邊藏麗，張萬(wàn)明，夏 鵬，張愛華

(長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

大蒜籽浸液預(yù)防日本血吸蟲尾蚴感染的實(shí)驗(yàn)研究

邊藏麗，張萬(wàn)明，夏 鵬，張愛華

(長(zhǎng)江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

目的：探討大蒜籽浸液預(yù)防日本血吸蟲尾蚴感染的效果以及對(duì)皮膚的毒副作用。方法：將實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分成3組：涂抹蒜液未清洗感染組(A組，n=24)、涂抹蒜液清洗感染組(B組，n=24)、涂抹脫氯清水感染對(duì)照組(C組，n=24)，A組小鼠皮膚涂抹大蒜籽浸液后直接用日本血吸蟲尾蚴感染；B組小鼠皮膚涂抹大蒜籽浸液用泥漿水洗擦后感染日本血吸蟲尾蚴, 觀察防護(hù)作用，另以大蒜籽浸液涂于小鼠腹部, 觀察對(duì)皮膚的毒副作用；C組小鼠腹部皮膚涂抹脫氯蒸餾水。結(jié)果：A組小鼠日本血吸蟲尾蚴的感染率為零，減蟲率達(dá)100.00%； B組小鼠感染率為52.38%，減蟲率為80.02%，小鼠皮膚未見異常反應(yīng)。結(jié)論：大蒜籽浸液涂膚有防御日本血吸蟲感染的作用，對(duì)皮膚無(wú)明顯毒副作用。

大蒜籽；日本血吸蟲；尾蚴；小鼠

大蒜為百合科蔥屬植物的地下鱗莖[1]，其提取物對(duì)多種細(xì)菌、霉菌、病毒等有殺滅或抑制作用[2]，并對(duì)釘螺有殺滅作用[3，4]。我們已報(bào)道大蒜籽浸液對(duì)日本血吸蟲尾蚴有較好的殺滅效果[5]。為了進(jìn)一步了解大蒜籽浸液的有關(guān)作用，筆者對(duì)大蒜籽浸液涂抹皮膚預(yù)防日本血吸蟲尾蚴感染的效果以及對(duì)皮膚的毒副作用進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1大蒜籽浸液制備 大蒜籽購(gòu)自荊州市干果批發(fā)市場(chǎng)，由河南省杞縣生產(chǎn)。大蒜250g，剝皮，脫氯清水洗凈晾干，多功能食品粉碎機(jī)搗碎壓汁即成大蒜籽液(簡(jiǎn)稱蒜液)。

1.1.2尾蚴 由江蘇省血吸蟲病防治研究所提供陽(yáng)性釘螺，試驗(yàn)當(dāng)日逸放日本血吸蟲尾蚴。

1.1.3小鼠 昆明種小鼠，3月齡，體質(zhì)量20～24g，雌雄各半。由長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2方法

1.2.1防御日本血吸蟲尾蚴感染實(shí)驗(yàn) 將實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分成3組：涂抹蒜液未清洗感染組(A組，n=24)、涂抹蒜液清洗感染組(B組，n=24)、涂抹脫氯清水感染對(duì)照組(C組，n=24)。

1)脫毛與麻醉 實(shí)驗(yàn)前小鼠腹部剃毛(范圍2cm×3cm)；皮下注射10% 水合氯醛0.1ml進(jìn)行麻醉。

2)涂抹蒜液 將蒜液涂抹在已麻醉的A組和B組小鼠腹部脫毛皮膚上，僅涂1次。 C組小鼠腹部皮膚涂抹脫氯蒸餾水1次。

3)清洗 B組小鼠在涂蒜液10min后，用毛筆醮泥漿水洗擦涂蒜液部位約8次，再用清水洗擦，使皮膚上蒜液基本洗凈，然后用紗布擦干。

4)感染與收集蟲體 取日本血吸蟲尾蚴(40±5)條貼于A、B、C三組小鼠腹部，感染20min。重復(fù)實(shí)驗(yàn)一次。40d后解剖小鼠， 用灌注法加撕碎法收集蟲體。首先經(jīng)上腔靜脈灌注沖洗，解剖鏡下計(jì)數(shù)其肝、腸靜脈叢內(nèi)的蟲體數(shù)；灌洗結(jié)束，取下肝、腸，用小鑷子將肝與腸系膜拉碎，檢查、計(jì)數(shù)未沖出的蟲體，計(jì)算小鼠感染率、平均蟲荷數(shù)以及減蟲率。減蟲率計(jì)算公式為:

1.2.2皮膚毒副作用實(shí)驗(yàn)

1)皮膚急性毒副作用實(shí)驗(yàn) 將24只腹部剃毛小鼠歸籠觀察24～48h，檢查皮膚有無(wú)損傷、紅腫、皮疹等，無(wú)異常者開始涂抹蒜液與蒸餾水(對(duì)照組)，每組12只，1d涂3次，僅涂1d。每天觀察腹部皮膚有無(wú)不良反應(yīng)，觀察小鼠的活動(dòng)、飲食、糞便有無(wú)異常或死亡，連續(xù)觀察7d后剖殺。取腹壁涂蒜液部位皮膚組織切片及主要臟器(心、肝、腎、腸)的組織切片，觀察組織結(jié)構(gòu)的變化。

2)皮膚慢性毒副作用實(shí)驗(yàn) 將24只腹部剃毛小鼠歸籠觀察24～48h，皮膚檢查無(wú)異常者涂抹蒜液與蒸餾水(對(duì)照組)，每組12只，每天涂1次，連續(xù)涂15d，結(jié)果觀察同急性毒副作用實(shí)驗(yàn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理率的差異性檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1防御日本血吸蟲尾蚴感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠腹部皮膚涂抹蒜液未清洗組(A組)對(duì)日本血吸蟲尾蚴的感染率為零，減蟲率達(dá)100.00%；涂抹蒜液后清洗組(B組)感染率為52.38%，減蟲率達(dá)80.02%。A組與C組比較血吸蟲尾蚴感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.02，Plt;0.01)；B組結(jié)果與C組比較血吸蟲尾蚴感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.39，Plt;0.05)；而A組與B組比較血吸蟲尾蚴感染率差異亦有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.31，Plt;0.01)。結(jié)果見表1。

表1蒜液防御日本血吸蟲尾蚴感染的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2皮膚毒副作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果皮膚急性毒副作用實(shí)驗(yàn)與慢性毒副作用實(shí)驗(yàn)觀察，小鼠腹部皮膚無(wú)損傷、紅腫、皮疹等異常反應(yīng)；其活動(dòng)、飲食、糞便均正常，小鼠健康活潑，無(wú)死亡現(xiàn)象；皮膚、心、肝、腎、腸的組織切片觀察組織結(jié)構(gòu)正常。與蒸餾水涂抹對(duì)照組小鼠比較無(wú)明顯不同。

3 討論

日本血吸蟲生長(zhǎng)過程中唯有尾蚴能主動(dòng)鉆入人和動(dòng)物皮膚(或粘膜)而導(dǎo)致感染，因此防止尾蚴侵入皮膚即可防止血吸蟲感染。國(guó)內(nèi)曾篩選研制了多種預(yù)防尾蚴感染的藥物[6-8]，均有良好的防護(hù)作用，但或多或少地存在一些缺點(diǎn)，不易被群眾所接受[9]。為了適應(yīng)實(shí)際預(yù)防工作需要，研制新的預(yù)防尾蚴感染制劑很有必要。

我們?cè)鴪?bào)道蒜液有較好的殺滅日本血吸蟲尾蚴的作用[5]，大蒜籽原液在2s內(nèi)可迅速殺死日本血吸蟲尾蚴，體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50%至1.57%蒜液殺死日本血吸蟲尾蚴的平均時(shí)間為6s至484s，已殺滅的血吸蟲尾蚴對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無(wú)感染性[5]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小鼠皮膚涂抹蒜液可以防御日本血吸蟲尾蚴的感染，在涂抹蒜液未清洗的小鼠組血吸蟲尾蚴感染率為零，減蟲率達(dá)100.00%；涂抹蒜液清洗小鼠組其感染率為52.38%，減蟲率達(dá)80.02%，兩組結(jié)果與對(duì)照組比較日本血吸蟲尾蚴感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)，表明蒜液對(duì)預(yù)防日本血吸蟲尾蚴感染有較好的作用，可明顯的降低感染率和減蟲率。而涂抹蒜液未清洗小鼠組與涂抹蒜液清洗小鼠組結(jié)果比較血吸蟲尾蚴感染率差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)，表明涂抹的蒜液在該條件下清洗時(shí)，易洗掉導(dǎo)致小鼠感染。蒜液對(duì)皮膚毒副作用實(shí)驗(yàn)觀察，未見小鼠的異常反應(yīng)，表明蒜液對(duì)小鼠無(wú)明顯的毒副作用，可用于皮膚。蒜液對(duì)預(yù)防血吸蟲尾蚴感染的作用，可能與二烯丙基三硫化物等化學(xué)成分有關(guān)，其詳細(xì)機(jī)制還有待進(jìn)一步探討。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步進(jìn)行動(dòng)物現(xiàn)場(chǎng)預(yù)防效果研究以及研制新的預(yù)防尾蚴感染制劑提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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[編輯] 一 凡

2009-04-12

湖北科技攻關(guān)計(jì)劃資助項(xiàng)目(2006AA402C51)

邊藏麗(1955-)，女，河南舞陽(yáng)人，教授，碩士生導(dǎo)師，從事病原生物學(xué)教學(xué)與研究工作。

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2009.03.001

R383.24

A

1673-1409(2009)03-R001-02