高偉興,王志祥,張立國(guó),康紹叁,劉 健,王 磊,曹鳳宏,李曉強(qiáng)

(1華北煤炭醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,河北唐山 063000;2唐山工人醫(yī)院)

Livin是新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白(IAP)家族成員之一,研究表明[1～3],Livin在多種腫瘤細(xì)胞中呈高度表達(dá),與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系。2007年 8月 ～2009年 12月,我們采用免疫組化法檢測(cè)膀胱癌組織中Livin的表達(dá)情況,探討Livin與膀胱癌的病理分級(jí)、臨床分期、腫瘤數(shù)目以及復(fù)發(fā)的相關(guān)性,為膀胱癌診斷、判定預(yù)后提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院經(jīng)開放手術(shù)證實(shí)且成功隨訪的膀胱尿路上皮癌(膀胱癌)69例,均為初次經(jīng)病理檢查確診者,術(shù)前均未行放化療,保留膀胱手術(shù)后使用化療藥物膀胱內(nèi)灌注。其中男 66例,女 3例,年齡23～82歲,平均 59歲。病理分級(jí)按 WHO (1973年)標(biāo)準(zhǔn)：G1級(jí) 18例,G2級(jí) 28例,G3級(jí) 23例;臨床分期按UICC-TNM(2002年)分期標(biāo)準(zhǔn)：Ta～T142例,T2～T427例;腫瘤單發(fā)者 47例,多發(fā)者22例。隨訪從手術(shù)后開始,如腫瘤復(fù)發(fā),隨訪結(jié)束,計(jì)為復(fù)發(fā)時(shí)間,否則隨訪至 5 a結(jié)束,在保留膀胱手術(shù)的 60例患者中,復(fù)發(fā) 33例,無(wú)復(fù)發(fā) 27例。設(shè)為對(duì)照的 10例正常膀胱組織標(biāo)本取自前列腺切除術(shù)患者。

1.2 Livin檢測(cè)方法 一抗為兔抗人Livin多克隆抗體,山羊抗兔 SP免疫組織化學(xué)染色試劑盒及DAB顯色試劑盒。標(biāo)本用石蠟包埋,4μm厚切片,采用免疫組化SP法染色,按試劑盒說(shuō)明書操作,以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。

胞質(zhì)呈現(xiàn)黃色及棕黃色者為陽(yáng)性細(xì)胞。將陽(yáng)性細(xì)胞按照其數(shù)量及顯色程度分為 3級(jí)：弱陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞＜10%、顯色強(qiáng)度為淡黃色;強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：陽(yáng)性細(xì)胞＞60%,顯色強(qiáng)度為黃色或綜黃色;中陽(yáng)性(++)：陽(yáng)性細(xì)胞及顯色強(qiáng)度介于+與+++之間;細(xì)胞無(wú)染色為陰性(-)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

膀胱癌組織中 Livin陽(yáng)性表達(dá)率為 65% (45/69),其中+++者12例,++者8例,+者25例;正常膀胱黏膜組織中Livin呈陰性表達(dá)(P＜0.05)。Livin陽(yáng)性表達(dá)與膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期、腫瘤數(shù)量無(wú)關(guān)(P＞0.05),與腫瘤復(fù)發(fā)有關(guān)(P＜0.05)。詳見表1。本組中Livin陽(yáng)性表達(dá)者術(shù)后復(fù)發(fā)率為 67%(26/39),平均復(fù)發(fā)時(shí)間為 20個(gè)月, Livin陰性表達(dá)者術(shù)后復(fù)發(fā)率為33%(7/21),平均復(fù)發(fā)時(shí)間為42個(gè)月(P均＜0.05)。

表1 Livin表達(dá)與膀胱癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

3 討論

細(xì)胞凋亡在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,也與腫瘤的放療和化療效果密切相關(guān)。影響細(xì)胞凋亡的基因分為促凋亡基因和抗凋亡基因,IAP家族為后者。Livin是2000年發(fā)現(xiàn)的IAP家族中新成員,人類的Livin基因位于染色體20q13,全長(zhǎng)46 kb,包含7個(gè)外顯子及6個(gè)內(nèi)含子,Livin蛋白N端僅包含一個(gè)桿狀病毒IAP重復(fù)序列(BIR)結(jié)構(gòu),它與Caspase蛋白結(jié)合,抑制其介導(dǎo)級(jí)聯(lián)激活反應(yīng)及多種途徑引起的細(xì)胞凋亡[2]。另外,C端含一個(gè)環(huán)狀鋅指樣結(jié)構(gòu),其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物因剪接方式不同有兩種mRNA亞型即Livinα和Livinβ,分別編碼298和280個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),兩種蛋白在功能上沒有本質(zhì)差別。

在胎兒時(shí)期,Livin在多種組織呈高表達(dá),可能與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān);在正常成人的組織中(除胎盤外),Livin呈低表達(dá)或不表達(dá),而在多種惡性腫瘤中有特異性表達(dá),如黑色素瘤、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤以及肺癌等[3,4]。本研究結(jié)果顯示 Livin在膀胱癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為65%,而在正常膀胱黏膜組織中不表達(dá),提示Livin與膀胱癌的發(fā)生密切相關(guān),可作為膀胱癌的分子標(biāo)志物。本研究結(jié)果還顯示Livin的陽(yáng)性表達(dá)與膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期及病灶數(shù)量無(wú)關(guān),這與文獻(xiàn)[5,6]的報(bào)告相同。G1級(jí)和 Ta～T1期的膀胱癌組織中Livin的陽(yáng)性表達(dá)率分別為56%、62%,說(shuō)明膀胱癌發(fā)生的早期即有Livin的陽(yáng)性高表達(dá),Livin可作為膀胱癌早期診斷的指標(biāo)之一。至于Livin的陽(yáng)性表達(dá)與膀胱癌的復(fù)發(fā)是否有關(guān)國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果并不一致,可能與資料的選擇和隨訪時(shí)間不同有關(guān)。本組 69例均為初發(fā)膀胱癌患者,其中60例行保留膀胱手術(shù),采用回顧性隨訪,即術(shù)后開始隨訪,腫瘤復(fù)發(fā),隨訪即結(jié)束,計(jì)為復(fù)發(fā)時(shí)間。本組膀胱癌5 a復(fù)發(fā)率為55%,其中Livin陽(yáng)性表達(dá)者的復(fù)發(fā)率為67%,平均復(fù)發(fā)時(shí)間為20個(gè)月;Livin陰性表達(dá)者的復(fù)發(fā)率為 33%,平均復(fù)發(fā)時(shí)間 42個(gè)月(P均＜0.05),說(shuō)明Livin與膀胱癌復(fù)發(fā)有關(guān)。

膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤,術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)50%～70%,其中10%～20%的復(fù)發(fā)腫瘤惡性度增加,臨床上采用膀胱鏡和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌均有其不足之處,另外根據(jù)病理分級(jí)和臨床分期來(lái)判斷膀胱癌的預(yù)后和5 a生存率也有些滯后。而采用分子生物學(xué)方法來(lái)探討腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后是醫(yī)學(xué)前進(jìn)的方向。我們認(rèn)為,通過(guò)對(duì)凋亡抑制基因Livin的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)一步研究,其有望成為膀胱癌早期診斷、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)及預(yù)后判斷的重要指標(biāo)之一。

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