【摘要】目的：本文對(duì)血清a-L-巖藻糖苷酶活性測(cè)定試劑的應(yīng)用進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。方法：采用對(duì)血清AFU活性進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行方法學(xué)的評(píng)價(jià)試驗(yàn)。結(jié)果:該試劑精密度好，批內(nèi)CV<2.2％，批間CV<2.4％。三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、膽紅素≤500μmol/L、VitC≤10g/L時(shí)經(jīng)配對(duì)差異比較，均無(wú)顯著干擾(P<0．05)；抗凝劑中EDTA.K2、草酸鈉對(duì)檢測(cè)無(wú)明顯干擾，而肝素使AFU測(cè)定假性增高。與進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品比較，y=0.9813x-0.3746，r=0.9991，兩者相關(guān)性良好。結(jié)論：該試劑為液體試劑，采用速率法測(cè)定，使用方便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確，抗干擾能力強(qiáng)，適用于全自動(dòng)生化分析。

【關(guān)鍵詞】a-L-巖藻糖苷酶；速率法；性能評(píng)價(jià)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R446.61【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)12-0050-01

a-L-巖藻糖苷酶(a-L-Fucosidase，AFU)的分類(lèi)名為a-L-巖藻糖苷酶水解酶(EC3．2．1．51），催化巖藻糖苷鍵水解，參與含巖藻糖的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖脂的分解代謝。近年來(lái)隨著對(duì)AFU的深入研究發(fā)現(xiàn)，AFU對(duì)某些疾病的發(fā)生、發(fā)展均具有重要臨床意義。［1］

1原理

底物MPT-AFU在血清樣本中a-L-巖藻糖苷酶酶作用下，生成產(chǎn)物MPT，而產(chǎn)物CPNP的生成量與樣本中AFU的酶活性成正比，通過(guò)測(cè)定黃色產(chǎn)物MPT在340nm波長(zhǎng)的生成速率，即可計(jì)算出樣本中AFU的活性。

2材料與方法

2.1樣本我院臨床新鮮血清標(biāo)品。

2.2儀器和試劑AFU檢測(cè)試劑盒由浙江伊利康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)080501。進(jìn)口原裝AFU檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)，批號(hào)F0806A；儀器為日立CX5全自動(dòng)生化分析儀、抗壞血酸、膽紅素、人胎盤(pán)a-L-巖藻糖苷酶均購(gòu)自sigma公司，血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自上海血液中心。試劑上機(jī)參數(shù)均由浙江伊利康生物技術(shù)有限公司提供。

2.3測(cè)定方法HITACHI CX5自動(dòng)分析儀參數(shù)反應(yīng)類(lèi)型：Rate-A法；反應(yīng)溫度：37℃；波長(zhǎng)：(主)340/(次)405nm；樣本：25μl，試劑250μl，讀點(diǎn)時(shí)間6-12點(diǎn)。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1精密度評(píng)價(jià)按NCCLS評(píng)價(jià)方案，取低、中、高三個(gè)不同濃度的AFU樣本，濃度分別為25U/L、68U/L、235U/L，上、下午雙份測(cè)定，連續(xù)測(cè)定20d，再每天測(cè)1次，共測(cè)20d，結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2線性范圍評(píng)價(jià)按NCCLS的評(píng)價(jià)方案，選用購(gòu)自sigma公司人胎盤(pán)a-L-巖藻糖苷酶為300U/L和20U/L的高低值酶樣本2份，然后2份樣本等量混合產(chǎn)生中間值160U/L，中間值再與高低值等量混合，產(chǎn)生230U/L和90U／L的5個(gè)不同梯度值樣本，在儀器上以低值到高值和高值到低值分別測(cè)定，求得兩次平均值，以X作為理論值，Y作為測(cè)定值進(jìn)行回歸分析，其方程Y=0.9945X+0.0453，r=0.9994。表明AFU活性在300U/L范圍內(nèi)，線性良好。

3.3比對(duì)實(shí)驗(yàn)取AFU濃度從10～200U/L的不同病人血清標(biāo)本50份，用本試劑與進(jìn)口試劑同時(shí)測(cè)定AFU活性，數(shù)據(jù)均按NCCLS文件統(tǒng)計(jì)，經(jīng)t檢驗(yàn)得P>0.05，y=0.9813X-0.3746;r=0.9991，表明本試劑與進(jìn)口試劑高度相關(guān)。

3.4回收實(shí)驗(yàn)向250μl血清中加入50μl的生理鹽水作為基礎(chǔ)樣本，測(cè)得AFU濃度為20U/L，向同體積的血清標(biāo)本中分別加入50μl濃度為25U/L和80U/L的AFU酶標(biāo)準(zhǔn)品，使其終濃度分別為24.2U/L和33.3U/L的樣本，每一濃度作平行管，測(cè)得其回收率為98.5％～102.4%。

3.5干擾試驗(yàn)在高、低兩個(gè)濃度的混合血清樣本中分別加入不同濃度的膽紅素、血紅蛋白、抗壞血酸（VitC），然合對(duì)AFU進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、膽紅素≤500μmol/L、VitC≤10g/L時(shí)經(jīng)配對(duì)差異比較，均無(wú)顯著干擾(P<0.05)。而常用抗凝劑中EDTA.K2、草酸鈉對(duì)檢測(cè)無(wú)顯著干擾，但肝素明顯干擾AFU的檢測(cè)，使AFU結(jié)果出現(xiàn)假性偏高，其干擾機(jī)理尚不清楚。

4討論

采用CNP-AFU底物法檢測(cè)AFU活性是目前較為理想的方法，也是目前最先進(jìn)的方法。該方法是在酸性條件下，樣本中的AFU將含呈色基團(tuán)的底物CNP-AFU的1，4位糖苷鍵水解，使反應(yīng)在405nm處產(chǎn)生最大吸光度，通過(guò)測(cè)定吸光度的變化，即可計(jì)算出樣本中AFU的活性。本文對(duì)浙江伊利康生物技術(shù)有限公司的該類(lèi)方法的AFU檢測(cè)試劑盒進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，其結(jié)果顯示批內(nèi)CV<2.2％，批間CV<2.4％。三酰甘油≤5.0mmol/L、Hb≤2.5g/L、膽紅素≤500μmol/L、VitC≤10g/L時(shí)對(duì)結(jié)果無(wú)顯著性干擾(P<0.05)；經(jīng)與進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品比對(duì)其結(jié)果高度相關(guān)，該試劑盒為液體試劑，使用方便、反應(yīng)快速、結(jié)果準(zhǔn)確，抗干擾能力強(qiáng)，適用于全自動(dòng)生化分析。完全能滿足臨床檢測(cè)要求。

參考文獻(xiàn)

[1]楊昌國(guó)．線性評(píng)價(jià)和干擾實(shí)驗(yàn)中NCCLS評(píng)價(jià)方案的應(yīng)用[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，1999；17(3)：184

(收稿日期：2009.03.10)