王　汝　趙　斌　陳德芹　楊艷輝　王　青　周恒科

【摘要】 目的 探討應(yīng)用布氏鏡相差顯微鏡監(jiān)測(cè)2型糖尿病合并冠心病治療前后活血片中血小板聚集狀況的臨床意義。方法 選擇2型糖尿病合并冠心病患者101例，進(jìn)行常規(guī)治療，治療前后應(yīng)用布氏鏡相差顯微鏡在同一條件下檢測(cè)患者活血片中的血小板聚集狀況，與32例正常對(duì)照組的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析。結(jié)果 2型糖尿病合并冠心病各年齡組患者治療前、治療后檢測(cè)的結(jié)果比較，P<0.05，差異有顯著性。治療后檢測(cè)血小板聚集的結(jié)果與正常對(duì)照組比較，P>0.05差異無顯著性。結(jié)論 與傳統(tǒng)診斷2型糖尿病合并冠心病患者的療效檢測(cè)方法比較，布氏鏡相差顯微鏡可直接觀察血液中血小板的聚集狀況，并且能跟蹤觀察其治療效果，其方法簡(jiǎn)便可行，值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 2型糖尿病合并冠心病；布氏鏡；活血片；血小板聚集

The state of platelet aggregation of type 2 DM in coronary heart disease before and after treatment monitored by BVPM

WANG Ru,ZHAO Bin,CHEN De-qin，et al.The Peoples Hospital of Shanting,Zaozhuang City,Shandong Province 277100,China

【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of the state of platelet aggregation of the activating blood film of the type 2 DM with coronary heart diseaseby usingBradford variable projective microscopy (BVPM).Methods To contrast 101 cases of Type 2 DM with coronary heart disease with routine treatment with BVPM at the same testing conditions with 32 patients of control group.Results To investigate the results of the testing of all age patients groups of type DM 2 with coronary heart disease,P<0.05,the difference was significant.After treatment,testingthe results of platelet aggregation with the group,P>0.05 There was no significant difference.Conclusion Contrast with the traditional diagnosis detection methods of Type 2 DM with coronary heart disease,the difference was that BVPM can be directly observed situation of the blood platelet aggregation and it can be able to follow their treatment.It is simple and feasible,it is worth promoting.

【Key words】 Type 2 DM with coronary heart disease; Bradford variable projective microscopy (BVPM) ; Activating blood film ;Platelet aggregation

心血管疾病是糖尿病患者死亡的主要原因之一。糖尿病患者中冠心病發(fā)病率高于非糖尿患者群，2型糖尿病合并冠心病發(fā)生年齡通常在50~60歲，具有病死率高、預(yù)后差和再發(fā)等特點(diǎn)。因此必須重視糖尿病合并冠心病的防治。2型糖尿病合并冠心病的治療，主要是針對(duì)與胰島素抵抗相關(guān)的高血糖、高血脂和高胰島素血癥誘發(fā)的凝血異常、血小板聚集、纖維蛋白原和纖溶酶原激活物升高等危險(xiǎn)因子而實(shí)施的 ［1］ ；其療效監(jiān)測(cè)相對(duì)復(fù)雜，且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，價(jià)格昂貴。本項(xiàng)研究利用美國布氏鏡相差顯微鏡直接觀察患者治療前、后活血片中的血小板聚集情況，進(jìn)行對(duì)比分析，取得滿意的效果。

1 資料和方法

1.1 研究對(duì)象 2006年1月至2007年12月收治住院2型糖尿病合并冠心病患者101例，男48例，女52例，年齡40~70歲；全部患者均符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組32例，男15例，女17例，年齡45~70歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：無高血壓、糖尿病、高脂血癥、感染、腫瘤、肝腎功能不全、缺血性心腦血管病及其他血管性病變。

1.2 方法

1.2.1 所有患者診斷后即可采血，最遲不超過發(fā)病后4~6ｈ，然后給予臨床常規(guī)治療，經(jīng)心電圖、血液等常規(guī)檢測(cè)，治療顯效后再次采集活血片進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)照組同時(shí)給予采血，在同一條件下監(jiān)測(cè)血小板的聚集情況。

1.2.2 活血片制作是否合乎要求直接影響檢測(cè)結(jié)果，采血部位為右手無名指內(nèi)側(cè)，離指甲中線0.3 cm處，用75%乙醇消毒，再用無菌紗布?jí)K擦去小指表面剩余酒精，以專用一次性采血針垂直于指紋線快速進(jìn)針3 mm，以便血液自然流出，避免擠壓，動(dòng)作要快，以防止血小板自然聚集，用20 μl的微量采血管，先于采血前吸10 μl 0.6 mol/L硫酸鎂溶液,滴在消毒潔凈的載玻片上，然后再快速吸20 μl血液滴在硫酸鎂液體上，用微量吸管吸出吸進(jìn)幾次混勻，0.6 mol/L硫酸鎂的作用是減少血小板自然聚集與裂解，但對(duì)已形成聚集的血小板塊不影響，血液與硫酸鎂的比例達(dá)2∶1時(shí)效果最佳［2］，將潔凈蓋玻片蓋在血滴上并用帶橡皮頭的鉛筆輕擊蓋玻片幾下，使其血滴壓平、壓薄均勻散開，靜置3 min后進(jìn)行活血片鏡檢。先選擇暗視野（DF）,用高倍鏡最大倍數(shù)（接物鏡頭40×）;光亮度調(diào)到最亮，然后調(diào)焦聚，使監(jiān)視器上細(xì)胞得到最佳清晰度，再轉(zhuǎn)用相差光源，按順序，全面觀察，以防遺漏和重復(fù)，計(jì)數(shù)血小板聚集量，依次予以分級(jí)。

1.2.3 血小板聚集程度的量化 以血小板聚集的最大凝集塊中的血小板數(shù)目分，可分為III級(jí)：1級(jí)：5~15個(gè)/塊，輕度聚集；II級(jí)：16~35個(gè)/塊，中度聚集；III級(jí)：36個(gè)以上/塊，重度聚集。血小板聚集5個(gè)以上認(rèn)為就是不可逆的。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，治療前、后比較進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

在同一條件下，患者在各年齡組中，男女比例分配均等，2型糖尿病合并冠心病組治療前、后與正常對(duì)照組血小板（PC）聚集比較見表1。

3 討論

3.1 2型糖尿病合并冠心病各組治療前血小板（PC）聚集程度與正常對(duì)照組對(duì)比分析，P<0.01，差異有極顯著性。治療前與治療后各組比較，P<0.05，差異有顯著性，治療前，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各組比較P>0.05差異無顯著性；治療后各組與正常對(duì)照組比較，P>0.05差異無顯著性；Ⅰ、Ⅱ組血小板（PC）III級(jí)聚集治療前、后比較P<0.05，差異有顯著性，由此看出，51~60歲左右的患者血小板（PC）III級(jí)聚集較多，出現(xiàn)栓塞的危險(xiǎn)性要高。通過各年齡組監(jiān)測(cè)結(jié)果可以看出，2型糖尿病合并冠心病患者PC聚集狀況無男女性別差異，Ⅰ組與Ⅲ、Ⅳ組比較II級(jí)血小板聚集P<0.05，差異有顯著性，對(duì)61歲以上的患者一定要加以監(jiān)測(cè)和治療。

3.2 冠心病的主要病理變化為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起不同程度的管腔狹窄、痙攣、甚至斑塊破裂、血栓形成，造成相關(guān)動(dòng)脈的部分或完全阻塞。冠心患者微血管內(nèi)皮損傷到纖維斑塊形成是一件復(fù)雜的病理過程。電鏡顯示，內(nèi)皮細(xì)胞廣泛脫落，其表面纖維素和血小板附著，并有脂質(zhì)、鈣鹽的沉積。血小板的參與是其生理病理發(fā)生不可缺少的因素，血小板首先黏附聚集，血管損傷后，流經(jīng)此血管的血小板被血管內(nèi)皮下組織表面激活，立即黏附于損傷處暴露的膠原纖維上。粘附主要是一種表面現(xiàn)象，黏附一旦發(fā)生了，血小板的聚集過程也隨即發(fā)生。聚集是指一些血小板相互粘連在一起的過程。聚集開始時(shí)血小板由圓盤形變成球形，并伸出一些貌似小刺的偽足，同時(shí)血小板脫粒，即原來儲(chǔ)存于致密顆粒內(nèi)的ADP、5-羥色胺等活性物質(zhì)被釋放，一方面激活血小板和激活內(nèi)源性凝血途徑；損壞的血管組織釋放凝血因子Ⅲ，激活外源性凝血途徑，于是在此局部迅速形成凝血酶；另一方面血管損傷使局部血管壁前列腺環(huán)素（PGI2）減少。這樣，由此血管通過的血小板即粘附于損傷處的膠原纖維上，隨即血小板也發(fā)生變形、聚集，并激活磷脂酶A2導(dǎo)致合成磷脂及血栓素A2(TXA2),TXA2可使血小板內(nèi)CAMP減少而游離Ca2+增多，以至血小板脫粒釋放內(nèi)源性ADP，又使更多的血小板聚集，迅速形成松軟的止血栓子，部分聚集的血小板或止血栓子隨著血液循環(huán)到各毛細(xì)血管［3］。

3.3 糖尿病患者血脂增高能促使血管壁細(xì)胞攝取脂質(zhì)和動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞攝取膽固醇；LDL的糖基化抑制肝細(xì)胞上受體對(duì)其識(shí)別而使其代謝減慢，并通過清道夫受體結(jié)合而被巨噬細(xì)胞優(yōu)先吞噬和降解，堆積在巨噬細(xì)胞內(nèi)成為泡沫細(xì)胞而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。糖尿病患者尤其在血糖控制不良時(shí)，患者由于LDL∶TG產(chǎn)生過多，同時(shí)高血糖產(chǎn)生糖基化反應(yīng)，長(zhǎng)期高血糖環(huán)境亦可促使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，并抑制其修復(fù)，更容易造成血小板聚集，聚集后的血小板斑塊，可隨血液循環(huán)流經(jīng)全身。本研究就是通過手指血液來檢測(cè)血小板聚集狀況的。

3.4 本研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者中有合并冠心病的都同時(shí)有高血糖、高脂血癥。因此，對(duì)2型糖尿病合并冠心病患者，應(yīng)該及早采取有效的治療措施，綜合施治，隨時(shí)監(jiān)測(cè)其療效。通過本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用美國布氏鏡相差顯微鏡動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)糖尿病合并冠心病患者，具有高效、實(shí)用，可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)其療效程度，優(yōu)于其他診斷方法。

3.5 布氏鏡是由美國生產(chǎn)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)學(xué)的高分辨超顯微系統(tǒng)的精密顯微鏡，其功能特點(diǎn)與普通顯微鏡相比，放大倍數(shù)高，可達(dá)3萬倍，普通顯微鏡最多只能放大2千倍左右。布氏鏡還采用了最新光導(dǎo)技術(shù)，配有暗示、相差、明視野等光源，并可直接應(yīng)用可見的偏振光導(dǎo)技術(shù)，配有大屏幕顯示器和彩色記錄儀等部分，擴(kuò)大了光學(xué)顯微鏡的功能范圍，更具有現(xiàn)代化和科學(xué)性，使得生物活體無需經(jīng)過任何特殊處理和染色，就能把以往無法探察的活體微觀世界直觀地顯示在眼前［4］。本課題就是利用了布氏鏡觀察活體血小板聚集狀況，來動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)2型糖尿病合并冠心病患者療效。

4 結(jié)論

本研究應(yīng)用布氏相差顯微鏡動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者活血片血小板聚集狀況，方法簡(jiǎn)便，對(duì)患者隨時(shí)可以監(jiān)測(cè)并且痛苦少，節(jié)約費(fèi)用，監(jiān)測(cè)速度快，患者樂于接受，并能跟蹤觀察其治療效果，值得推廣。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 陳灝珠.實(shí)用內(nèi)科學(xué).人民衛(wèi)生出版社,2005:1028.

［2］ 俞丁善.臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué).人民衛(wèi)生出版社,1997:97-100.

［3］ 張慧玲等.冠心病病人治療前后血漿溶血磷脂酸水平變化的研究.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床,2006,17:27.

［4］ 駱秉銓等.布氏鏡活血分析與細(xì)胞流變學(xué)研究的新方法.微循環(huán)雜志,1997,23：30.