周勁光 楊霄鵬

1)河南大學(xué)淮河醫(yī)院臨床教學(xué)辦 開封 475000 2)鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450014

為探討柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯以及非小柴胡湯部分(即龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃)抗抑郁作用的差別,本實驗采用慢性應(yīng)激的方法造成大鼠抑郁模型,觀察不同藥物組成對慢性應(yīng)激引起的動物行為的變化。

1 材料

1.1 藥物與試劑 柴胡加龍骨牡蠣湯中各藥材(去鉛丹)均購自南京市金陵大藥房,包括人參、桂枝、半夏、茯苓、黃芩、柴胡、大黃、甘草、牡蠣、龍骨、姜、大棗。

柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯和龍骨、牡蠣、桂枝、茯苓、大黃方(龍牡桂苓軍)均按原方比例配方。用10倍量水煎煮2次,并濾液蒸干,制備成浸膏凍干粉,柴胡加龍骨牡蠣湯全方、小柴胡湯、龍骨牡蠣軍的獲得率分別為16.9%、19.8%及12.3%。各凍干粉放于-20℃冰箱里儲存?zhèn)溆?臨用時用蒸餾水配成所需濃度。

鹽酸氟西汀膠囊(Fluoxetine Hydrochloride Capsules,FLU)為加拿大奧貝泰克制藥有限公司生產(chǎn),批號HD0560。1.2 動物 SD大鼠,雄性,體質(zhì)量180～200 g,由中國藥科大學(xué)實驗動物中心提供。動物分籠飼養(yǎng),保持晝夜節(jié)律,室溫(22±1)℃,食水自由。

2 方法

2.1 動物分組、造模及給藥方法 所有大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)7d后,用Open-Field法[1]作行為學(xué)評分,選擇得分相近的90只大鼠隨機(jī)分為9組,即正常組(Normal);模型組(M ode l);陽性藥對照組(FLU,20 mg?kg-1);CLMD高、低(500、200 mg?kg-1)劑量組;小柴胡湯高、低(800、320 mg?kg-1)劑量組;龍牡桂苓軍組高、低(200、80 mg?kg-1)劑量組。除正常組外,其余各組均連續(xù)接受各種不同的應(yīng)激以復(fù)制慢性應(yīng)激抑郁模型。動物模型根據(jù)文獻(xiàn)[2]方法改進(jìn),每天隨機(jī)選取以下應(yīng)激中的任意一種:冷水游泳(4℃,5 m in)、熱應(yīng)激(45℃,5 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)、夾尾(1 m in)、水平搖晃(60 HZ,15 min)和晝夜顛倒等刺激,平均每種刺激各3次,使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生,以避免發(fā)生適應(yīng)性。各組每日上午8:00給藥,連續(xù)21 d,正常組和模型組給予等量蒸餾水。各組動物于1 d、7 d、14 d、21 d稱體質(zhì)量。

2.2 行為學(xué)觀察指標(biāo)

2.2.1 開野實驗[3]:所有動物于21 d后1～2 h,置于安靜、黑暗的屋子里進(jìn)行實驗。水平運(yùn)動得分:大鼠置于敞箱中央格,以穿越1格為1分(四爪均進(jìn)入方格才計數(shù));垂直運(yùn)動得分:兩前爪騰空或攀附墻壁次數(shù)。水平活動得分反映大鼠的運(yùn)動活動性水平;垂直活動得分則反映其興趣高低。

2.2.2 糖水消耗實驗[4]:所有大鼠于實驗d 19起禁食水24 h(期間灌胃1次),于20d予食物及1%蔗糖水溶液200m L,觀測大鼠在24 h內(nèi)的飲用蔗糖水溶液量。比較正常組大鼠、模型組以及各給藥組大鼠在糖水消耗及糖水偏愛方面的差異。

糖水偏愛(Sucrose Preference,SP)以蔗糖水溶液的消耗量(m L)/總液體的消耗量(m L)×100%表示。

2.3 各組大鼠海馬比值的測定 實驗最后1 d各組大鼠稱質(zhì)量,股動脈取血處死,取雙側(cè)的海馬,稱質(zhì)量。取海馬與大腦質(zhì)量的比值,以消除各組體質(zhì)量差異的影響。

2.4 各組大鼠腎上腺指數(shù)的測定 實驗最后1 d各組大鼠稱質(zhì)量,股動脈取血處死,剖開腹腔,把腎上腺連同周圍少量脂肪組織一起摘出,浸入生理鹽水中洗凈附著的血液,并將殘余的脂肪組織剔除干凈,用濾紙吸干表面水份,迅速稱質(zhì)量。

3 結(jié)果

3.1 對動物行為學(xué)指標(biāo)的影響

3.1.1 對開野實驗的影響:見表1。經(jīng)過21 d不可預(yù)見性慢性應(yīng)激,模型組與空白組相比較,大鼠的水平運(yùn)動、垂直運(yùn)動均明顯減少;與模型組相比,氟西汀、柴胡加龍骨牡蠣湯(全方組)高、低劑量組及龍牡桂苓軍高劑量組均能明顯增加大鼠的水平得分、垂直得分,高劑量小柴胡湯組的水平得分明顯增加。

3.1.2 對糖水消耗試驗的影響:見表1。模型組與空白組相比,24 h糖水消耗量明顯減少;柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組、小柴胡湯高劑量組以及氟西汀組可顯著增加24 h糖水消耗量。

3.2 對海馬比值的影響 見表1。與空白組相比,模型組的海馬體積明顯減小(P＜0.01),提示慢性應(yīng)激可造成大鼠海馬的縮小。氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組以及龍牡桂苓軍高低劑量組能明顯對抗慢性應(yīng)激大鼠的海馬萎縮。

3.3 對腎上腺指數(shù)的影響 見表1。模型組與空白組相比,腎上腺指數(shù)明顯升高,氟西汀組、柴胡加龍骨牡蠣湯高低劑量組、龍牡桂苓軍高低劑量組可明顯降低慢性應(yīng)激大鼠的腎上腺指數(shù),龍牡桂苓軍低劑量組的效果尤為明顯。

4 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為,抑郁癥屬郁證范疇。由情志不舒,肝氣郁結(jié),漸致五臟不和,化火、生痰、瘀阻、耗氣、傷陰等而致,臨床多從肝臟論治,常用柴胡劑。其中柴胡加龍骨牡蠣湯被認(rèn)為是最適合于治療抑郁癥的古方之一,甚至有“抑郁狀態(tài)為柴胡加龍骨牡蠣湯之證”之說[5]。雖然柴胡加龍骨牡蠣湯是由小柴胡湯演變而來的,但是臨床上鮮有用小柴胡湯原方治療抑郁癥的報道。抑郁癥的病因尚未徹底闡明,目前認(rèn)為慢性、低水平、長期的應(yīng)激源是促進(jìn)抑郁發(fā)生、加重病情的主要原因。慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型就是根據(jù)此理論依據(jù)建立,其特點是應(yīng)激因子的多變性和不可預(yù)見性,已成為國內(nèi)外學(xué)者探討抑郁癥的發(fā)病機(jī)制及抗抑郁劑作用機(jī)制而廣泛應(yīng)用的動物模型[6]。慢性應(yīng)激模型中大鼠活動減少、快感缺失與抑郁證患者表現(xiàn)出的情緒低落、興趣喪失有一定程度的相似性。海馬是在眾多腦區(qū)中被認(rèn)為與抑郁癥的關(guān)系最為密切的腦區(qū)之一。重癥抑郁病人左右側(cè)海馬較正常人顯著縮小,且縮小程度與抑郁持續(xù)時間呈正相關(guān)。Rubin等[7]研究發(fā)現(xiàn),與健康者相比,抑郁患者的腎上腺皮質(zhì)增生約38%,增生的程度與皮質(zhì)醇的濃度有關(guān),且隨著抑郁的恢復(fù),這種增生似乎也隨著皮質(zhì)醇的正?；鸩较?。

本實驗采用慢性應(yīng)激模型,通過大鼠活動能力、糖水消耗、腎上腺指數(shù)以及海馬體積的變化,考察了小柴胡湯、柴胡加龍骨牡蠣湯及龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃的抗抑郁作用。發(fā)現(xiàn)龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃與柴胡加龍骨牡蠣湯具有相似的抗抑郁作用,均能提高慢性應(yīng)激大鼠的水平運(yùn)動及垂直運(yùn)動、抵抗慢性應(yīng)激造成的快感缺失、抑制海馬體積的減小以及降低慢性應(yīng)激大鼠的腎上腺指數(shù),而小柴胡湯則沒有表現(xiàn)出明顯的抗抑郁作用。實驗提示龍骨牡蠣桂枝茯苓大黃部分可能是柴胡加龍骨牡蠣湯抗抑郁的主要有效部分,柴胡加龍骨牡蠣湯中抗抑郁作用的最佳配伍藥物組合還有待于進(jìn)一步的研究。

表1 柴胡加龍骨牡蠣湯及其相關(guān)組方對小鼠開野實驗、糖水消耗、海馬比值以及腎上腺指數(shù)的影響

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