周曉娟，趙長瑤 (長江大學醫(yī)學院，湖北 荊州 434023)

毒死蜱對未成年小鼠雌激素樣作用的研究

周曉娟，趙長瑤 (長江大學醫(yī)學院，湖北 荊州 434023)

目的：觀察有機磷農(nóng)藥毒死蜱(CPF)在體內(nèi)的擬雌激素樣作用。方法：在不產(chǎn)生嚴重中毒的劑量下，給17d齡的雌性昆明小鼠每天皮下注射不同濃度(0.05、0.5、1.5mg/kg)CPF，連續(xù)3d，觀察它們對小鼠子宮濕重、子宮內(nèi)膜腔上皮高度和基質(zhì)細胞層厚度的影響。結(jié)果：各劑量染毒組小鼠子宮系數(shù)、子宮內(nèi)膜腔上皮高度和基質(zhì)細胞層厚度等各項指標與陰性對照組比較未見統(tǒng)計學差異(Pgt;0.05)。結(jié)論：在該實驗條件下，有機磷農(nóng)藥毒死蜱未顯示出雌激素樣活性。

毒死蜱；雌激素活性；子宮增重試驗；子宮內(nèi)膜基質(zhì)層

毒死蜱(chlorpyrifos，CPF)是一種廣譜有機磷農(nóng)藥，是高毒有機磷農(nóng)藥替代的首選產(chǎn)品之一。隨著毒死蜱在世界范圍內(nèi)大量使用，使得人們通過膳食、皮膚等多種途徑暴露在毒死蜱中。毒死蜱毒理學研究表明它能引起肝、腎病理改變、急性或遲發(fā)性神經(jīng)中毒、出生缺陷等[1]。美國國家癌癥研究機構(gòu)在2004年報道毒死蜱在農(nóng)藥使用中與肺癌的發(fā)生有關(guān)[2]。許多有機磷農(nóng)藥已明確具有類雌激素樣作用，但目前對于毒死蜱是否是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物尚沒有明確證據(jù)，因此開展本實驗以探討毒死蜱類雌激素樣作用及其效應(yīng)程度。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 斷乳的17d齡雌性昆明小鼠50只，體質(zhì)量9.0～11.0g，長江大學醫(yī)學院動物中心提供。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1d，自由飲食，飼料中不含豆餅，室溫(20±2)℃。

1.1.2試劑 毒死蜱原藥(純度99%，湖北沙隆達股份有限公司)；雌二醇(Signa公司)，溶劑為市售精制花生油。

1.2方法

1.2.1農(nóng)藥染毒濃度探索 篩選擬雌激素樣活性的子宮增重實驗的染毒濃度是最高劑量產(chǎn)生中毒，但不導致死亡；中、低劑量無任何中毒癥狀，且對體質(zhì)量影響不大[3]。經(jīng)過實驗，CPF農(nóng)藥劑量水平選擇由高到低依次為1.5、0.5、0.05mg/(kg·d)。

1.2.2實驗分組 小鼠隨機分為5組，每組10只，分別為陰性對照組(花生油)、陽性對照組(雌二醇，100g/kg)、CPF低濃度0.05mg/(kg·d)組、CPF中濃度0.5mg/(kg·d)組、CPF高濃度1.5mg/(kg·d)組。所有動物均以花生油作為溶劑，皮下注射染毒，每天一次，連續(xù)3d，最后一次染毒后24h用頸椎脫臼法處死小鼠。

1.2.3觀察指標及檢測方法 ①小鼠的中毒體征觀察：觀察有無有機磷農(nóng)藥中毒癥狀，觀察指標包括毛發(fā)、活動度、神態(tài)、大小便、肌肉震顫等。②子宮質(zhì)量測定：處死小鼠后剖腹暴露子宮，分離子宮系膜及周圍脂肪，切除卵巢，在子宮頸與子宮角的交界部切下子宮角，立即稱濕重并計算臟器系數(shù)。③小鼠子宮稱重后用4%甲醛固定，常規(guī)方法做病理切片，從子宮角輸卵管端開始，垂直于子宮角長軸朝子宮體方向連續(xù)切片，每片厚5μm，共切15片/側(cè)子宮角。染色后在顯微鏡下用測微尺測量子宮上皮細胞的高度及基質(zhì)細胞層的厚度。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠中毒體征觀察給藥后低、中濃度組小鼠在整個觀察期間未發(fā)現(xiàn)中毒癥狀，高濃度組小鼠出現(xiàn)典型神經(jīng)系統(tǒng)中毒癥狀，但無死亡。

2.2對未成年小鼠子宮濕重和子宮臟器系數(shù)的影響各組小鼠子宮濕重和子宮臟器系數(shù)的比較見表1。從表1可見，給予100g/kg雌二醇組小鼠子宮濕重和子宮臟器系數(shù)有明顯增加，與對照組有統(tǒng)計學差異(Plt;0.01)，而其余染毒各組與對照組比較無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。

2.3對未成年小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞增生高度和子宮內(nèi)膜基質(zhì)厚度的影響各組小鼠子宮內(nèi)膜上皮細胞增生高度和子宮內(nèi)膜基質(zhì)厚度見表2。從表2可見，染毒各組與陰性對照組比較，子宮內(nèi)膜上皮細胞高度、基質(zhì)層厚度差異均無統(tǒng)計學意義。陽性對照組小鼠各項指標均大于陰性對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(Plt;0.01)。

表1 各組小鼠子宮濕重和子宮臟器系數(shù)的比較

注：與陰性對照組比較，＊＊Plt;0.01。

表2 各組小鼠子宮內(nèi)膜變化的比較 μm

注：與陰性對照組比較，＊＊Plt;0.01。

3 討 論

近年來，環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對人類健康的損害一直是人們關(guān)注的熱點。美國環(huán)保局內(nèi)分泌干擾物篩選測試咨詢委員會(EDSTAC)建議：為了能綜合評價某種化學物的內(nèi)分泌干擾活性，需聯(lián)合使用體內(nèi)和體外實驗。在選擇體內(nèi)實驗時，首先要考慮的是實驗的靈敏度。研究表明未成熟的動物比切除卵巢的動物對雌激素作用更敏感[4]。未成年小鼠的個體差異不大，適于子宮增重實驗。因此，本研究采用未成熟雌性小鼠的子宮增重實驗檢測有機磷農(nóng)藥毒死蜱的擬雌激素樣活性。

子宮細胞增殖被認為是環(huán)境化學物雌激素樣活性的重要效應(yīng)。本實驗選用反映子宮細胞增殖的子宮增重實驗、子宮內(nèi)膜腔上皮厚度和基質(zhì)層厚度的測量來探討毒死蜱的雌激素樣活性作用。結(jié)果顯示各農(nóng)藥染毒組在染毒3d后，與陰性對照組相比較，小鼠子宮重量及其子宮臟器系數(shù)、子宮內(nèi)膜上皮細胞高度、基質(zhì)層厚度均無統(tǒng)計學差異，表明在本實驗條件下，有機磷農(nóng)藥毒死蜱未表現(xiàn)出雌激素樣活性。

毒死蜱為硫代磷酸酯類化合物，可經(jīng)呼吸道、消化道和完整皮膚進入體內(nèi)，并迅速分布到身體各部位。國內(nèi)有研究表明毒死蜱能引起大鼠精子數(shù)量和活動度下降，精子畸形率增加[5]。然而也有一些試驗認為毒死蜱沒有內(nèi)分泌干擾作用。因此，毒死蜱是否具有內(nèi)分泌干擾作用，目前國際上還存有爭論。鑒于上述研究狀況，尚需進一步加強對毒死蜱的內(nèi)分泌作用的人類方面證據(jù)進行研究。根據(jù)內(nèi)分泌干擾篩選程序進行相關(guān)實驗，評估其雌激素樣作用及效應(yīng)程度。最后根據(jù)研究結(jié)果，關(guān)注其安全性，對相應(yīng)法規(guī)進行調(diào)整。

[1]鄭光，周志俊. 毒死蜱的毒理學研究進展[J]. 中國公共衛(wèi)生，2002，18(4)：496-498.

[2]Alavanja MCR，Dosemeci M，Samanic C，etal.Pesticides and lung cancer risk in the agricultural health study cohort [J]. Am J Epidemiol，2004，160(9)：876-885.

[3]Environmental Protection Agency. Endocrine disruptor screening and testing advisory committee final report [EB/OL]. http://www.epa.gov/endo/pubs/edspoverview/finalrpt.htm.

[4]Kang KS，Kim HS，Rgu DY，etal. Immature uterotropic assay is more sensitive than ovariectomized uterotropic assay for the detection of estrogenicity of p-nonglphenol in Sprague-Dawley rats[J]. Toxicol Lett，2000，108：109-115.

[5]文一，魏帥，潘家榮. 毒死蜱對雄性大鼠生精功能的影響[J]. 農(nóng)藥，2008，47(8)：595-597.

[編輯] 一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2009.04.035

R99

A

1673-1409(2009)04-R073-02

2009-11-02

周曉娟(1975-)，女，湖北荊州人，講師，從事基礎(chǔ)醫(yī)學教學與研究工作。