曹紅，王浩

（國家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，北京 100094）

HPLC法快速測定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1

曹紅，王浩

（國家食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，北京 100094）

建立了快速測定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的高效液相色譜測定法。采用Zorbax XDB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm i.d）反相色譜柱，以濃度為0.05 mol/L乙酸鈉水溶液與甲醇比為65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）為流動相，流速為1.0 mL/min，進樣量20μL。方法定量限為0.5 mg/kg，加標回收率92.1%～103.8%，線性范圍0.00～1.00 mg/L，相對標準偏差為4.34%。該法具有樣品預處理簡單,靈敏度高,分析時間短等優(yōu)點,適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的快速測定。

高效液相色譜儀；嬰幼兒配方奶粉；維生素B1

0 引 言

維生素B1又稱硫胺素或抗神經(jīng)炎素。由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)結(jié)合而成的一種B族維生素。其在體內(nèi)的含量雖然很少，但在人體生長、代謝、發(fā)育過程中卻發(fā)揮著重要的作用,因而成為嬰兒配方奶粉的重要組成部分。

目前測定食品中維生素B1的方法主要有：熒光分光光度法、液相色譜法[1，2]。其中，嬰兒配方奶粉中維生素B1的國標測定方法（GB/T5413.11-2010）為液相色譜法,該法樣品需要在稀鹽酸環(huán)境水解，酶解過夜，費時，回收率偏低。本文將樣品經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取，HPLC法進行直接測定,獲得較滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

儀器：Agilent1100型高效液相色譜儀，配置自動進樣器，G1321A熒光檢測器。

試劑：甲醇，冰醋酸，鹽酸，氫氧化鈉，乙酸鈉，鐵氰化鉀。以上均為分析純。維生素B1。

樣品為嬰幼兒配方奶粉。

1.2 色譜條件

色譜柱：反相Zorbax XDB-C18色譜柱；流速為1.0 mL/min；柱溫為25℃；激發(fā)波長375 nm，發(fā)射波長435 nm；進樣量為20 μL；流動相：0.05 mol/L乙酸鈉比甲醇為65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）。

1.3 樣品處理

準確稱取5 g樣品，用25.0 mL 50℃熱水溶解，超聲10 min，用濃度為5 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.7，放置2 min后，再用濃度為2.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值至4.5。將樣品溶液移至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度后，倒入漏斗用快速定性濾紙自然過濾，棄去最初濾液，在50 mL錐形瓶中收集濾液，并充分混勻，待用；取上述濾液10.0 mL于25 mL具塞比色管中，加10.0 mL正丁醇，強烈振蕩后靜置約10 min，充分分層，吸取正丁醇于5000 r/min離心5 min，取上清液用0.45 μm濾膜將樣液過濾，進樣20 μL進行色譜分析。

1.4 定性定量方法

采用標準物質(zhì)的保留時間對樣品峰進行準確定性，采用外標法以峰面積計算定量，依次配制不同濃度的標準溶液進樣分析,以質(zhì)量濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

維生素B1為水溶性物質(zhì)，而嬰兒配方奶粉中蛋白質(zhì)含量較高，因此，本方法先用50℃熱水超聲提取，再經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取待測液中的維生素B1；國標測定方法（GB/T5413.11-2010）樣品需要在121℃下保持30 min,待冷卻至40℃再酶解過夜，其后同本法。經(jīng)過加標對比實驗，國標測定方法平均回收率小于80%，而本法平均回收率大于92.0%，其原因可能為在維生素B1在121℃高溫下可能會有所損失，造成國標測定方法平均回收率偏低。

2.1 色譜條件的優(yōu)化

據(jù)文獻報道，可用于分離維生素B1的色譜柱主要包括C18和C8柱。本文分別采用上述兩種色譜柱進行分離試驗，發(fā)現(xiàn)Zorbax XDB-C18柱對維生素B1具有較好的分離效果；維生素B1屬于強極性化合物，在反相色譜柱上保留較弱，為了有利于色譜峰的分離及峰形的改善，選用以濃度為0.05 mol/L乙酸鈉與甲醇比65︰35（體積比，調(diào)pH值為4.5）為流動相；對維生素B1標準溶液分別用激發(fā)波長為280，310，370，490 nm；發(fā)射波長為380，400，435，500 nm進行測定；發(fā)現(xiàn)激發(fā)波長為375 nm，發(fā)射波長為435 nm時，維生素B1標準溶液的響應值最大；通過不同體積進樣量比較,發(fā)現(xiàn)進樣量20 μL時,峰形較好，響應值比較理想。綜合以上色譜條件的測定結(jié)果令人滿意（如圖1所示）。

2.2 標準曲線線性范圍和方法檢測限

將逐級稀釋的標準工作液分別進樣20 μL，測定結(jié)果經(jīng)線性回歸，線性范圍為0.00～1.00 mg/L；線性相關(guān)系數(shù)為0.99999；回歸方程為

式中：y為峰面積；x為質(zhì)量濃度。

進空白樣,以基線3倍噪聲值在標準曲線查得結(jié)果計算,按測定方法計算,本方法最低檢出量為0.5 mg/kg。

2.3 方法的回收率和精密度

稱取已知含量的同一樣品6份,每份5.00 g,添加維生素B1標準品0.03 mg,按供試品制備方法處理后,進行測定,結(jié)果如表1所示。從表中可看出,樣品加標回收率92.1%～103.8%,平均相對標準偏差為4.34%（n=6）。

表1 加標樣品回收率與相對標準偏差

3 結(jié) 論

建立了快速測定嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的高效液相色譜測定方法。該法樣品經(jīng)酸沉蛋白后直接用堿性鐵氰化鉀衍生，正定醇萃取，HPLC法進行直接測定,樣品加標回收率92.1%～103.8%,平均相對標準偏差為4.34%（n=6）,適用于嬰幼兒配方奶粉中維生素B1的快速測定。

[1]常相娜，黃榮清，王正平，等.B族維生素測定方法研究進展[J].科學技術(shù)與工程,2004,4（4）：312-315.

[2]崔蓉，李皎，王洪瑋.水溶性維生素的高效液相色譜測定方法的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，15（1）：55-57.

Study on rapid detection of Vitamin B1 in infant milk powder by HPLC

CAO Hong，WANG Hao
（Nation Food Quality&Safety Supervision and Inspection Center,Beijing 100094，China）

This thesis developed a HPLC method for rapid determination of Vitamin B1 in infant milk powder.In the method,the analysis column is revered-phase column of Zorbax XDB-C18（5μm，4.6 mm×250 mm i.d）.the mobile phase is 0.05mol/L CH3COONa water solution：Methanol（65：35,V/V,pH4.5）,the flow is 1.0 mL/min,and the injection volume is 20 μL.The limit of t quantitation was 0.5 mg/kg,The linear plots were obtained between 00.0 μg/mL and 1.00 μg/mL.Overall recoveries were between 92.1%and 103.8%,and RSD（n=6）value were between 4.34%.The results showed that the method was sensitive,accurate,convenient and quick,which can be used to detect Vitamin B1 in infant milk powder.

HPLC；infant milk powder；Vitamin B1

TS252.7

A

1001-2230（2010）11-0046-02

2010-08-30

曹紅（1951-），女，高級工程師,從事食品安全與營養(yǎng)檢驗的研究工作。

王浩