周國杰 黃曉玲 范秀萍

摘要對波紋巴非蛤全臟器中的糖蛋白的分離提取條件進(jìn)行研究,結(jié)果表明:以0.5moL/L的NaCl溶液為浸提液,料液比為1∶12,75℃水浴浸提90min,提取液經(jīng)透析濃縮,再以60%乙醇終濃度沉淀,得到糖蛋白粗品,其得率為1.64%,總糖與可溶性蛋白含量分別為38.3%和17.1%。

關(guān)鍵詞波紋巴非蛤;糖蛋白;分離提取;工藝條件

中圖分類號TS254.1;TQ936.22+3文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739(2009)21-0260-02

糖蛋白(glycoprotein)是一類由糖類與多肽或蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵連接而形成的結(jié)合蛋白,是生物體內(nèi)重要的一類大分子,種類繁多,分布廣泛,具有多種重要功能。目前已有報(bào)道證實(shí)從海洋軟體動物海兔、蝦夷扇貝、管角螺中提取的糖蛋白有明顯的抗腫瘤、增強(qiáng)免疫活性。自由基是人體生命活動中生物化學(xué)反應(yīng)的中間產(chǎn)物,許多疾病的發(fā)生、發(fā)展與自由基對組織的損傷有密切關(guān)系,自由基可加快機(jī)體的衰老過程,可誘發(fā)癌癥、心血管疾病等。該研究采用鹽提法提取波紋巴非蛤(Paphia undulata)全臟器中的糖蛋白,對其工藝條件進(jìn)行初步探討,以供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

波紋巴非蛤采自湛江市東風(fēng)市場,去殼后,于-18℃冷凍備用。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1糖蛋白分離提取方法。原料→勻漿→加浸提液→浸提→冷卻→紗布過濾→濾液濃縮至體積的1/4→醇沉→離心→沉淀物用乙醇、丙酮交替洗滌3次→恒溫干燥→糖蛋白粗品。

1.2.2檢測方法?？偺呛繙y定采用苯酚-硫酸法;蛋白含量測定采用考馬斯亮藍(lán)法。

2結(jié)果與分析

2.1不同浸提液濃度對糖蛋白提取效果的影響

分別以蒸餾水(0moL/L NaCl)、0.5moL/L NaCl、1.0moL/L NaCl、1.5 moL/L NaCl等4種溶液作為浸提劑,料液比為1∶10,80℃下浸提60min。檢測浸提液中的總糖含量與總蛋白含量,結(jié)果如圖1所示。4種浸提劑提取液中總糖含量明顯高于蛋白含量,蛋白含量為0moL/L NaCl>0.5moL/L NaCl>1.0moL/L NaCl>1.5moL/L NaCl,總糖含量為0.5moL/L NaCl>0moL/L NaCl>1.5 moL/L NaCl >1.0moL/L NaCl,其中以0.5moL/L NaCl溶液的浸提液中總糖與蛋白含量均為最高,分別可達(dá)到2.63%和0.94%。

2.2不同料液比對糖蛋白提取效果的影響

采用0.5moL/L NaCl溶液為浸提劑,比較不同的料液比對其提取效果的影響,結(jié)果見圖2。隨著料液比的增大,浸提液中總糖含量與可溶性蛋白含量均先上升后下降,在1∶10料液比中達(dá)到最大,分別達(dá)到3.92%和0.62%。

2.3不同溫度對糖蛋白提取效果的影響

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,分別在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃條件下浸提,比較不同溫度對糖蛋白提取的影響,結(jié)果見圖3。隨著溫度的升高浸提液中的蛋白含量呈上升趨勢;而總糖含量呈先上升后下降趨勢,在70℃時(shí)含量最高。考慮到在高溫條件下浸提液中變性蛋白的含量增多,因此選擇浸液中總糖含量最高時(shí)的溫度70℃作為提取溫度。

2.4不同浸提時(shí)間對糖蛋白提取效果的影響

以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,在70℃條件下分別浸提30min、60min、90min、120min,比較不同浸提時(shí)間對糖蛋白提取效果的影響,結(jié)果見圖4。隨著浸提時(shí)間的延長,浸提液中總糖含量明顯高于蛋白含量,在90min時(shí)分別為1.71%和1.12%。

2.5正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,以鹽濃度、料液比、浸提溫度與時(shí)間為4因素,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)表(見表1);以浸提液中總糖與總蛋白含量為指標(biāo)檢測糖蛋白的提取效果,結(jié)果見表2。

通過R可知4個(gè)因素中對波紋巴非蛤中糖蛋白的提取率影響大小次序?yàn)?C>A>B>D,最佳的提取條件的水平組合為A2B3C3D2,即:采用0.5moL/L NaCl溶液為浸提劑,料液比1∶12, 75℃浸提90min。

2.6乙醇沉淀分離

將95%乙醇在攪拌下緩慢加入濃縮液中,使乙醇終濃度分別至50%、60%、70%、80%,結(jié)果見圖5。當(dāng)乙醇終濃度為60%時(shí)得到的糖蛋白中的總糖含量、蛋白含量和得率均達(dá)到最大,分別為38.3%、17.1%和1.64%。

3結(jié)論

波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取工藝條件為:采用0.5 moL/L NaCl溶液為浸提劑,料液比1∶12,75℃浸提90min。浸提液經(jīng)透析脫鹽,60%的乙醇終濃度沉淀得波紋巴非蛤糖蛋白,得率為1.64%,總糖與可溶性蛋白含量分別為38.3%和17.1%。

4參考文獻(xiàn)

[1] KISUGI J,OHYE H.Biopolymers from marine invertebrates X, Mode of action of an antibacterial glycoprotein E, from eggs of a sea hare Aplysia kurodai[J].Chem Pharm Bull,1989,37(11):3050-3055.

[2] 顧謙群,方玉春,辛現(xiàn)良,等.櫛孔扇貝糖蛋白的腫瘤抑制活性和對免疫功能的影響[J].營養(yǎng)學(xué)報(bào),2001,23(3):200-202.

[3] 傅余強(qiáng),顧謙群,劉睿,等.管角螺肌肉中性糖蛋白的化學(xué)組成及抗腫瘤活性研究[J].中國海洋藥物,2002(6):20-24.

[4] 張惟杰.糖復(fù)合物生化研究技術(shù)[M].杭州:浙江大學(xué)出版社,1999.

[5] 方旭波,陳小娥,余輝,等.魷魚硫酸軌骨素糖蛋白的分離純化和鑒定[J].中國食品學(xué)報(bào),2009(4):103-109.

[6] 胡雪瓊,吳紅棉,胡俊輝,等.超聲波輔助提取邁江牡蠣糖蛋白的工藝優(yōu)化[J].食品工業(yè)科技,2009(7):235-237,240.

[7] 范秀萍,吳紅棉,王婭楠,等.波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取及體外清除羥自由基活性的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2008(1):138-140.

[8] 任國艷,李八方,趙雪,等.海蜇頭糖蛋白超聲輔助提取工藝研究[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),2008(2):255-259.

[9] 章建設(shè),雷曉凌.魷魚內(nèi)臟糖蛋白提取工藝及其免疫活性初步研究[J].現(xiàn)代食品科技,2008(2):167-169,166.

[10] 曾婷婷,徐明生,蔣艷.超聲波提取河蜆糖蛋白[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008(1):144-148.