【摘要】目的：觀察六君疏肝湯對(duì)反流性食管炎大鼠模型食管增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)的影響。方法：采用“不全幽門(mén)結(jié)扎+賁門(mén)肌切開(kāi)術(shù)”制作動(dòng)物模型，36只大鼠分為正常組、模型組、治療組。給予相應(yīng)處理后，取食管組織行HE染色，光鏡下觀察組織病變學(xué)變化，用免疫組化的方法測(cè)PCNA表達(dá)。結(jié)果:六君疏肝湯能顯著改變反流性食管炎的病理變化，能顯著抑制PCNA表達(dá)的升高，與模型組相比PCNA的表達(dá)顯著降低。結(jié)論：六君疏肝湯有助于降低PCNA的高表達(dá)，并有抗胃食管反流，減輕食管炎癥的療效。

【關(guān)鍵詞】六君疏肝湯；反流性食管炎；增殖細(xì)胞核抗原

【中圖分類(lèi)號(hào)】R571【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)12-0051-01

1材料和方法

1.1材料健康♀SD大鼠36只，體重200-260g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。六君疏肝湯由人參、白術(shù)、茯苓、炙甘草、陳皮、半夏、香附、砂仁、蘇梗、木香組成。本院制劑中心制備，水煎后濃縮配置，配成430g/L的濃度；治療組為人等效劑量的四倍。PCNA試劑：兔抗鼠PCNA多克隆抗體、SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒為武漢博士德生物有限公司提供。

1.2方法

1.2.1造模造模前大鼠適應(yīng)環(huán)境7d，術(shù)前禁食24h，按30mg/kg，ip10g/L戎巴比妥鈉溶液進(jìn)行麻醉。將大鼠固定于鼠板，取上腹部正中切開(kāi)進(jìn)腹，分離賁門(mén)及胃，縫合血管，縱行切開(kāi)賁門(mén)肌0.5cm至黏膜層，而后分離幽門(mén)，半結(jié)扎幽門(mén)。關(guān)腹前腹腔注入生理鹽水1ml及慶大霉素2萬(wàn)IU，術(shù)后禁食24h，不禁水。觀察大鼠飲食、糞便及活動(dòng)情況，每周測(cè)定體質(zhì)量，術(shù)后三周即造模完成。

1.2.2分組給藥預(yù)留12只作為正常組，其余大鼠按照以上方法進(jìn)行造模，造模完成后將大鼠隨機(jī)分為：模型組、治療組。正常組不治療，其他兩組分別給予生理鹽水、中藥灌胃，10Ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥4周。

1.2.3取食管組織末次給藥24h后，斷髓處死大鼠，取下食管組織，縱行剖開(kāi)，作大體形態(tài)觀察，觀察完后將標(biāo)本放入40g/L甲醛固定后常規(guī)HE染色，采用ABC法，觀察結(jié)果。PCNA：陽(yáng)性著色定位于細(xì)胞核，細(xì)胞核被染成棕黃色或褐色，呈顆粒型或彌漫型。食管上皮組織均出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞PCNA免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)，免疫陽(yáng)性細(xì)胞主要位于基底細(xì)胞層的第1-2層和乳突區(qū)基底細(xì)胞。計(jì)算方法：每個(gè)高倍視野計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞，然后計(jì)算出單位面積的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，任選12個(gè)視野。

1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以±s表示，用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1大體標(biāo)本觀察從反流性食道炎造模后取材病理觀察，模型組主要表現(xiàn)為食管黏膜發(fā)紅、糜爛或潰瘍；治療組與模型組有明顯的病理學(xué)改變。證實(shí)反流性食管炎造模成功。

2.2免疫組化結(jié)果PCNA在造模組、中藥治療組的表達(dá)與正常組差異顯著，見(jiàn)表1。

3討論

反流性食管炎是因胃內(nèi)容物反流進(jìn)入食管而引起食管黏膜炎癥。食管粘膜在刺激物的作用下，增生細(xì)胞不斷分化、增值并隨著炎癥的加重，表達(dá)率也逐漸的增加。在細(xì)胞的異常增生或不典型增生和腸化生中，PCNA發(fā)揮著重要作用。因此，PCNA的陽(yáng)性表達(dá)在反流性食管炎中具有重要的作用，根據(jù)臨床表現(xiàn)反流性食管炎多屬于中醫(yī)學(xué)“反胃”、“嘈雜”、“泛酸”、“胃痛”等范疇。在病因病機(jī)方面，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為本病是由于各種因素造成氣機(jī)升降失常，胃氣上逆所致。老年反流性食管炎我們?cè)陂L(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中認(rèn)識(shí)到病機(jī)主要為脾虛肝郁，膽失于疏泄，脾胃升降失調(diào)，胃氣上逆所致；因此，我們根據(jù)健脾疏肝的治療原則組方，治宜健脾理氣，和胃降逆。六君疏肝湯中香附、砂仁理氣降逆和胃，陳皮、半夏健脾和胃、人參、白術(shù)、茯苓、甘草益氣健脾固本，干姜溫胃和中。全方共奏健脾益氣、溫中行氣之效，以改善食管運(yùn)動(dòng)功能障礙，故療效滿(mǎn)意?，F(xiàn)代藥理研究表明，人參主要成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性潰瘍有防治作用，半夏、茯苓具有顯著的抑制胃液分泌的作用，白術(shù)、甘草能調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、抗?jié)?、增加免疫功能。六君疏肝湯有助于降低PCNA的高表達(dá)，并有抗胃食管反流，減輕食管炎癥的療效。具有明顯減輕食管炎癥，降低PCNA的高表達(dá)，抑制細(xì)胞的異常增生或不典型增生和腸化的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]陳欣童，黃曉軍，陳威.中西醫(yī)聯(lián)合用藥治療反流性食管炎療效觀察[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2006，33（2）：112

(收稿日期：2009.03.10)