張愛群 孫富國

細胞周期蛋白D1在卵巢子宮內膜異位癥中的表達及意義

張愛群 孫富國

子宮內膜異位癥 卵巢 細胞周期蛋白D1 細胞周期 免疫組織化學

子宮內膜異位癥多發(fā)生于生育期女性，目前發(fā)病機制仍然不十分清楚。細胞周期蛋白D1（cyclinD1）是重要的細胞周期調控因子，與腫瘤的形成密切相關。本研究采用免疫組織化學的方法檢測子宮內膜異位癥中cyclinD1蛋白表達，分析其在卵巢子宮內膜異位癥發(fā)病過程中的作用及與臨床分期的關系。

1 對象與方法

1.1研究對象 異位癥組選自我院婦產科2006年1月—2008年1月住院行腹腔鏡手術或開腹手術治療的卵巢子宮內膜異位癥患者 43例，年齡 23～45歲，平均（33.10±5.10）歲。經腹腔鏡手術33例，開腹手術10例；其中異位內膜淺層浸潤12例，深層浸潤31例；異位囊腫<3 cm者11例,異位囊腫≥3 cm者32例。分期標準依據1985年美國生育協(xié)會（American Fertility Society）的修正分期法（revised American Fertility Society AFS-r），Ⅰ期 2例，Ⅱ期 9例，Ⅲ期 27例，Ⅳ期5例，對照組為其他婦科疾病同期來院手術者，平均年齡（36.30±5.90）歲，與異位癥組比較，差異無統(tǒng)計學意義（t=2.198，P＞0.05）。全部患者均經組織病理學證實，術前3個月未進行過激素治療。卵巢子宮內膜異位癥患者均做HE染色挑選有典型內膜及間質的組織標本為入選患者。

1.2主要試劑 鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶（SP）試劑盒、cyclinD1鼠抗人單克隆抗體均購自北京中山生物技術公司。

1.3實驗方法 異位癥組取卵巢子宮內膜異位囊腫囊壁組織，對照組取正常子宮內膜組織，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，組織切片厚4 μm,免疫組化步驟按試劑盒說明操作。

1.4陽性結果判定標準 cyclinD1陽性產物均主要定位于細胞核上。根據著色強度及范圍分為:陰性（-），無陽性染色細胞或細胞著色率＜5%；弱陽性（＋），陽性細胞數5%～25%；陽性（＋＋），陽性細胞數 26%～50%；強陽性（+++），陽性細胞數>50%，由2名有經驗的病理科醫(yī)師雙盲讀片。

1.5統(tǒng)計學處理 所有數據經Excel數據庫整理，采用SPSS 11.5軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料用±s表示，組間比較行t檢驗。2組之間陽性率比較用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.12組中cyclinD1陽性表達情況的比較 cyclinD1在異位癥組中的表達明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 1。

表1 2組cyclinD1陽性表達的比較 （例）

2.2cyclinD1與異位癥組臨床病理特征的關系 異位癥組患者有無痛經、月經是否異常、是否不孕cyclinD1陽性例數差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而不同囊腫大小、異位內膜浸潤深度及盆腔浸潤情況的cyclinD1陽性例數差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表 2。

3 討論

cyclinD1基因定位于染色體11q13上，蛋白含295個氨基酸，是細胞周期素家族中與細胞增殖周期關系最為密切的成員，是啟動細胞周期通過關鍵限速卡點即從G1期到S期的重要調節(jié)因子。cyclinD1與CDK4/CDK6結合后,作用于Rb蛋白,使其磷酸化為pRb,導致pRb與E2F脫離,游離的E2F可進入細胞核內，啟動S期相關基因的轉錄，從而使細胞由G1期進入S期，促進DNA合成而發(fā)揮加速細胞增殖的正性調控作用。在生理狀態(tài)下，細胞進入S期后，cyclinD迅速分解。如果cyclinD持續(xù)高表達，G1期將縮短，提前進入S期，使細胞增殖失控，最終形成腫瘤[1]。許多人類腫瘤組織中均發(fā)現染色體在11q13區(qū)域cyclinD1基因擴增和cyclinD1基因的過度表達，其表達異常與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[2]。cyclinD1過表達可使細胞G1期縮短，體積變小，降低細胞對促細胞分裂劑的依賴性[3]。如果抑制cyclinD1在G1期表達，細胞將不能進入S期。正常情況下，cyclinD1在G1期是恒定的或保持極低水平，G1期的cyclinD1過度表達可加速細胞周期進程，使細胞逃避監(jiān)測點，進而發(fā)生細胞失控性增殖，與許多惡性腫瘤發(fā)生有關。本研究結果顯示，cyclinD1在異位癥組陽性表達率高于對照組，提示其高表達可能與疾病的發(fā)生關系密切。cyclinD1過表達主要與周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）4或CDK6、CDK2結合成復合物，加快細胞通過G1檢查點，具有推動細胞周期進程的作用，與異位子宮內膜的不正常生長、增殖、浸潤、轉移及復發(fā)等惡性生物學表現有關。本研究表明，cyclinD1的高表達可能加速了細胞周期進程，使其更快地進入S期，并使異位內膜細胞具有更強的種植及侵襲性，提示cyclinD1與異位內膜增殖、浸潤關系密切，可能對判斷疾病的預后有一定的價值。

表2 cyclinD1與卵巢子宮內膜異位癥臨床癥狀及病理指標的關系 例（%）

[1] 吳鑫,楊鐘莉,宦晴,等.cyclinD、P16在子宮內膜異位癥中的表達及意義[J].醫(yī)學與哲學,2008,29(7B):41-42,45.

[2] 王顯艷,王坤,李林,等.PTEN、P27及cyclinD1在胃癌中的聯合表達及臨床意義[J].齊齊哈爾醫(yī)學院學報,2009,30(19):2353-2355.

[3] 王前,鄧晶,蔣永新.cyclinD1的研究進展 [J].現代腫瘤醫(yī)學,2009,17(2):350-353.

050041 河北省石家莊市，白求恩軍醫(yī)學院附屬第260醫(yī)院婦產科（張愛群）；白求恩軍醫(yī)學院（孫富國）

（2010-01-13收稿 2010-05-13修回）

（本文編輯 魏杰）