王燁軍,徐奕鼎,黃建琴,王文杰,方吳云
(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,祁門 245600;2.國家茶樹育種安徽分中心,祁門 245600)
酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法測定茶多酚的比較
王燁軍1,2,徐奕鼎1,2,黃建琴1,2,王文杰1,2,方吳云1,2
(1.安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,祁門 245600;2.國家茶樹育種安徽分中心,祁門 245600)
采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法對26個茶樣進(jìn)行測試,比較兩種方法所得數(shù)據(jù)的差異,結(jié)果表明:酒石酸亞鐵比色法雖然快速、簡便、重現(xiàn)性好,但與高錳酸鉀滴定法相比結(jié)果要高5.48~37.88%不等,高錳酸鉀滴定法相對而言數(shù)據(jù)更接近真實值。
茶多酚;茶水浸出物;酒石酸亞鐵比色法;高錳酸鉀滴定法
茶多酚(tea polyphenol,TP)是茶葉的主要有效成分之一,具有抗衰老、抗癌、清除人體自由基、抗輻射、降血糖血脂等多種生物學(xué)活性。茶多酚測定方法較多,酒石酸亞鐵比色法為國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法(GB8313-87~GB8313-2003),具有快速、簡便、重現(xiàn)性好的特點。但酒石酸亞鐵比色法做出的數(shù)據(jù)往往偏高[1,2]。因此,為了探討測定數(shù)據(jù)偏高的原因,于2009年6月2日至4日,分別對26個茶樣采用酒石酸亞鐵比色法和高錳酸鉀滴定法進(jìn)行測試,比較兩種方法所得數(shù)據(jù)的差異,為茶葉多酚檢測推薦相對準(zhǔn)確、簡便、通用的方法。
1.1 材料共測試樣品26個,其中1~17號樣為“國家級茶樹良種鳧早2號高效繁育推廣”送檢樣品;18~26號由國家科技支撐項目“主要經(jīng)濟(jì)作物減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”支項目“茶樹減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”提供。茶葉樣品采制參照《茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》[3]。2009年6月2日至6月4日進(jìn)行茶多酚測定。
1.2 儀器與試劑UV-2550紫外-可見分光光度計(日本島津公司生產(chǎn)),751、721分光光度計,所用試劑均為AR級。
1.3 測定方法茶多酚含量檢測采用酒石酸亞鐵比色法[4]和高錳酸鉀滴定法[5]。
2.1不同日期酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果比較
表1 不同日期酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果
表1為不同日期、由不同檢測人員采用酒石酸亞鐵比色法和UV-2550測定4個茶葉樣品所得結(jié)果。由表1知:6月2日和4日采用酒石酸亞鐵比色法所得結(jié)果差距不大,都在允許誤差范圍之內(nèi),尤其是11、12和25號樣變異系數(shù)≤0.28。可見酒石酸亞鐵比色法和測定儀器的穩(wěn)定性都很好,茶葉樣品多酚含量在兩日內(nèi)也沒因儲放問題而發(fā)生變化。2.2不同儀器酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果比較
表2 不同儀器酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果
表2為6月4日,采用酒石酸亞鐵比色法并利用UV-2550、751、721分光光度計三種儀器進(jìn)行比色所得結(jié)果。結(jié)果表明:采用三種儀器測定的數(shù)據(jù)變異系數(shù)以11號樣最大,12號樣最小,分別為2.43%和1.33%??梢娋剖醽嗚F比色法所得數(shù)據(jù)偏高也不是因為儀器精度原因所造成的。
2.3 不同批次試劑酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果比較
表3為原有試劑和新購試劑,采用UV-2550于6月4測試所得結(jié)果,試劑1為6月2日測試所配試劑,試劑2為新購藥品于6月4日所配試劑。由于原配試劑開瓶時間較長,考慮到試劑純度問題,故而新購一批試劑用于測試。結(jié)果表明:試劑1測試結(jié)果普遍高于試劑2的測試結(jié)果,變異系數(shù)以26號樣最高,達(dá)到了2.72%,以25號樣最低,為1.97%,整體比較穩(wěn)定??梢娫噭?由于存放時間影響,純度有所下降,但兩批試劑測試結(jié)果的變異系數(shù)在1.97~2.72%之間,屬于正常波動。
表3 試劑對酒石酸亞鐵比色法結(jié)果的影響
2.4高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果比較
表5為6月2日采用酒石酸亞鐵比色法(比色儀器為UV-2550)和6月4日采用高錳酸鉀滴定法所得結(jié)果。由表1知,茶葉樣品多酚含量在兩日內(nèi)沒有因儲放問題而發(fā)生變化,故2組數(shù)據(jù)可以進(jìn)行比較。由表5可知,酒石酸亞鐵比色法測得結(jié)果普遍要比高錳酸鉀滴定法測的結(jié)果要高5.48~37.88%不等。尤其是18號樣酒石酸亞鐵比色法的結(jié)果高達(dá)39.93%,接近42.55%的水浸出物含量。此外,18~26號樣酒石酸亞鐵比色法測得結(jié)果比高錳酸鉀滴定法測的結(jié)果高5.48~12.99%,可能對于蒸青樣2種方法的差異度要小。
表4 水浸出物含量
表5 高錳酸鉀滴定法與酒石酸亞鐵比色法測定結(jié)果
酒石酸亞鐵比色法是利用多酚類在一定pH值條件下與酒石酸亞鐵形成藍(lán)紫色絡(luò)合物[6],用分光光度法定量,該法重復(fù)性好。而高錳酸鉀滴定法則除了能氧化茶葉中的多酚類物質(zhì)外,還能氧化部分非多酚類物質(zhì),如維生素C(其含量不及1%)[7]。理論上講高錳酸鉀滴定法測定的茶多酚含量應(yīng)該比茶多酚的實際含量要稍高,然而通過測定26個茶樣的茶多酚含量發(fā)現(xiàn):酒石酸亞鐵比色法測定的多酚含量卻遠(yuǎn)高于高錳酸鉀滴定法測定茶多酚的含量,幅度在5.48~37.88%不等。究其原因可能是:①茶葉中不同多酚的組分對酒石酸亞鐵的呈色能力有差異。如兒茶素組分中具有連位羥基的呈色能力比具有鄰位羥基的呈色強(qiáng)3倍,導(dǎo)致含連位羥基兒茶素含量高的綠茶或茶葉提取物的多酚測定結(jié)果偏高,尤其是兒茶素含量超過70%,用此方法測定的結(jié)果超過100%[6]。②酒石酸亞鐵比色法的換算系數(shù)是否準(zhǔn)確。目前酒石酸亞鐵比色法的換算系數(shù)采用3.913,用此系數(shù)測定某些品種茶葉樣品時,有的數(shù)值明顯偏高,因此換算系數(shù)采用3.913是否可取,值得研究。③酒石酸亞鐵比色法測得的結(jié)果偏高可能是因為酒石酸亞鐵比色法是測定茶葉中酚類物質(zhì)總量[2]。由表4、表5發(fā)現(xiàn)有的多酚的百分含量幾乎接近水浸出物含量,這與實際含量不相符,因為茶葉水浸出物中除了含有多酚類物質(zhì)外,還有蛋白質(zhì)、咖啡堿、氨基酸等多種組分。
通過以上分析可知:酒石酸亞鐵比色法雖然重復(fù)性較好,數(shù)據(jù)穩(wěn)定,但所得結(jié)果差異較大,而高錳酸鉀滴定法所得數(shù)據(jù)相對而言更接近真實含量,至于滴定終點難以把握的問題,如果利用自動電位滴定儀能較好地解決。
[1] 陳惠衡,施玲,劉芳,等.酒石酸比色法和Folin-Denis 法測定茶多酚的比較[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2008,42(4):272~274.
[2] 黃皓,毛志方,涂云飛,等.兩種方法測定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國茶葉加工,2009,(2):43~44.
[3] 陳亮,楊亞軍,虞富蓮,等.茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn),中國農(nóng)業(yè)出版社,2005年10月第一版:70~72.
[4] GB/T8313-2002 茶 茶多酚的測定[S].
[5] 商業(yè)部茶葉畜產(chǎn)局,商業(yè)部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1989:256~257.
[6] 商業(yè)部茶葉畜產(chǎn)局,商業(yè)部杭州茶葉加工研究所.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1989:256~258.
[7] 劉仲華,黃建安,王增盛,等.兒茶素提取工藝技術(shù)研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1997,23:537~542
TS207.3
B
1006-5768(2010)02-0061-03
2009-12-03
國家科技支撐項目“主要經(jīng)濟(jì)作物減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”支項目“茶樹減災(zāi)避災(zāi)關(guān)鍵技術(shù)集成與示范”(2008BADC0B03)