梁 明,李志源

(1.廣西柳州市水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局,柳州 545005;2.廣西柳州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,柳州 545005)

1 材料

1.1 試驗(yàn)?zāi)膛?均為柳州地區(qū)奶牛場(chǎng)飼養(yǎng)的奶牛,外表情況較好,無(wú)任何結(jié)核病臨床癥狀,年均產(chǎn)奶量約3 500kg。

1.2 主要試劑

1)牛型提純結(jié)核菌素:黑龍江省生物制品廠一廠生產(chǎn),規(guī)格5 mL/瓶,凍干型。

2)禽型提純結(jié)核菌素:中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn),規(guī)格20頭份/瓶 、2 mL/瓶,凍干型。

2 方法

2.1 檢疫方法:

1)牛只編號(hào)。

2)注射部位:為牛頸側(cè)中部上1/3處,對(duì)同一奶牛場(chǎng)所有牛只相對(duì)固定在同一側(cè)進(jìn)行,以便檢疫操作和觀察結(jié)果。注射時(shí)應(yīng)避開(kāi)病變或硬結(jié)部位。

3)剃毛:用刮須刀在注射部位剃毛,直徑約 10 cm,使注射部位完全暴露。

4)測(cè)量與記錄:指定專(zhuān)人測(cè)量并進(jìn)行記錄,包括奶牛場(chǎng)名稱(chēng)、棟?rùn)谔?hào)、順序號(hào)、牛號(hào)、注射時(shí)間、注射部位、注射前皮皺厚度(游標(biāo)卡尺)、72 h皮皺厚度(游標(biāo)卡尺)、皮皺厚度差值、判定結(jié)果、檢疫、測(cè)量人員姓名等。

5)注射方法:采用一次性1 mL注射器,一牛一付,用完即焚燒處理。注射部位用75%酒精消毒,術(shù)者用左手食指和拇指捏提中央皺皮,針頭斜向皮膚刺入,注射后觀察,出現(xiàn)一個(gè)小皰,說(shuō)明注射正確。如注射劑量不準(zhǔn),則另選15 cm以外的部位或?qū)?cè)重作,同時(shí)做記錄說(shuō)明。

6)觀察結(jié)果:皮內(nèi)注射后經(jīng)72 h觀察術(shù)部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng),如發(fā)現(xiàn)有此反應(yīng),用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮皺厚度,并做好詳細(xì)記錄。

7)結(jié)果判定:2003年前按農(nóng)業(yè)部1988年頒布的《牛結(jié)核病提純結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)操作規(guī)程》進(jìn)行判定,2003年后則以GB/T18645-2002《動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)》進(jìn)行判定。

2.2 同一奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比試驗(yàn)

1)奶牛:為柳州市某結(jié)核病陽(yáng)性奶牛場(chǎng)準(zhǔn)備淘汰的陽(yáng)性牛和可疑牛共12頭,年齡在4～6歲之間。

2)試驗(yàn)部位:選取奶牛頸部右側(cè)約上、中、下和前、中、后的居中位置,分上、下兩排剃毛,上下兩排相距3～5 cm,每個(gè)部位20～30 cm2。

3)診斷試劑稀釋方法:取5個(gè)無(wú)菌小玻璃瓶,分別標(biāo)為牛型10 000 u、牛型5 000 u、牛型 2 000 u、禽型5 000 u、禽型2 500 u,用生理鹽水分別稀釋牛型和禽型結(jié)核病菌素,從高濃度向低濃度方向進(jìn)行。稀釋后含量分別為 10 000、5 000 、2 000、5 000、2 500 u 。

4)注射方法:用1 mL一次性注射器進(jìn)行皮內(nèi)注射。在上排3個(gè)注射部位部位由后往前分別注射牛型提純結(jié)核菌素10 000 u、5 000 u、2 000 u各 0.2 mL,下排由后往前分別注射禽型結(jié)核菌素5 000 u、2 500 u各0.2 mL。

5)觀察記錄:在注射牛型、禽型提純結(jié)核菌素后48 h、72 h、96 h、120 h 分別對(duì)每個(gè)部位測(cè)量,并做記錄。

6)判定標(biāo)準(zhǔn):按GB/T18645-2002的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

2.3 不同奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比試驗(yàn) 方法與2.2相同。

2.4 同一奶牛場(chǎng)不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比試驗(yàn) 方法與2.2相同。用1 mL一次性注射器進(jìn)行皮內(nèi)注射。在上排2個(gè)注射部位由后往前分別注射牛型提純結(jié)核菌素0.2 mL(2 000 u/0.2 mL)、0.1 mL(2 000 u/0.1 mL),下排由后往前分別注射禽型結(jié)核菌素0.2 mL(2 500 u/0.2 mL)、0.1 mL(2 500 u/0.1 mL)。

2.5 間隔4月對(duì)結(jié)核陽(yáng)性可疑牛的重復(fù)試驗(yàn)第1次檢疫后4個(gè)月重復(fù)檢疫1次。方法同2.1。

3 結(jié)果

3.1 同一奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比 對(duì)12頭結(jié)核病陽(yáng)性和可疑奶牛進(jìn)行試驗(yàn),48 h、72 h、96 h、120 h 觀察記錄與原皮厚進(jìn)行對(duì)比,“++++”為皮差大于1.6 cm,“+++”為皮差大于1.2 cm,“++”為皮差大于 0.8 cm,“+”為皮差大于或等于0.4 cm,“±”為皮差介于 0.2～0.4 cm之間,“-”為皮差小于0.2 cm(以下表同)。根據(jù)皮差作出判定,結(jié)果見(jiàn)表1、2。從表中可以看出,除11號(hào)牛禽型反應(yīng)強(qiáng)于牛型之外,其余多是牛型反應(yīng)強(qiáng)于禽型。從陽(yáng)性數(shù)來(lái)看,兩種劑量于72 h檢測(cè)出的陽(yáng)性數(shù)最多,隨著時(shí)間推移,陽(yáng)性數(shù)趨少。

表1 12頭奶牛48 h、72 h、96 h、120 h牛型和禽型提純結(jié)核菌素反應(yīng)結(jié)果

表2 不同劑量不同時(shí)間奶牛結(jié)核病陽(yáng)性數(shù)、可疑數(shù)檢測(cè)結(jié)果

3.2 不同奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比

對(duì)8個(gè)奶牛結(jié)核病陽(yáng)性場(chǎng)初檢為陽(yáng)性或可疑的21頭奶牛進(jìn)行不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表3、4。

表3 不同奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素檢出陽(yáng)性數(shù)對(duì)比

表4 不同奶牛場(chǎng)不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素檢出可疑數(shù)對(duì)比

3.3 測(cè)量時(shí)間與最大皮差 對(duì)不同奶牛場(chǎng)注射牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比試驗(yàn)中21頭奶牛進(jìn)行分類(lèi),統(tǒng)計(jì)不同時(shí)間測(cè)量出現(xiàn)最大皮差頭數(shù),結(jié)果見(jiàn)表5～7。結(jié)果表明,5種不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素同時(shí)達(dá)皮差最大值的時(shí)間后移,個(gè)別奶牛場(chǎng)發(fā)生相似的后移情況。

表5 不同測(cè)量時(shí)間出現(xiàn)的最大皮差頭數(shù)分布

表6 不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素同一時(shí)間皮差均達(dá)最大的頭數(shù)分布

表7 不同奶牛場(chǎng)牛型和禽型提純結(jié)核菌素同一時(shí)間皮差均達(dá)最大的頭數(shù)分布

3.4 間隔4個(gè)月后對(duì)初檢為陽(yáng)性或可疑的奶牛進(jìn)行復(fù)檢 對(duì)初次檢疫的21頭陽(yáng)性牛、可疑牛隔離飼養(yǎng),不進(jìn)行任何治療,4個(gè)月后復(fù)檢,采取國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)劑量2 000 u,72 h后觀察,結(jié)果見(jiàn)表8。結(jié)果表明,初檢結(jié)核病陽(yáng)性奶牛5頭,經(jīng)復(fù)檢后為可疑2頭,陰性3頭;初檢可疑16頭,經(jīng)復(fù)檢后為可疑5頭,陰性11頭。復(fù)檢后奶牛結(jié)核病陽(yáng)性率為0%。

表8 間隔4個(gè)月前后奶牛結(jié)核病檢疫結(jié)果對(duì)照

3.5 同一奶牛場(chǎng)不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比 用14頭1～3歲青年奶牛進(jìn)行不同稀釋濃度對(duì)比,牛型提純結(jié)核菌素含量2 000 u,禽型提純結(jié)核菌素含量2 500 u,72 h后觀察結(jié)果,見(jiàn)表9。結(jié)果表明,兩種稀釋劑量檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異。

表9 不同稀釋濃度牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)比

3.6 禽型與牛型反應(yīng)強(qiáng)度對(duì)比 采用牛型和禽型提純結(jié)核菌素對(duì)陽(yáng)性牛、可疑牛及假定健康牛群進(jìn)行檢疫,對(duì)同一奶牛場(chǎng)的12頭陽(yáng)性可疑奶牛、不同奶牛場(chǎng)的21頭陽(yáng)性可疑奶牛和同場(chǎng)進(jìn)行不同稀釋劑量進(jìn)行試驗(yàn)的14頭假定健康奶牛進(jìn)行統(tǒng)計(jì),根據(jù)結(jié)果判斷牛結(jié)核和副結(jié)核存在的可能性。結(jié)果見(jiàn)表10。

3.7 不同劑量檢疫對(duì)生產(chǎn)的影響 采用不同劑量、不同稀釋濃度的牛型和禽型提純結(jié)核菌素進(jìn)行檢疫,比較其陽(yáng)性檢出數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表11。

表10 禽型與牛型提純結(jié)核菌素反應(yīng)強(qiáng)度對(duì)比

4 討論

4.1 采用不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素在同一奶牛場(chǎng)檢疫時(shí),兩種劑量于注射后72 h檢出陽(yáng)性數(shù)最多,隨著時(shí)間推移,陽(yáng)性數(shù)趨少,說(shuō)明最佳觀察時(shí)間為注射后72 h。同時(shí)可以看出,不同注射劑量對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性影響,不會(huì)造成誤判。提示在奶牛結(jié)核病臨床檢疫中。應(yīng)以72 h觀察為主,同時(shí)在96 h再觀察1次,可提高檢出率。

表11 不同檢疫方法的陽(yáng)性檢出數(shù)對(duì)比

4.2 在同一奶牛場(chǎng)進(jìn)行陽(yáng)性可疑牛不同劑量牛型和禽型提純結(jié)核菌素試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn),禽型反應(yīng)較輕,只有1例奶牛表現(xiàn)為禽型提純結(jié)核菌素反應(yīng)強(qiáng)于牛型提純結(jié)核菌素,且反應(yīng)消失極緩慢,該?？赡苁歉腥玖饲菪徒Y(jié)核病,而非牛型結(jié)核病,具體待進(jìn)一步研究。

4.3 不同個(gè)體可能患不同程度的結(jié)核病,或在不同部位或多個(gè)部位發(fā)生結(jié)核病,它們誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生數(shù)量不一的免疫因子,導(dǎo)致奶牛發(fā)生不同程度的變態(tài)反應(yīng)。同時(shí),無(wú)論是牛型或是禽型提純結(jié)核菌素,其注射劑量與皮差有很大相關(guān)性,劑量越大皮差也越大,反之,劑量越小,皮差越小。表明檢測(cè)時(shí)注射劑量大,反應(yīng)強(qiáng),則陽(yáng)性檢出率提高,淘汰率也增加,對(duì)畜牧業(yè)發(fā)展不利。

4.4 本試驗(yàn)表明,采用目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)劑量,雖然檢出率稍低,但與劑量大的檢疫方法無(wú)顯著差異,對(duì)畜牧生產(chǎn)有利。