黃立華　王占龍　于　欣

摘要：春季采取歐洲花楸品種1（Sorbus aucuparia European Mounain） 和品種2“太陽(yáng)神”（Sorbus aucuparia Titan）的尚未萌動(dòng)的1年生帶側(cè)芽莖段為試材，用0.1％Hgcl2分別用不同的時(shí)間進(jìn)行處植體表面消毒。結(jié)果表明這兩個(gè)品種的1年生帶側(cè)芽莖段滅菌時(shí)間為15min效果較好；而在分化增殖階段，培養(yǎng)基MS+6-BA0.8mgL-1(以下單位同)+NAA0.4+肌醇15的分化苗較為粗壯，增殖系數(shù)大于9。而在同一個(gè)生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中培養(yǎng)生根苗時(shí)，光照時(shí)間為14 小時(shí)，發(fā)根情況好，苗健壯，移栽易成活。

關(guān)鍵詞：歐洲花楸；組織培養(yǎng)；繁殖試驗(yàn)

歐洲花楸（Sorbus aucuparia ），屬薔薇科、花楸屬。原產(chǎn)歐洲和亞洲西部。歐洲花楸為喜光和半耐蔭先鋒樹(shù)種，耐旱性強(qiáng)，耐寒力強(qiáng)，栽培性狀優(yōu)良，既可耐冷濕環(huán)境，也能耐干燥瘠薄土壤，可用于荒山綠化。歐洲花楸屬落葉小喬木，春天花朵為白色，復(fù)傘房花序，花朵密集，繁花似錦，葉片春夏季為深綠色，秋季為鮮艷的紫紅色，有光澤，整個(gè)冬季至翌年2月橘紅色的果實(shí)宿存于枝頭，與瑞雪互映，這在東北一般園林花木中是不可多得的。歐洲花楸在歐洲已被廣泛應(yīng)用于園林綠化中。果實(shí)可用于加工天然實(shí)用色素、食品、功能性飲料、藥品。可以說(shuō)歐洲花楸是集食用、園林和生態(tài)價(jià)值于一身的珍貴樹(shù)種。

為了加快推廣速度，滿足市場(chǎng)的苗木需求，我們自2004年開(kāi)始通過(guò)組培快繁大量獲得歐洲花楸組培苗，快繁組培苗已達(dá)到每年約50000株已形成規(guī)?；a(chǎn)。期望本文能對(duì)歐洲花楸規(guī)?；耘嗵峁┮粭l可能有效的途徑。

1試驗(yàn)材料

1.1植物名稱a.歐洲花楸（Sorbus aucuparia European Mounain）

b.歐洲花楸“太陽(yáng)神”（Sorbus aucuparia Titan）。

1.2 材料類別1年生帶側(cè)芽莖段

1.3 取材時(shí)間4月份芽尚未萌動(dòng)前。

1.4 取材地點(diǎn)遼寧省干旱地區(qū)造林研究所的歐洲花楸試驗(yàn)園。

2 試驗(yàn)材料的處理與消毒

將品種a.（Sorbus aucuparia European Mounain）和品種b.太陽(yáng)神（Sorbus aucuparia Titan）的外植體材料流水沖洗30min。放入肥皂液中用毛刷輕輕刷去植物表面的泥土，清水沖洗干凈。將外植體剪成15cm左右的莖段，用自來(lái)水沖洗2～3h后將材料置于超凈工作臺(tái)上，先用75％酒精消毒1min，再用無(wú)菌水沖洗3次，繼而以0.1％的Hgcl2分別對(duì)兩個(gè)品種的外植體表面消毒10 min、15min、20min（滅菌效果見(jiàn)表1），無(wú)菌水沖洗5次，取出一根莖段將其放在已經(jīng)過(guò)高溫滅菌的吸水紙上，吸干表面水分后，在無(wú)菌紙上將外植體切成1～2cm左右?guī)б秆康那o段，接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每瓶為一個(gè)帶芽莖段。啟動(dòng)培養(yǎng)成功后，再將啟動(dòng)培養(yǎng)萌動(dòng)的嫩梢轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

3 培養(yǎng)條件

3.1培養(yǎng)基

芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS＋6－BA1.0mgL-1(單位下同)＋NAA0.2。

分化增殖培養(yǎng)基：

MS＋6-BA0.8+NAA0.4（1）

MS+6-BA0.8+NAA0.4+肌醇15（2）

MS+6-BA0.8+NAA0.1（3）

MS+6-BA0.4+NAA0.4（4）

MS+6-BA1.5+NAA0.4（5）

生根培養(yǎng)基：1/2MS+IBA0+NAA0.05

本試驗(yàn)以MS為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中均附加3%蔗糖和0.6%瓊脂，PH5.8，培養(yǎng)室溫為23～28℃，光照度為1500～2000Lx，啟動(dòng)培養(yǎng)和分化增殖培養(yǎng)的光照時(shí)間為12hd-1，生根培養(yǎng)的光照時(shí)間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。

4 無(wú)菌培養(yǎng)

4.1 芽的誘導(dǎo)與叢生芽培養(yǎng)

芽在誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS＋6－BA1.0mgL-1＋NAA0.2中培養(yǎng)20d后開(kāi)始萌動(dòng)，伸長(zhǎng)成無(wú)菌苗。培養(yǎng)超過(guò)30d后，長(zhǎng)成3～6cm高的大量叢生芽。將無(wú)菌綠苗剪切成2cm左右的莖段，轉(zhuǎn)接到激素含量不同的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長(zhǎng)增殖結(jié)果見(jiàn)表2。

4.2 根的誘導(dǎo)

繼代增殖培養(yǎng)的2～5cm高的無(wú)根幼苗切成單株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基+6-BA0.2+NAA0，生根培養(yǎng)的光照時(shí)間為12hd-1、14hd-1、16hd-1。培養(yǎng)7d后在不定芽的基部開(kāi)始有不定根突起，15d后大部分不定芽均有根長(zhǎng)出，生根率達(dá)90%～100%，30d左右每個(gè)小芽可發(fā)根4～8條形成幼苗，生根情況見(jiàn)表3

5 煉苗與移栽

生根苗培養(yǎng)30d后，苗長(zhǎng)到5cm高時(shí)，把瓶蓋揭開(kāi)一半，往瓶里倒少許自來(lái)水，以防培養(yǎng)基抽干，馴化3d后，再把瓶蓋全部揭開(kāi)，再馴化一周之后，取出生根苗，用水洗去全部培養(yǎng)基，移栽到營(yíng)養(yǎng)杯中，營(yíng)養(yǎng)杯中的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)為肥沃熟表土＋草炭土＋鐵礦尾砂，比例為：4：3：3。將營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)用高錳酸鉀消毒。培養(yǎng)苗移栽至培養(yǎng)杯后澆透定根水，上搭遮陰網(wǎng)，栽培環(huán)境溫度控制在17℃～27℃，相對(duì)濕度為90％，1周?chē)?/2MS大量元素營(yíng)養(yǎng)液1次。30d后，苗的成活率可達(dá)97％。

6 結(jié)果與分析

6.1 不同滅菌時(shí)間對(duì)滅菌效果的影響

用0.1Hgcl2對(duì)兩個(gè)試驗(yàn)品種的外植體進(jìn)行10min、15min、20min的滅菌，結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1 可以看出，這兩個(gè)品種的1年生莖段的滅菌時(shí)間15min效果較好，滅菌率在80％以上。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，滅菌時(shí)間短，雜菌不能全部殺死就會(huì)造成污染，而滅菌時(shí)間超過(guò)15min，兩個(gè)品種的莖段及腋芽除污染外，大部分褐化，雖培養(yǎng)了較長(zhǎng)時(shí)間也未見(jiàn)萌動(dòng)。

6.2不同培養(yǎng)基對(duì)芽的分化增殖的影響

將誘導(dǎo)成功的無(wú)菌綠苗剪切成2cm左右的莖段轉(zhuǎn)接到激素含量、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同不同的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，生長(zhǎng)、增殖情況見(jiàn)表2。

由表2可以看出，1號(hào)培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4和2號(hào)培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15中培養(yǎng)的無(wú)菌苗增殖系數(shù)高，并且無(wú)菌苗長(zhǎng)得較為粗壯。尤其是2號(hào)培養(yǎng)基，自2005年10月對(duì)無(wú)菌苗進(jìn)行大量增殖培養(yǎng)后，用2號(hào)培養(yǎng)基重復(fù)繼代培養(yǎng)2005年春季的誘導(dǎo)分化成功的無(wú)菌苗，苗的增殖系數(shù)始終保持在9.0 以上，生長(zhǎng)狀況穩(wěn)定，未見(jiàn)發(fā)生變異，生根狀況良好。與每年新誘導(dǎo)分化成功的新的無(wú)菌苗的增殖生長(zhǎng)情況無(wú)差異。而未加肌醇的培養(yǎng)基中的無(wú)菌苗，隨著繼代次數(shù)的增加，組培苗的分化系數(shù)呈下降趨勢(shì)，長(zhǎng)勢(shì)弱于2號(hào)培養(yǎng)基中的組培苗。這說(shuō)明肌醇有利于歐洲花楸的組培苗增殖。5號(hào)培養(yǎng)基MS+6-BA1.5+NAA0.04雖然分化系數(shù)最高，但叢生苗過(guò)于細(xì)弱，幼苗生長(zhǎng)無(wú)力，試管苗有玻璃化現(xiàn)象。3號(hào)培養(yǎng)基MS+6-BA0.8+NAA0.1中苗生長(zhǎng)無(wú)力，葉色發(fā)黃、落葉。4號(hào)培養(yǎng)基MS+6-BA0.4+NAA0.4中無(wú)菌苗的增殖系數(shù)低，不利于增殖分化。可見(jiàn)，6-BA濃度低時(shí)，增殖系數(shù)低，而6-BA濃度高時(shí)，增殖系數(shù)高，但容易形成大量弱叢生苗，不能用于下一步的分化、生根培養(yǎng)；6-BA濃度過(guò)高時(shí)，莖基部會(huì)產(chǎn)生大量愈傷組織，試管苗發(fā)生玻璃化現(xiàn)象，影響分化。所以說(shuō)，2號(hào)培養(yǎng)基MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15是歐洲花楸增殖分化的最適培養(yǎng)基。

6.3不同光照時(shí)間對(duì)歐洲花楸無(wú)菌苗生根的影響

2～5cm高的叢芽切成單株后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5+NAA0.05中，生根培養(yǎng)的光照時(shí)間為12hd-1、14hd-1、16hd-1培養(yǎng)，無(wú)菌苗的生根情況見(jiàn)表3。

由表3可以看出，在相同的生根培養(yǎng)基中，光照時(shí)間在14小時(shí)以上，生根苗的根系生長(zhǎng)好，植株長(zhǎng)高，健壯、葉色鮮綠（見(jiàn)圖片二），移栽成活率超過(guò)90％。光照14hd-1與光照16hd－1的生長(zhǎng)情況無(wú)差異，從節(jié)約能源角度出發(fā)，生根時(shí)的光照時(shí)間為14hd-1即可。

7 結(jié)論

7.1 對(duì)1年生、尚未萌動(dòng)的帶側(cè)芽莖段消毒的時(shí)間以15min較好，滅菌率在80％以上。

7.2 激素濃度與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)影響芽的分化率與增殖系數(shù)，每千克激素濃度相同的培養(yǎng)基中加入15g肌醇可使經(jīng)過(guò)多次繼代培養(yǎng)的無(wú)菌苗的增殖系數(shù)仍保持在9以上。初步篩選出芽分化增殖階段的最適培養(yǎng)基為MS＋6-BA0.8+NAA0.4＋肌醇15；

7.3 在生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根培養(yǎng)階段光照時(shí)間在14小時(shí)以上，有利于根系的生長(zhǎng)。苗壯，苗移栽成活率高。

通過(guò)四年的歐洲花楸組培擴(kuò)繁試驗(yàn)，雖然獲得了一些有成效的經(jīng)驗(yàn)，為加快歐洲花楸組培擴(kuò)繁和推廣速度具有一定的參考意義。但仍有需要完善和進(jìn)一步探索的地方，如：在增殖分化培養(yǎng)基中加入肌醇對(duì)增加增殖系數(shù)的最佳量及作用機(jī)理還需做深入的探索、研究。

參考文獻(xiàn)

[1]曹孜義劉國(guó)民 實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程（1996）。

[2]周丹宿宗艷 歐洲花楸應(yīng)用價(jià)值的探 討中國(guó)林副特產(chǎn)，90（5）：83.

[3]馬東菁葉景峰 貼梗海棠組織培養(yǎng)技術(shù)研究初報(bào)遼寧林業(yè)科技，213（4）：51.

[4]韓文忠馬興華 歐洲花楸組織培養(yǎng)與快速繁殖試驗(yàn)研究中國(guó)林副特產(chǎn)，82（3）21.