苑瑞琴,王志剛
(鶴壁市第二人民醫(yī)院檢驗科,河南鶴壁 458030)
干化學(xué)篩選簡單易行、檢驗成本低、便于推廣,可評估健康、疾病狀態(tài),尤其對判斷泌尿系統(tǒng)疾病有不可替代的價值。干化學(xué)分析法的檢測結(jié)果受到很多因素的影響,檢測紅細胞及白細胞存在假陽性和假陰性現(xiàn)象,必須結(jié)合尿液沉渣的顯微鏡檢查結(jié)果進行綜合判斷?,F(xiàn)將筆者在工作中的幾點體會總結(jié)如下:
粒細胞胞質(zhì)內(nèi)含有酯酶,這種酶能水解一種3-羥基吡咯酯類底物,釋放出酚,從而與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色化合物,其顏色深淺與細胞的多少成正比。此法只能測定粒細胞,不與淋巴細胞和單核細胞反應(yīng)。
標準化操作:取尿液10 ml離心,采用水平式離心機,1 500 r/min,離心5 min。棄除上層尿液,保留0.2 ml尿沉渣,輕輕混勻,取1滴置載玻片上,用18 mm×18 mm或22 mm×22 mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低倍鏡(10×10)觀察全片,高倍鏡(10×40)仔細觀察 10 個高倍視野(HP),報告方式:××個細胞/HP。尿液白細胞顯微鏡分析報告方式中視野平均值與定性結(jié)果的對應(yīng)關(guān)系:0~4 個為(-),10~20 個為(+),21~50 個為(++),>50 個為(+++),滿布視野為(++++)[1]。
尿液干化學(xué)檢測在環(huán)境溫度較低的情況下,尿液白細胞檢測會出現(xiàn)假陰性或假陽性現(xiàn)象[2]。因為干化學(xué)法的原理是用試條上的試劑與尿液中相關(guān)成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng),而化學(xué)反應(yīng)又必須在一定溫度條件下才能進行。因此,化驗室室溫必須保持在20~25℃,如果是冷藏尿標本,取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫再進行檢測。
根據(jù)Tillman's Reagent原理,維生素C將染料由藍色還原成紅色,可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
尿中四環(huán)素濃度高可出現(xiàn)假陰性結(jié)果[3]。呋喃妥因、慶大霉素、頭孢氨芐和高濃度清蛋白(>5 g/L)可干擾白細胞檢驗。尿液中污染甲醛或高濃度膽紅素可產(chǎn)生假陽性結(jié)果[4]。
當尿液中以淋巴細胞為主時會產(chǎn)生干化學(xué)法的假陰性結(jié)果[5]。
尿液需新鮮,標本放置2.5 h后測定原先陰性的結(jié)果變?yōu)殛栃浴?/p>
干燥的紙片在空氣中放置3 h無影響,但紙片用蒸餾水濕潤后3~5 min出現(xiàn)假陽性結(jié)果,浸入紙片時間應(yīng)嚴格按照說明書上的規(guī)定。
高比重尿、高糖尿(>30 g/L)和草酸濃度增高造成白細胞測定結(jié)果偏低,大量尿蛋白(清蛋白>5 g/L)及檢測白細胞的試紙酯酶反應(yīng)減低或抑制,可使白細胞呈假陰性結(jié)果。
檢驗結(jié)果的準確性與規(guī)范的尿沉渣鏡檢是分不開的,在工作中,每一份標本都應(yīng)采用這種方法檢查。干化學(xué)與鏡檢的關(guān)系判定可按照以下標準:如果一個標本經(jīng)過兩種方法檢查,干化學(xué)結(jié)果與鏡檢結(jié)果都在正?;虍惓7秶?,說明過篩是正確的;干化學(xué)法異常而鏡檢結(jié)果正常視為假陽性;干化學(xué)結(jié)果正常而鏡檢結(jié)果異常視為假陰性。但實際工作中很難達到這一要求,我科根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會1995年制訂的尿液干化學(xué)標準規(guī)定:尿液干化學(xué)檢查結(jié)果白細胞、紅細胞、亞硝酸鹽及尿蛋白四項指標同時陰性(腎病除外),可視為尿內(nèi)有形成分大致在正常范圍內(nèi),可免除鏡檢[6],但要注意:①泌尿外科疾病除外;②結(jié)石、腫瘤除外;③干化學(xué)試帶的質(zhì)量、原理及操作有關(guān)事項與過篩的準確性有關(guān)。通常是在試帶、儀器確定、檢驗人員相對固定的條件下,達到以上標準可視為尿沉渣成分在正常范圍內(nèi),可免除進一步顯微鏡檢查。通過日常工作總結(jié),筆者分析了造成兩者結(jié)果不一致的原因,分析儀法(+)而鏡檢法(-):①由于尿液在膀胱貯存時間過長或其他原因?qū)е掳准毎茐?,中性粒細胞酯酶釋放到尿液中;②尿液中污染甲醛或高濃度膽紅素或使用某些藥物(如呋喃妥因);③尿液被女性分泌物污染,含有大量扁平上皮細胞、小圓上皮細胞、鱗狀上皮細胞污染。分析儀法(-)而鏡檢法(+):①腎移植患者發(fā)生排異反應(yīng)時,尿中以淋巴細胞為主,另外尿液中以單核細胞為主時也會出現(xiàn)此結(jié)果;②溫度偏低;③高比重尿、高糖尿;④尿液中含有某些大劑量藥物;⑤大量尿蛋白(清蛋白>5 g/L)和膽紅素;⑥尿液含大量膿細胞時。由于過篩的目的是檢出正常、鏡檢病理性標本。因此,過篩的原則是不能出現(xiàn)假陰性結(jié)果,否則就會漏診。由于干化學(xué)分析易受多種藥物、其他外源性物質(zhì)或人為因素的干擾,且不可避免地有一定的假陰性率。因此,不應(yīng)只看干化學(xué)分析而忽視鏡檢。
[1]王宏.尿液干化學(xué)分析與顯微鏡檢查對比分析[J].廣東醫(yī)學(xué),2002,23(S1):158.
[2]陳津,王德春,朱忠勇.低溫對干化學(xué)法測定尿白細胞的影響[J].臨床檢驗雜志,2006,24(1):33.
[3]葉應(yīng)嫵,王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:294.
[4]叢玉隆,馬駿龍.尿液干化學(xué)分析與顯微鏡檢查[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1997,20(3):135-137.
[5]杜忠斌,李林青.藥物對尿液分析儀檢測白細胞的影響[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2003,18(3):5.
[6]叢玉隆,馬駿龍,李云蓮,等.尿沉渣測定四種方法的參考值的范圍調(diào)查[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1997,20(4):229-231.