江志強(qiáng),鮑 健,王茂龍,孫 揚(yáng),孫立江＊

(1青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,山東青島266003;2即墨市人民醫(yī)院)

研究證明[1],機(jī)體缺血再灌注損傷(IR)具有普遍性。上世紀(jì) 80年代,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[2]缺血預(yù)處理(IP)和缺血后處理(IPo)能增加動(dòng)物心臟和腎臟對(duì)缺血的耐受性。2008～2009年,我們以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,觀察IP和Ipo對(duì)其腎臟的保護(hù)作用,并進(jìn)行比較?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑 健康Wistar大鼠24只,體質(zhì)量 200～250 g,由青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)、NO、一氧化氮合酶(NOS)分型試劑盒由南京建成生物工程公司提供。

1.2 模型制備及動(dòng)物分組 腎缺血再灌注模型的制備參照文獻(xiàn)[3]進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前 12 h禁食,自由進(jìn)水,8%水合氯醛5m l/kg腹腔內(nèi)注射麻醉。麻醉后隨機(jī)分為4組,各6只：①假手術(shù)組(SO組)：常規(guī)消毒,取上腹正中切口,切開(kāi)腹壁各層,入腹后分別于結(jié)腸肝曲外側(cè)切開(kāi)腹膜暴露右側(cè)腎臟,游離腎蒂后切除右腎;與結(jié)腸脾曲外側(cè)切開(kāi)外側(cè)腹暴露左側(cè)腎臟,游離腎蒂,并游離輸尿管以避免損傷,暴露

45min,用NS紗布覆蓋。②IR組：在SO組基礎(chǔ)上用無(wú)損傷血管夾夾閉左腎動(dòng)脈(腎臟顏色變?yōu)榘导t色即可確認(rèn)阻斷成功),造成腎臟缺血45 min后,松開(kāi)動(dòng)脈夾,腎臟由暗紅色變?yōu)轷r紅色即可確認(rèn)血流恢復(fù)。夾閉和放開(kāi)腎蒂時(shí)腹腔內(nèi)各注射林格液20 ml/kg。③IP組：按Lee等[4]方法,在SO組基礎(chǔ)上造成腎臟持續(xù)缺血前先夾閉腎蒂8 min,再放開(kāi) 5 min,反復(fù)3次后,余操作同IR組。④IPo組：參考尹壽杰等[5]方法,夾閉腎蒂 45min后,反復(fù)6次灌注10 s、阻斷10 s,再完全恢復(fù)血流。余操作同IR組。24 h后在麻醉下腹主動(dòng)脈取血 5 ml,切取腎臟后處死大鼠。

1.3 觀測(cè)指標(biāo) 測(cè)定血清Cr、BUN,采用光電比色法測(cè)定血清NO水平。取腎組織加NS,用勻漿機(jī)制成10%的組織勻漿,用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA水平,黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較用單因素方差分析及q檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清Cr、BUN和NO水平比較 詳見(jiàn)表1。

表1 各組缺血再灌注后血清Cr、BUN、NO水平比較(±s)

表1 各組缺血再灌注后血清Cr、BUN、NO水平比較(±s)

注：與SO組比較,＊P＜0.05;與IR組比較,△P＜0.05

組別 Cr(μmol/L) BUN(mmol/L) NO(nmol/L) SO組 53.35±6.34 5.83±0.68 75.49±6.48 IR組 161.47±13.45＊ 19.85±2.74＊ 45.17±4.69＊IP組 100.77±6.76＊△13.13±1.35＊△ 53.37±9.44＊△IPo組 108.50±11.83＊△14.11±1.82＊△ 54.92±7.96＊△

2.2 各組腎組織中SOD、MDA水平比較 見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠缺血再灌注后腎組織中SOD、MDA水平比較(±s)

表2 各組大鼠缺血再灌注后腎組織中SOD、MDA水平比較(±s)

注：與SO組比較,＊P＜0.05;與IR組比較,△P＜0.05

組別 SOD(nmol/mg prot) MDA(U/mg prot) SO組 98.63±7.84 8.86±0.75 IR組 69.83±7.12＊ 17.64±0.56＊IP組 86.28±4.65＊△ 12.66±0.77＊△IPo組 88.43±5.09＊△ 13.16±0.67＊△

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選取對(duì) IR刺激敏感的雄性大鼠[6],并切除一側(cè)腎臟,避免了對(duì)側(cè)腎臟的代償作用[7]。IP由一個(gè)或幾個(gè)短暫的缺血和再灌注過(guò)程所產(chǎn)生。我們選擇的預(yù)處理時(shí)間為8min缺血和5min再灌注,共3個(gè)周期。IPo是新近應(yīng)用抗腎臟IR的一種機(jī)械性干預(yù)策略,在缺血發(fā)生后進(jìn)行,簡(jiǎn)單方便[8],但必須在再灌注1 min內(nèi)實(shí)施。本實(shí)驗(yàn)選擇的IPo方案為反復(fù)6次的10 s灌注、10 s阻斷,而后完全恢復(fù)腎臟血流。目前研究[9]認(rèn)為,多種因素參與了腎臟的IR,其中爆發(fā)式產(chǎn)生的氧自由基是引起其細(xì)胞生物分子結(jié)構(gòu)變化和細(xì)胞功能損傷的重要原因。細(xì)胞在缺血缺氧時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量氧自由基,細(xì)胞膜磷脂降解,產(chǎn)生大量炎性介質(zhì),趨化中性粒細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞或黏附于血管內(nèi)皮;中性粒細(xì)胞在參與炎性反應(yīng)時(shí)其本身又能釋放趨化物質(zhì),激活的中性粒細(xì)胞氧爆發(fā)增加,產(chǎn)生大量的自由基或溶酶體釋放加重組織損傷。SOD和MDA能較好地反映組織內(nèi)氧自由基水平及氧化損傷程度[10]。SOD可清除體內(nèi)過(guò)剩的氧自由基,其活力的高低間接反映了機(jī)體清除自由基的能力;MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的終末產(chǎn)物,檢測(cè)其水平可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度,并間接反映組織細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度;NO是重要的細(xì)胞內(nèi)信使,其下降與腎功能損害密切相關(guān)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與IR組比較,IP和IPo組血清Cr、BUN、NO水平均明顯降低,SOD和MDA水平明顯升高,說(shuō)明IP和IPo均可明顯降低腎功能損害和腎組織脂質(zhì)過(guò)氧化,但I(xiàn)P、IPo組腎功能損害和腎組織脂質(zhì)過(guò)氧化比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),說(shuō)明IP與IPo均可減輕大鼠腎臟IR,兩者效果相當(dāng)。

綜上所述,IP和IPo均能有效預(yù)防缺血再灌注造成的腎功能異常和組織損傷,兩者相比效果相當(dāng)(P＞0.05),而對(duì)于兩者是否具有疊加效應(yīng)本實(shí)驗(yàn)未涉及,其他學(xué)者對(duì)此存在爭(zhēng)論,可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)方法選擇的不同有關(guān)[11]。

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