【摘要】目的：探討腫瘤浸潤樹突狀細(xì)胞( tumor infiltrating dendritic cells， TIDC)在胃癌組織中的分布及COX-2表達(dá)與預(yù)后相關(guān)因素的意義。方法：將S-100蛋白抗體作為TIDC的特異性標(biāo)記物，對60例胃腺癌標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，對TIDC進(jìn)行定量計數(shù)分析，同時COX-2表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果:60例腫瘤患者中樹突狀細(xì)胞平均值為(10.16±7.84)/mm²。樹突狀細(xì)胞浸潤密度與年齡、腫瘤分化程度無關(guān)，與腫瘤浸潤深度無明顯相關(guān)。樹突狀細(xì)胞浸潤密度隨臨床分期的增加而明顯減少(P<0.05)，進(jìn)展期胃癌較早期胃癌明顯減少(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組(P<0.05)，COX-2表達(dá)陽性的胃癌組樹突狀細(xì)胞浸潤密度低于COX-2表達(dá)陰性的胃癌組(P<0.05)。COX-2表達(dá)與年齡、腫瘤分化程度無關(guān)，與腫瘤浸潤深度無明顯相關(guān)。COX-2表達(dá)在早期胃癌組明顯低于進(jìn)展期胃癌組(P<0.05)，COX-2表達(dá)隨臨床分期的增加而明顯增加(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組(P<0.05)。結(jié)論：腫瘤樹突狀細(xì)胞的浸潤密度與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、COX-2表達(dá)有明顯相關(guān)性，檢測胃癌組織內(nèi)TIDC浸潤程度及COX-2表達(dá)對判斷胃癌預(yù)后有一定意義。

【關(guān)鍵詞】胃腺癌;腫瘤浸潤樹突狀細(xì)胞(TIDC);S-100蛋白

【中圖分類號】R735.2【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)12-0028-01

目前研究表明樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC) 作為一類重要的抗原呈遞細(xì)胞， 在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮其獨(dú)特的作用。[1]近來有關(guān)DC 的研究越來越多， 尤其在DC 與各種腫瘤的臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系和以DC為基礎(chǔ)的免疫治療方面已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，并且已取得一些初步成果。環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase2，COX-2)是前列腺合成的限速酶，與消化道腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切[1，2]。我們采用S-100蛋白免疫組化檢測胃癌患者腫瘤組織中TIDC浸潤情況及檢測胃腺癌環(huán)氧化酶2(COX-2)的表達(dá)，探討TIDC數(shù)量COX-2的表達(dá)與胃癌相關(guān)預(yù)后因素的關(guān)系。

1資料與方法

1.1材料收集2005年～2008年在我院外科行根治性胃大部或全胃切除術(shù)治療的胃癌患者60例。術(shù)前均未接受放化療、免疫治療，影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)其他臟器轉(zhuǎn)移，根治手術(shù)標(biāo)本殘端及切緣未見有殘留癌，病理診斷均為胃腺癌，60例中年齡在30歲～82歲，其中早期胃癌15例，進(jìn)展期胃癌45例。男38例，女22例。腫瘤分期和分級依據(jù)ICC1997年標(biāo)準(zhǔn)。組織切片選擇標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的兩位病理科醫(yī)師復(fù)核確認(rèn)。S-100蛋白多抗、COX-2單克隆抗體試劑盒購自邁新生物技術(shù)有限公司。

1．2S-100和COX-2免疫組化染色方法及陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)采用二步法。胃癌石蠟標(biāo)本制成4μm厚的切片，二甲苯脫蠟，酒精梯度水化。切片置于10mM的檸檬酸緩沖液中(pH6.0)煮20分鐘，然后室溫冷卻20分鐘。切片用3%H2O2處理5分鐘。后續(xù)步驟按照福州邁新生物技術(shù)有限公司試劑盒說明書操作。

1．3陽性細(xì)胞核和細(xì)胞漿均為黃染低倍鏡下選取癌細(xì)胞密集區(qū)，更換高倍鏡400倍，計數(shù)10個高倍視野中TIDC總數(shù)，取均值。借助計算機(jī)輔助圖像分析系統(tǒng)測定，每個標(biāo)本在同一放大倍數(shù)下檢測(×400，Olympus)，鏡下隨機(jī)取3個視野。每個標(biāo)本內(nèi)樹突狀細(xì)胞按每平方毫米數(shù)目表示(DCs/mm²)。COX-2陽性表達(dá)為細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，光鏡下(X400)隨機(jī)選取10個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，取其均值，>10%判斷為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析統(tǒng)計方法：使用SPSS for windows 統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。對計量資料采用t檢驗(yàn)，對計數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1腫瘤樹突狀細(xì)胞浸潤密度與胃癌各臨床病理指標(biāo)關(guān)系60胃癌組織中，樹突狀細(xì)胞浸潤的密度范圍(0～22)/mm²，平均為(10.16±7.84/mm²)。5%的患者無樹突狀細(xì)胞浸潤。以60胃癌組織中樹突狀細(xì)胞浸潤密度的平均值10.16±7.84/mm²，腫瘤樹突狀細(xì)胞浸潤密度與年齡、腫瘤分化程度無關(guān)、與腫瘤浸潤深度無明顯相關(guān)，與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，早期胃癌組樹突狀細(xì)胞浸潤的密度明顯高于進(jìn)展期胃癌組，兩者有顯差異，P<0.05。

2．2COX-2表達(dá)與胃癌各臨床病理指標(biāo)關(guān)系見表1。

3討論

DC是一種抗原呈遞細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)，具有最強(qiáng)的抗原呈遞能力，也是唯一能夠激活初始型T細(xì)胞的APC，構(gòu)成機(jī)體免疫反應(yīng)的一個重要因素。研究表明DC的生物學(xué)功能為①抗原提呈，誘導(dǎo)機(jī)體的特異性免疫反應(yīng);②參與T、B細(xì)胞發(fā)育、分化和激活;③免疫調(diào)節(jié)作用;④免疫監(jiān)視功能。[3]樹突狀細(xì)胞作為最重要的抗原遞呈細(xì)胞，在抗腫瘤免疫中起重要作用。腫瘤內(nèi)及其周圍樹突狀細(xì)胞浸潤數(shù)量和功能與腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)。[4]1998年Sumiya等研究了TIDC和HLA 2DR抗原(腫瘤細(xì)胞膜表面的一種抗原，與宿主抗腫瘤免疫反應(yīng)有關(guān))表達(dá)在胃癌中的預(yù)后價值后得出TIDC可作為胃癌術(shù)后患者的一個預(yù)后指標(biāo)。[5]但隨后他在研究TIDC和TNK與胃癌的臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系時，經(jīng)多變量分析TlDC和TNK都不能作為胃癌獨(dú)立的預(yù)后因素[6]。在胃癌組內(nèi)DC浸潤的密度高低是否作為胃癌的獨(dú)立預(yù)后因素尚未定能。

本組研究60胃癌組織中，樹突狀細(xì)胞浸潤的密度范圍(0～22)/mm²，平均為(10.16±7.84/mm²)。樹突狀細(xì)胞浸潤密度與年齡、腫瘤分化程度、浸潤深度無關(guān)。與腫瘤TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、COX-2表達(dá)有相關(guān)性。進(jìn)展期胃癌較早期胃癌明顯減少(P<0.05)。胃癌浸潤深度之間樹突狀細(xì)胞浸潤密度差異雖無顯著性(P>0.05)，但仍可看到胃癌浸潤深度增加時，樹突狀細(xì)胞浸潤密度也相應(yīng)減少。Shunichi[7]等腫瘤在胃壁內(nèi)的浸潤深度與腫瘤組織內(nèi)DC的浸潤程度無明顯相關(guān)，當(dāng)腫瘤浸潤至漿膜層，DC顯著浸潤組5年生存率顯著高于DC輕微浸潤組，但當(dāng)腫瘤浸潤至肌層及漿膜下層、漿膜和漿膜外時，兩組間5年生存率差異無顯著性。

環(huán)氧化酶是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素(PGs)的關(guān)鍵酶，包括COX21和COX-2兩種異構(gòu)酶。COX-1存在于大多數(shù)細(xì)胞和組織中，產(chǎn)生具有重要生理作用的PGs，對胃腸道中的細(xì)胞起保護(hù)作用，而COX-2在大多數(shù)組織中不表達(dá)或低表達(dá)，只有受到感染、腫瘤形成等才大量產(chǎn)生。目前已證實(shí)肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及直腸癌等多種腫瘤組織的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均存在COX-2的高表達(dá)[8]。COX-2在本組成胃癌中的表達(dá)率為63.33%(38/60)，COX-2的表達(dá)與胃癌患者的年齡、腫瘤的大小、浸潤深度和腫瘤的分化無關(guān)，P>0.05。而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。COX-2陽性組，組織中樹突狀細(xì)胞浸潤密度明顯低于COX-2陰性組，兩者有顯著性差異，P<0.05，COX-2表達(dá)在早期胃癌組明顯低于進(jìn)展期胃癌組(P<0.05)。COX-2在正常胃粘膜一般不表達(dá)，在炎癥及腸上皮化生表達(dá)增高，在腫瘤時高表達(dá)。本組進(jìn)展期胃癌組比早期胃癌組明顯增高，臨床分期Ⅱ-Ⅲ期比Ⅰ期明顯增高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比淋巴結(jié)陰性組明顯增高。說明COX-2高表達(dá)與胃癌的發(fā)展及預(yù)后不良有一定關(guān)系。在COX-2陽性組組織中樹突狀細(xì)胞浸潤密度明顯低于COX-2陰性組，兩者有顯著性差異。說明COX-2的高表達(dá)與癌組織中樹突狀細(xì)胞低浸潤相關(guān)，兩者其協(xié)同作用影響胃癌患者預(yù)后。COX-2促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用主要是催化產(chǎn)生的PGE2，PGE2是一種免疫調(diào)節(jié)抑制因子，它可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞黏附，抑制具有免疫調(diào)節(jié)功能的淋巴因子的產(chǎn)生，抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞增殖，降低機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的局部免疫。

目前研究表明惡性腫瘤樹突狀細(xì)胞浸潤數(shù)量越多，則預(yù)后越好[9]，具低新生血管形成和高局部免疫活性的腫瘤可以通過凋亡引起細(xì)胞丟失調(diào)整預(yù)后[10]。樹突狀細(xì)胞可以通過多種作用方式控制腫瘤。樹突狀細(xì)胞主要通過遞呈抗原介導(dǎo)特異性T、B淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，樹突狀細(xì)胞本身可以直接抑制腫瘤增殖，誘導(dǎo)腫瘤凋亡。本研究表在COX-2高表達(dá)時對機(jī)體的免疫產(chǎn)生抑制作用，使腫瘤內(nèi)樹突狀細(xì)胞減少，兩者相互作用可能影響胃癌患者的預(yù)后。檢測胃癌組織內(nèi)TIDC浸潤程度及COX-2表達(dá)對判斷胃癌預(yù)后有一定意義。

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(收稿日期：2009.03.10)