王洛臨， 羅文匯

(廣東省中醫(yī)研究所，廣東廣州510095)

雙花復(fù)春顆粒由金銀花、黃柏、黃芩、赤芍、大黃等藥材組成，具有清熱解毒，降火排膿，化濕行瘀等功效，臨床用于治療痤瘡、毛囊炎、膿皰瘡、脂溢性皮炎、濕疹等皮膚病。根據(jù)處方中各藥材所含的成分以及藥理作用分析，黃柏、黃芩分別單獨(dú)提取干浸膏，金銀花等其它藥材采用水提醇沉提取干浸膏。為確定合理的提取工藝條件，保證該制劑的質(zhì)量，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與單因素分析方法，進(jìn)行了提取工藝的優(yōu)選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1100高效液相色譜儀、二極管陣列檢測器、二元泵、Agilent1100工作站(美國安捷倫公司);Bp211D電子分析天平(德國，sartorius);RE－52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);MYB型調(diào)溫電熱套(2 000 mL，浙江新華醫(yī)療器械廠);ZK－82A真空干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠)。

1.2 試藥 小檗堿對照品(批號:110713－200208)、黃芩苷對照品(批號:111595－200604)和芍藥苷對照品(批號:110736－200732)均由中國藥品生物制品檢定所購得;雙花復(fù)春顆粒所用藥材均由廣東廣弘藥業(yè)有限公司購得;所用化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芩提取工藝優(yōu)選

2.1.1 加水量的篩選 試驗(yàn)參照《中國藥典》2005年版一部中雙黃連顆粒項(xiàng)下黃芩部分的制法，即黃芩(黃芩苷含量為10.77%)加水提取3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，試驗(yàn)只需對未明確的加水量進(jìn)行單因素比較篩選。并參照雙黃連顆粒中黃芩苷含量測定法，測定各加水量提取所得干浸膏中黃芩苷的含量，計(jì)算黃芩苷提取率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩不同加水量提取結(jié)果

結(jié)果表明:試驗(yàn)2和試驗(yàn)3黃芩苷提取率無差異，因此，黃芩提取加水量確定為第1次加12倍量水，第2、3次分別加10倍量水。

2.1.2 最佳提取工藝條件驗(yàn)證 按最佳工藝條件提取3批，分別收集提取液，減壓濃縮，真空干燥，測定干浸膏中黃芩苷含量，計(jì)算干浸膏得率和黃芩苷提取率，結(jié)果見表2。

表2 黃芩提取驗(yàn)證結(jié)果

2.2 黃柏提取工藝優(yōu)選

2.2.1 因素水平的設(shè)定 根據(jù)藥材成分性質(zhì)，影響提取因素有乙醇濃度、加液量、回流時(shí)間、回流次數(shù)，其因素水平設(shè)計(jì)見表3。

表3 因素水平表

2.2.2 樣品制備 取黃柏藥材(小檗堿含量8.6%)9份，每份60 g，按L9(34)正交試驗(yàn)安排提取，減壓回收乙醇濃縮，真空干燥，得干浸膏，并計(jì)算干浸膏得率。

2.2.3 小檗堿含量測定 取研細(xì)的干浸膏0.1 g，照《中國藥典》2005年版一部黃柏項(xiàng)下含量測定進(jìn)行，計(jì)算小檗堿提取率。結(jié)果見表4、5。

表4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析表

結(jié)果表明:因素C(回流次數(shù))對試驗(yàn)結(jié)果影響顯著，因素A(乙醇濃度)對試驗(yàn)結(jié)果有一定影響，而因素B(溶媒用量)和因素D(回流時(shí)間)對試驗(yàn)結(jié)果的影響不顯著，各因素的主次順序?yàn)镃＞A＞D＞B，考慮到節(jié)約成本，最優(yōu)提取工藝確定為黃柏用60%乙醇回流提取3次，每次加6倍乙醇，回流1 h;即 A2B1C3D1。

2.2.4 最佳提取工藝條件驗(yàn)證 稱取每份120 g黃柏藥材，按最佳工藝條件制備3份樣品，測定干浸膏中小檗堿含量，并計(jì)算平均干浸膏得率和小檗堿提取率。結(jié)果見表6。

2.3 金銀花、赤芍等其余藥材提取工藝優(yōu)選

2.3.1 因素水平的設(shè)定 影響藥材水提取的主要因素有加水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)，其因素水平設(shè)計(jì)見表7。

表6 黃柏最佳提取工藝驗(yàn)證結(jié)果表

表7 因素水平表

2.3.2 樣品的制備 取金銀花、赤芍(芍藥苷含量3.93%)等其余藥材9份，每份162 g，按L9(34)正交試驗(yàn)安排提取，減壓濃縮，真空干燥，得干浸膏，并計(jì)算干浸膏得率。

2.3.3 干浸膏中芍藥苷含量測定

2.3.3.1 芍藥苷含量測定 取研細(xì)的干浸膏0.5 g，照《中國藥典》2005版一部赤芍項(xiàng)下的含量測定進(jìn)行，計(jì)算芍藥苷提取率。結(jié)果見表8、9。

表8 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表9 方差分析表

結(jié)果表明:因素A(加水量)對試驗(yàn)結(jié)果影響顯著，因素C(煎煮次數(shù))對試驗(yàn)結(jié)果有一定影響，而因素B(煎煮時(shí)間)對試驗(yàn)結(jié)果的影響不顯著，各因素的主次順序?yàn)锳＞C＞B，最優(yōu)提取工藝為金銀花、赤芍等其余藥材分別加12倍水提取2次，每次1.5 h;即A2B2C2。

2.3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別注入0.862 8、2.157、3.451 2、4.314、6.471 μg 芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品的溶液，測得峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，其回歸方程為Y=1 734.990 52X－374.006 48，相關(guān)系數(shù)r=0.999 49。

2.3.3.3 陰性對照溶液的制備及結(jié)果考察 稱取本處方中除赤芍、黃芩、黃柏外的各味藥材，加水煎煮2次，每次1 h，制備干浸膏。按上述測定法制備樣品，并注入色譜儀。結(jié)果表明，陰性對照溶液在芍藥苷相應(yīng)位置無吸收，處方中其它藥味對本測定無干擾。

2.3.4 最佳提取工藝條件驗(yàn)證 按處方比例稱取每份162 g藥材，按最佳工藝條件制備3份樣品，計(jì)算平均干浸膏得率和小檗堿提取率。結(jié)果見表10。

表10 最佳提取工藝驗(yàn)證結(jié)果表

3 討論

處方中藥材含有小檗堿等堿性成分和黃芩苷、大黃酸等酸性成分。因此，將處方中黃柏采用單獨(dú)提取干浸膏后再混入，可避因共煎而引起上述成分在提取過程中產(chǎn)生沉淀而被作為雜質(zhì)除去。

黃芩、黃柏和金銀花、赤芍等其余藥材的提取工藝驗(yàn)證結(jié)果表明，提取工藝參數(shù)穩(wěn)定。由于水提取液中含有大量植物碎片、淀粉等雜質(zhì)以及黃芩苷具有幾乎不溶于冷水，難溶于冷乙醇的特點(diǎn)。因此，黃芩單獨(dú)提取干浸膏后混入，可避免黃芩苷因醇沉而被作為雜質(zhì)除去。為本方的下一步純化奠定了良好的基礎(chǔ)。

［1］蔣國良，吳 珂.黃柏提取工藝的優(yōu)化［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26(7):792－793.

［2］鄭虎占，董澤宏，余 靖主編.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用［M］.北京:學(xué)苑出版社，1997.

［3］中國藥典［S］.一部.2005.