王 敏,蔣 強,劉賽云,程文兵,張明霞

(深圳市第三人民醫(yī)院肝研所,廣東 深圳 518020)

結(jié)核病是全世界范圍內(nèi)最普遍的傳染性疾病之一,近十年來,全球結(jié)核病的發(fā)病率呈增高趨勢。全球約有 1/3人口感染結(jié)核桿菌,其中約 900萬人為活動性結(jié)核病[1]。結(jié)核桿菌感染率很高,但發(fā)病率卻較低,表明結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸不僅與感染的細菌量及其毒力等因素有關(guān),且取決于機體免疫功能。結(jié)核桿菌是胞內(nèi)寄生菌,機體抗結(jié)核免疫主要是細胞免疫,決定細胞免疫強弱的主要是 T淋巴細胞亞群的數(shù)量及功能。我們應(yīng)用流式細胞儀對 92例肺結(jié)核患者及 54例健康人進行了 T淋巴細胞亞群檢測,現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下:

1 資料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 肺結(jié)核患者組 選取 2008年 1月至2009年 11月本院住院及門診確診患者 92例。其中男性 54例,女性 38例,年齡 18-59歲,平均 33.7歲。

1.1.2 健康對照組 54例健康成人標本來源于本院體檢中心。其中男性 23例,女性 31例,年齡18-58歲,平均 34.9歲。均衡性檢驗顯示,肺結(jié)核患者組與健康對照組兩組之間的年齡、性別差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.1.3 肺結(jié)核的診斷標準 (1)痰、胸腔積液結(jié)核分枝桿菌陽性或淋巴結(jié)、胸膜、肺組織活檢證實結(jié)核者;(2)有明顯結(jié)核中毒癥狀;(3)抗結(jié)核抗體(抗 TB-Ab-IgG)吸光度值≥0.30或蛋白純化衍生物(PPD)試驗中、強度陽性;(4)胸片有典型肺結(jié)核影像改變;(5)抗結(jié)核治療有效。具備上述診斷標準第 1項或 2-5項者,診斷為肺結(jié)核。所有患者均無慢性肝炎、腎病、腫瘤等影響免疫功能的疾病。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑 采用法國 Immunotech公司的三色熒光標記的單克隆抗體 CD4-FlTC/CD8-PE/CD3-PC5;OptiLyse C免洗溶血素原液;以及自備的PBS液體;空白對照組為鼠 IgG1-FTTC/IgG1-PE/IgG1-PC5。

1.2.2 儀器 使用 Coulter Epics XL流式細胞儀(美國 Beckman Coulter公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本處理 抽取外周靜脈血 2 ml,使用EDTA抗凝。每份標本編 3支試管,其中一管立即在SFM—2000血球分析儀上進行白細胞計數(shù)與分類。其余兩管中,一管加入三標的單克隆抗體 20μl,另一管中加入對照樣本量 20μl;每管各加入全血 100 μl,充分混勻,室溫下孵育 15 min;然后在每管中加入 OptiLyse C免洗溶血素 500μl,充分混勻,室溫下孵育 15 min;在每管中加入 PBS緩沖液 500μl,混勻,室溫下孵育 10 min。

1.3.2 對照組處理 以對照管作為空白定標,淋巴細胞設(shè)門,計算 5 000個淋巴細胞,記錄標本的陽性細胞百分率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 各數(shù)據(jù)以(x±s)表示,采用t檢驗,方差分析,判斷各組之間的相關(guān)程度,由SPSS 10.0軟件包完成統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 肺結(jié)核患者 T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果與性別、年齡的關(guān)系 見表 1、表 2。表 1說明經(jīng)統(tǒng)計分析,肺結(jié)核患者性別間 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。表 2說明經(jīng)統(tǒng)計分析,顯示成人肺結(jié)核患者各年齡組間 CD3、CD4、CD8、CD4/CD8差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 肺結(jié)核患者T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果與性別的關(guān)系(x±s)

表2 肺結(jié)核患者T淋巴細胞亞群檢測結(jié)果與年齡的關(guān)系(x±s)

2.2 肺結(jié)核患者與對照組 T淋巴細胞亞群的關(guān)系 見表 3。表 3說明經(jīng)統(tǒng)計分析,肺結(jié)核患者 T細胞亞群比較,除 CD8增高外,CD3、CD4、CD4/CD8均明顯降低,與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

表3 肺結(jié)核患者與對照組T淋巴細胞亞群數(shù)據(jù)對比分析(x±s)

3 討 論

結(jié)核桿菌是胞內(nèi)寄生菌,機體抗結(jié)核免疫主要是細胞免疫,決定細胞免疫強弱的主要是 T淋巴細胞亞群數(shù)量及功能。自 1979年 Kung和 Goldstein等[2]首次報道 T細胞單克隆抗體 OKT系列制備成功以來,對人 T細胞的研究提供了有力的工具。研究發(fā)現(xiàn) T淋巴細胞在機體免疫過程中起著中心樞紐的作用,它不僅發(fā)揮著細胞免疫功能,而且是體液免疫不可缺少的組成部分。正常免疫應(yīng)答的形成有賴于 T淋巴細胞亞群(主要是CD4與 CD8)之間的相互促進或相互制約。輔助性 T淋巴細胞(CD4)和抑制性 T細胞(CD8)是免疫調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié)。Syriala等[3]研究表明,CD4/CD8比值降低是疾病嚴重和不良的重要指標之一,機體對結(jié)核桿菌的免疫以細胞免疫為主,通過效應(yīng) T淋巴細胞直接殺滅結(jié)核桿菌,輔助性 T淋巴細胞可促進效應(yīng) T淋巴細胞的殺菌功能,并釋放大量淋巴因子發(fā)揮抗結(jié)核作用。抑制性T淋巴細胞抑制機體的細胞和體液免疫功能,導(dǎo)致機體免疫力下降。本文結(jié)果顯示,肺結(jié)核患者與健康對照組相比 CD3、CD4、CD4/CD8明顯降低,而 CD8明顯增高(P＜0.05),與有關(guān)報道一致[4]。提示結(jié)核發(fā)病與機體免疫力下降有關(guān),免疫功能正常的機體感染結(jié)核分枝桿菌后,可誘導(dǎo) T細胞活化成為致敏的 T淋巴細胞產(chǎn)生各種細胞因子,從而殺滅結(jié)核分枝桿菌,使機體免于發(fā)病,使病灶局限。若免疫功能異常,則可導(dǎo)致發(fā)病或病灶惡化[5]。肺結(jié)核患者痰菌陽性是結(jié)核病進展、結(jié)核病變開放的重要指標,從上面的實驗結(jié)果可看出,結(jié)核病患者的 CD3、CD4陽性細胞數(shù)及 CD4/CD8比值均低于正常對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),尤其是 CD4/CD8陽性細胞比值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果表明 T淋巴細胞亞群在一定程度上可反映結(jié)核病患者的細胞免疫水平,檢測病人外周血中 T淋巴細胞亞群數(shù)及比例可以判斷受檢者的細胞免疫水平,特別是 CD4/CD8比值比單項 CD3、CD4、CD8敏感。可能是由于結(jié)核病患者免疫力低下,從而導(dǎo)致 CD4/CD8陽性細胞比例失調(diào),病情嚴重患者的 CD4/CD8陽性細胞比值長期降低。CD4下降使效應(yīng) T細胞殺菌活性降低,與殺菌有關(guān)的淋巴因子分泌減少,CD8升高直接抑制機體免疫力,使結(jié)核菌繁殖而發(fā)病。

本文結(jié)果表明,T淋巴細胞亞群變化可作為判斷肺結(jié)核免疫功能的指標之一,相信隨著對結(jié)核病的發(fā)病及免疫病理損傷機理研究的深入,將在臨床診斷、預(yù)后判斷及預(yù)防和治療中,發(fā)揮重要作用。

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