韓景輝 李 真△ 楊海燕 符 宇

通心絡(luò)膠囊對(duì)糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠內(nèi)皮素、血管緊張素Ⅱ的影響

韓景輝1李 真1△楊海燕1符 宇2

目的探尋通心絡(luò)膠囊對(duì)2型糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化病變的作用機(jī)理。方法將SD大鼠制備糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化模型，隨機(jī)分為空白組、模型組、對(duì)照組(貝那普利)和治療組(通心絡(luò)膠囊)。分別予相應(yīng)藥物灌胃8周后取材，放免法檢測(cè)血清內(nèi)皮素(ET)和血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量。結(jié)果治療組大鼠的血清ET、AngⅡ水平較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同對(duì)照組相近。結(jié)論通心絡(luò)膠囊具有改善糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化病變內(nèi)皮功能的作用，其機(jī)制可能與降低ET、AngⅡ水平有關(guān)。

通心絡(luò)膠囊 糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化 內(nèi)皮素 血管緊張素Ⅱ

1河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(鄭州450000)

2河南中醫(yī)學(xué)院(鄭州450000)

△通信作者

血管內(nèi)皮功能受損是糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生的基礎(chǔ)之一，亦是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)重要的始動(dòng)因素，貫穿于糖尿病發(fā)展的始終。因而保護(hù)內(nèi)皮功能己成為糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化疾病預(yù)防及治療的重要目標(biāo)之一。不少實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，內(nèi)皮功能障礙可以通過(guò)藥物和非藥物性的干預(yù)被逆轉(zhuǎn)或者較大程度上得以糾正。本研究旨在觀察通心絡(luò)膠囊對(duì)糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清內(nèi)皮素(ET)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠90只，均為清潔級(jí)，雄性、1月齡，體質(zhì)量90～120g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。(2)主要儀器:γ－放射免疫計(jì)數(shù)器(GC－911型，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè)總公司生產(chǎn))。(2)藥物與試劑:鏈脲佐菌素(STZ，美國(guó)Sigma公司產(chǎn))，ET試劑盒 (北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司產(chǎn))，AngⅡ試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所提供)，鹽酸貝那普利片(北京諾華制藥有限公司生產(chǎn))，通心絡(luò)膠囊(河北以嶺制藥有限公司生產(chǎn))。

1.2 方法 (1)造模:實(shí)驗(yàn)大鼠每籠4只，飼養(yǎng)于河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)溫度(22±1)℃，濕度:59% ～61%，每天光照與黑暗時(shí)間各12h。所有籠具、飼料、墊料、飲水均高壓滅菌。實(shí)驗(yàn)期間的灌胃、換水、添加飼料等操作均在超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，由專(zhuān)人管理。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。參照文獻(xiàn)[1－2]方法制備糖尿病大鼠模型。喂食高脂高糖飼料(由基礎(chǔ)飼料加入脂肪15%、蔗糖20%、蛋黃粉5%、膽固醇1%、食鹽0.1%，經(jīng)輻照處理)共4周，誘導(dǎo)胰島素抵抗。大鼠隔夜空腹12h后右側(cè)腹腔注射2%STZ 40mg/kg(未成模者在注射后1周再注射1次)，并在此期間繼續(xù)喂以高糖高脂飼料?？瞻捉M大鼠右側(cè)腹腔注射檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液0.1mmol/L(pH4.2)，并喂以普通顆粒飼料。糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠模型的制備:糖尿病模型成功大鼠，繼續(xù)喂食高脂高糖飼料，共12周。(2)造模標(biāo)準(zhǔn):糖尿病判定標(biāo)準(zhǔn):注射后第7、14日測(cè)定血糖，如隨機(jī)血糖≥16.9mmol/L，或出現(xiàn)多飲、多尿、消瘦、乏力、懶動(dòng)等糖尿病癥狀且連續(xù)2次隨機(jī)血糖＞11.1mmol/L，即視為糖尿病建模成功。(3)分組及治療:糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化模型成功大鼠(不成功模型棄用)，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、對(duì)照組和治療組各9只。對(duì)照組按1.6mg/(kg·d)灌胃貝那普利懸液(質(zhì)量濃度為0.16mg/mL)，治療組按1g/(kg·d)灌胃通心絡(luò)膠囊懸液 (質(zhì)量濃度為0.1g/mL)，模型組按10mL/(kg·d)灌胃生理鹽水。另設(shè)同周齡SD大鼠作為空白對(duì)照組，按10mL/(kg·d)灌胃生理鹽水。各組均每日灌胃1次，連續(xù)8周。(4)標(biāo)本采集:大鼠在實(shí)驗(yàn)8周后處死，處死前禁食不禁水12h，按2mL/kg腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，取腹部正中切口，分離腹主動(dòng)脈采血，備測(cè) ET、AngⅡ。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。計(jì)量資料以(±s)表示，首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊時(shí)對(duì)多個(gè)樣本均數(shù)間的多重比較應(yīng)用SNK－q檢驗(yàn);方差不齊時(shí)應(yīng)用Tamhane’s T2進(jìn)行檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1。與空白組比較，模型組ET、AngⅡ增高(P ＜0.01);與模型組比較，對(duì)照組和治療組ET、AngⅡ均降低 (P ＜0.05)，治療組與對(duì)照組相近(P＞0.05)。結(jié)果 表明，貝那普利和通心絡(luò)膠囊可改善大鼠內(nèi)皮因子水平。

表1 各組大鼠血清ET、AngⅡ比較 (pg/mL，±s)

與空白組比較，＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05

組別空白組模型組對(duì)照組治療組n9999 ET 323.05 ±17.83 496.24 ±16.35＊346.13 ±12.15△379.79 ±19.33△AngⅡ576.17 ±17.28 835.59 ±26.01＊663.43 ±17.90△736.07 ±20.45△

3 討論

內(nèi)皮功能障礙是糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病的重要機(jī)制，血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)，主要表現(xiàn)為縮血管因子如ET、AngⅡ等水平的升高及舒血管因子如一氧化氮(NO)、前列環(huán)素2等水平的降低。調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮因子水平是預(yù)防糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化疾病的關(guān)鍵。

通心絡(luò)膠囊為治療“脈絡(luò)－血管系統(tǒng)病”代表方藥，多用于冠心病心絞痛的治療。臨床報(bào)道其具有改善血管內(nèi)皮的功能。尤士杰等[3]在通心絡(luò)膠囊用于急性心肌梗死血運(yùn)重建后的有效性和安全性研究中，表明通心絡(luò)膠囊可明顯增加血清NO含量，降低血清ET水平，從而改善血管內(nèi)皮功能。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化病變模型大鼠存在ET、AngⅡ水平增高，考慮內(nèi)皮功能異常同糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)癥密切相關(guān)。通心絡(luò)膠囊能夠降低ET、AngⅡ水平，同貝那普利作用相近，提示通心絡(luò)膠囊可能具有改善血管內(nèi)皮功能、減緩或預(yù)防糖尿病血管并發(fā)癥發(fā)生的作用。

[1]張芳林，李果，劉優(yōu)萍，等.2型糖尿病大鼠模型的建立及其糖代謝特征分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2002，10(1):16－20.

[2]黃霖，李迎新，劉華.實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立[J].中國(guó)中醫(yī)急癥，2007，16(9):1111 －1113.

[3]尤士杰，楊躍進(jìn)，陳可冀，等.通心絡(luò)膠囊在急性心肌梗死血運(yùn)重建后的有效性和安全性研究[J].疑難病雜志，2004，3(4):193－196.

Effect of Tongxinluo Capsule on the Expression of ET and AngⅡin Rats with Diabetic Atherosclerosis

HAN Jing-hui， LI Zhen， YANG Hai-yan， et al
The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM(Zhengzhou 450000)

Objective:To study the mechanisms of Tongxinluo Capsule on diabetic atherosclerosis.MethodsThese male SD rat models were divided randomly into the normal group， the model group， the control group (with benazepril)， the treatment group(with Tongxinluo Capsule).With corresponding drug intragastric administration in each group for 8 weeks， the ET content and the AngⅡ level were detected by the radioimmunological method.ResultsThe ET and the AngⅡin the treatment group were lower than those in the model group.These levels were similar to those in the control group.ConclusionThe mechanism that the endothelial function of the diabetic atherosclerosis could be improved by the Tongxinluo Capsule might be related to the reduction the ET level and the AngⅡcontent.

Tongxinluo Capsule;Diabetic atherosclerosis;ET;AngⅡ

R285.5

A

1004－745X(2010)09－1553－02

2010－04－26)