開發(fā)上具有廣闊的前景。

[1] 徐淑云,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學(xué)[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.

[2] 孫敬方.動物實驗方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001.

[3] 董晶瑩,劉 寧.Fe3O4納米顆粒的制備及其LD50的測定[J].毒理學(xué)雜志,2008,22(2):111-113.

[4] 牟 楠,蕭美茹.消癥注射液對大鼠的急性毒性實驗研究[J].中國實用醫(yī)藥,2008,3(2):48-49.