鄢 進(jìn)

(長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

淫羊霍苷抗胃癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究

鄢 進(jìn)

(長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

目的：探討淫羊霍苷抑制胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS粘附和移動(dòng)的作用及機(jī)制。方法：不同濃度淫羊霍苷作用AGS細(xì)胞24h后，粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞粘附率，劃痕損傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移速度。結(jié)果：2、4、8、12、16μg/ml淫羊霍苷處理24h后，AGS細(xì)胞粘附率分別為73.65%、46.24%、43.28%、41.59%和20.36%，總體呈下降趨勢(shì)，4μg/ml組與2μg/ml和16μg/ml組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)，與8μg/ml和12μg/ml組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)。4μg/ml淫羊霍苷處理24 h后AGS細(xì)胞遷移速度明顯降低(Plt;0.01)。結(jié)論：淫羊霍苷通過(guò)抑制AGS細(xì)胞粘附和運(yùn)動(dòng)來(lái)發(fā)揮對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用。

淫羊霍苷；AGS細(xì)胞；轉(zhuǎn)移

腫瘤細(xì)胞的粘附性和運(yùn)動(dòng)性是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要因素。筆者通過(guò)觀察淫羊霍苷對(duì)胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS粘附和移動(dòng)能力的影響，探討淫羊霍苷抗腫瘤的作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料淫羊霍苷購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，RPMI-1640培養(yǎng)基購(gòu)自Hyclone公司，小牛血清購(gòu)自Gibco公司，AGS細(xì)胞株由三峽大學(xué)提供。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) AGS細(xì)胞株用含10%小牛血清RPMI 1640培養(yǎng)液(含100mg/L青霉素和鏈霉素)培養(yǎng)并置于37℃，5 %CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)備用。

1.2.2粘附率測(cè)定 粘附實(shí)驗(yàn)采用MTT微量酶反應(yīng)比色法定量粘附細(xì)胞數(shù)，取96孔培養(yǎng)板，每孔加入Ⅰ型膠原溶液50μl，置37℃、5%CO2孵箱孵育1h，PBS洗2次，加入3%牛血清白蛋白0.2ml，孵育2h，PBS再洗2次，包被備用。取不同濃度(0、2、4、8、12、16μg/ml)淫羊霍苷處理24h的AGS細(xì)胞，經(jīng)洗滌、消化后用含1%小牛血清PRMI 1640液稀釋，調(diào)細(xì)胞濃度為8×105個(gè)/ml，分別加入到處理后的96孔板，100μl/孔，每組平行設(shè)5個(gè)復(fù)孔, 37℃、5%CO2條件下溫育60min，溫育結(jié)束后棄去各孔培養(yǎng)液，PBS沖洗除去未粘附細(xì)胞，棄PBS后加MTT使用液(無(wú)血清RPMI 1640溶解，1mg/ml)，50μl/孔，CO2箱溫育3h，吸棄MTT使用液，每孔加DMSO 150μl，靜置10min 后，酶標(biāo)儀測(cè)各孔570nm光密度(D)值。以0μg/ml淫羊霍苷組為對(duì)照組，粘附率按以下公式計(jì)算：

粘附率=實(shí)驗(yàn)組D值/對(duì)照組D值×100%

1.2.3遷移速度測(cè)定 劃痕損傷實(shí)驗(yàn)，用含10%小牛血清RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)AGS細(xì)胞濃度為2×105個(gè)/ml，于96孔板中每孔加細(xì)胞懸液200μl(重復(fù)5 孔)，待細(xì)胞長(zhǎng)成單層換含1%小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液同步化12h，劃“︱”字形劃痕，PBS沖洗，對(duì)照組加培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組加含4μg/ml苦參堿培養(yǎng)液，拍照，37℃，5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后再拍照，測(cè)遷移距離[1]，按以下公式計(jì)算遷移速度：

遷移速度=遷移距離/遷移時(shí)間

2 結(jié)果

注：與2μg/ml組比較，#P lt; 0.01；與 4μg/ml組比較，◆Plt;0.01。圖1 淫羊霍苷對(duì)AGS細(xì)胞粘附性的影響

2.1淫羊霍苷對(duì)AGS細(xì)胞粘附性的影響經(jīng)不同濃度(0、2、4、8、12、16μg/ml)淫羊霍處理24h后，AGS細(xì)胞在Ⅰ型膠原上粘附60min時(shí)，其粘附率隨濃度的增加呈降低趨勢(shì)(見(jiàn)圖1)。其中4μg/ml淫羊霍苷組的粘附率為46.24%，2μg/ml組為73.65%，兩組比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)；8μg/ml組和12μg/ml組分別為43.28%和41.59%，與4μg/ml淫羊霍苷組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Pgt;0.05)，16μg/ml組為20.36%，與4μg/ml淫羊霍苷組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)，因此4μg/ml為淫羊霍苷最佳濃度組。

2.2淫羊霍苷對(duì)AGS細(xì)胞遷移的影響按文獻(xiàn)[1]方法，測(cè)定24h內(nèi)AGS細(xì)胞遷移距離，并計(jì)算其遷移速度。對(duì)照組的遷移速度為(2.62±0.06)μm/h，實(shí)驗(yàn)組(淫羊霍4μg/ml)為(0.84±0.03)μm/h，兩者差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)(見(jiàn)圖2)。

A1、A2為對(duì)照組處理0h和24h；B1、B2為淫羊霍苷(4μg/ml)處理0h和24h圖2 淫羊霍苷對(duì)AGS細(xì)胞遷移的影響(×100)

3 討論

已有研究報(bào)道淫羊霍苷類藥有抑制腫瘤增殖、誘導(dǎo)分化和凋亡、抗腫瘤浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤新生血管形成、減輕致腫瘤炎癥和抑制腫瘤耐藥性、減低化療不良作用、增強(qiáng)腫瘤宿主免疫等功能[2-4]。

本實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度淫羊霍苷處理24h后，AGS細(xì)胞在Ⅰ型膠原上粘附率變化的規(guī)律。結(jié)果顯示，隨著淫羊霍苷濃度的增加，AGS細(xì)胞粘附率呈降低趨勢(shì)，且出現(xiàn)細(xì)胞死亡的現(xiàn)象，表明淫羊霍苷能夠有效地抑制AGS細(xì)胞粘附，可能觸發(fā)細(xì)胞的凋亡，其中4μg/ml淫羊霍苷是最佳濃度，和國(guó)內(nèi)的一些研究結(jié)果相吻合[4]。隨后，在劃痕損傷實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)一步觀測(cè)到4μg/ml淫羊霍苷對(duì)AGS細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)有顯著抑制效應(yīng)。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明淫羊霍苷能抑制AGS細(xì)胞的粘附和移動(dòng)，對(duì)于臨床上治療胃癌的轉(zhuǎn)移具有一定的研究前景。

[1]梁光波，張國(guó)平，金惠銘，等. 體外定量測(cè)定細(xì)胞遷移方法的建立及應(yīng)用[J]. 中國(guó)病理生理學(xué)雜志，2004，20(2) ：175-179.

[2]崔新穎，崔新羽，張成義，等. 淫羊霍苷對(duì)免疫增強(qiáng)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，9(3) ：422-424.

[3]王大光，朱文元，馬慧軍，等. 淫羊藿苷等6種中藥單體抑制Cloudman S91黑素瘤細(xì)胞株黑素合成的研究[J]. 臨床皮膚科雜志，2004，33(4)：202-205.

[4]章志紅，舒虹，林明寶，等. 淫羊霍苷誘導(dǎo)肝癌SMMC-7721細(xì)胞調(diào)亡的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)學(xué)，2006，7(11) ：1-5.

[編輯] 一 凡

2009-05-26

鄢進(jìn)(1981-)，男，湖北石首人，助教，從事生理學(xué)教學(xué)與研究工作。

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2009.03.006

R735.2

A

1673-1409(2009)03-R014-02