[摘要] 目的 檢測 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌、癌旁黏膜、正常膀胱黏膜組織中的表達(dá)，探討HER2表達(dá)與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級、臨床分期間的關(guān)系，評價(jià)它是否可以作為判斷膀胱尿路上皮細(xì)胞癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。方法 收集臨床病理資料完整的膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織各50例，正常膀胱組織20例，應(yīng)用免疫組化法(SP法)檢測HER2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的表達(dá)高于癌旁黏膜和正常膀胱黏膜中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HER2蛋白的表達(dá)和病理分級、腫瘤大小有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HER2蛋白表達(dá)和腫瘤的病理分級、腫瘤大小等有相關(guān)性，表明HER2蛋白過表達(dá)可能與膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 膀胱尿路上皮細(xì)胞癌;HER2基因;相關(guān)性

文章編號:1003-1383(2009)04-0386-03

中圖分類號:R 737.14

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.003

膀胱尿路上皮細(xì)胞癌(uroepithelium cell carcinoma of bladder，UCCB)是我國泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，年發(fā)病率約為6/10萬。該腫瘤的特點(diǎn)為:易復(fù)發(fā)，難以早期診斷和估計(jì)預(yù)后[1~2]。尋找有價(jià)值的用于癌的早期診斷和判斷預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物成為當(dāng)前人們研究的熱點(diǎn)之一。HER2基因(亦作cerB2或Her2/neu)是人表皮生長因子受體(Human Epidermal Growth Factor receptor，HEGFR)家族的第二號成員，體外細(xì)胞培養(yǎng)研究顯示HER2過度表達(dá)能促進(jìn)腫瘤發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化[3]，有研究表明，膀胱癌是除乳腺癌、大腸癌外，第三個(gè)有較高HER2表達(dá)的惡性腫瘤[4]。為探討HER2表達(dá)與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級、臨床分期間的關(guān)系，我們檢測膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織HER2蛋白的表達(dá)，并與正常膀胱組織比較，報(bào)道如下。

資料和方法

1.臨床資料 收集2006年9月～2008年9月住院并接受開放手術(shù)治療(所有病例術(shù)前均未經(jīng)任何抗癌藥物治療或放療)的50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌病人的癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織(距離癌組織2 cm)，選取20例正常膀胱黏膜組織作為對照組。50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者中男性42例，女性8例，年齡8～79歲，≤60歲患者18例，>60歲的患者32例;按WHO標(biāo)準(zhǔn)分級:G1 18例，G2 22例，G3 10例;按UICC標(biāo)準(zhǔn)分期:Ta~T1 32例，T2~T4 18

例。按腫瘤大小分:≤2 cm腫瘤17例，>2 cm腫瘤33例。

按單發(fā)和多發(fā)腫瘤分:單發(fā)腫瘤28例，多發(fā)性腫瘤22例，均為原發(fā)性膀胱尿路上皮癌。

2.試驗(yàn)方法

(1)蘇木素伊紅(HE)染色 全部的標(biāo)本均經(jīng)4%的中性甲醛液固定，梯度脫水，浸蠟，包埋，4 μm連續(xù)切片，烤干，脫蠟，HE染色，透明和封片。用于腫瘤分級分期。

(2)免疫組化SP法檢測及結(jié)果判斷 根據(jù)SP法說明書操作。每一批免疫組化染色均設(shè)有已知陽性和用PBS代替一抗的空白對照。由2位富有經(jīng)驗(yàn)的具有副高級以上職稱的病理醫(yī)師采用雙盲法，隨機(jī)觀察切片至少5個(gè)具有代表性高倍視野，不少于1000個(gè)細(xì)胞，對免疫組化結(jié)果進(jìn)行評估。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)(按每張切片計(jì))[5~6]:0:完全沒有著色或少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色;1+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱不完整的細(xì)胞膜著色:2+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色;3+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的完整的細(xì)胞膜著色，其中2+和3+視為陽性。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)采用Spss11.0軟件和手工計(jì)算完成;樣本率比較采用R×C列表的χ2檢驗(yàn)、連續(xù)校正的χ2檢驗(yàn)及四格表的確切概率法;相關(guān)性分析采用Spearman分析;多個(gè)樣本均數(shù)間兩兩比較用方差齊性檢驗(yàn)(HonogeneityofVariance)，當(dāng)總體方差齊時(shí)選擇NewmanKeuls法分析，當(dāng)總體方差不齊時(shí)，選用Tamhane法分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.免疫組化SP法檢測HER2蛋白表達(dá)情況 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織、癌旁組織、正常膀胱黏膜組織中的表達(dá)率分別為32.0%，12.0%，和5.0%。陽性染色主要位于胞膜，為棕黃色，顯色過強(qiáng)時(shí)呈棕褐色(見圖1～2)。應(yīng)用R×C表χ2檢驗(yàn)，三組間HER2蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，應(yīng)用Fisher確切概率法，癌旁組和正常組間HER2蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。在此基礎(chǔ)上將上述兩組合并，再與膀胱癌組比較，進(jìn)行R×C表分割計(jì)算，HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)高于在非癌組織中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)(SP×200)

圖2 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)(SP×400)

表1 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌，癌旁黏膜和正常膀胱黏膜的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

癌組14201335032

癌旁組2519515012

正常組10910205

注:三組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=9.5634，P=0.0084<0.05;癌旁組與正常組間HER2蛋白陽性率比較:P2tail=0.6642>0.05;癌組和非癌組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=9.1116，P=0.0025<0.05。

2.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織分化程度相關(guān)性分析 按組織病理學(xué)分級分為G1:18例，HER2蛋白陽性2例;G2:22例，HER2蛋白陽性8例;G3:10例，HER2蛋白陽性6例。采用Spearman相關(guān)分析，HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織病理學(xué)分級呈正相關(guān)(r=0.3843，P<0.01)。見表2。

表2 HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織病理學(xué)分級相關(guān)性分析

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

G1610111811.11

G259712236.36

G331511060.00

注:Spearman Correlation Coefficients:r=0.3843，P<0.01。

3.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌TNM分期的關(guān)系 Ta~T1期(非浸潤型膀胱尿路上皮癌)32例，T2～T4期(浸潤型膀胱尿路上皮癌)18例。兩組間HER2蛋白陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同TNM分期中膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

Ta～T18121023237.50

T2～T468311822.22

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=1.2357，P=0.2663>0.05。

4.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌患者年齡組的關(guān)系 膀胱癌患者年齡≤60歲HER2蛋白陽性率為22.22%;>60歲陽性率為37.50%;應(yīng)用R×C表χ2檢驗(yàn)，得出兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同年齡的膀胱癌患者中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

≤60歲59311822.22

>60歲9111023237.50

注:兩年齡組HER2蛋白陽性率比較:χ2=0.849，P=0.357>0.05。

5.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌患者性別的關(guān)系 男性患者42例，HER2蛋白陽性率為30.95%;女性患者8例，HER2蛋白陽性率為37.50%;兩組間HER2蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

5 不同性別患者的膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

男13161034230.95

女1430837.50

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=0.132，P=0.716>0.05。

6.HER2蛋白表達(dá)與膀胱腫瘤大小的關(guān)系 按腫瘤大小分組:腫瘤直徑≤2.0 cm有17例，HER2蛋白陽性率為11.76%;腫瘤直徑>2.0 cm有33例，HER2蛋白陽性率為42.42%;兩組間HER2蛋白陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，腫瘤越大其陽性率越高。見表6。



表6 不同腫瘤直徑的膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

瘤直徑HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽性率(%)

≤2.0 cm87111711.76

>2.0 cm6131223342.42

注:兩組間HER2蛋白陽性率比較:χ2=4.8469，P=0.0277<0.05。

討論

HER2是一個(gè)在正常和腫瘤上皮細(xì)胞均有表達(dá)的跨膜生長因子受體，主要是在人體的胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá)，它參與多種組織器官的生長發(fā)育，而在成人正常組織中此基因常以單拷貝存在，表達(dá)水平較低，與正常細(xì)胞的增殖，分化相關(guān)，并且調(diào)控腫瘤發(fā)生、生長和侵襲。活化形式主要以過表達(dá)和基因擴(kuò)增為主，突變則少見。在人類多種腫瘤中特別是乳腺癌中可檢測到該基因的擴(kuò)增和過度表達(dá)，研究表明，大約25%～30%的浸潤性乳腺癌和80%的乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者有HER2基因擴(kuò)增和蛋白過表達(dá)，而這些患者可能預(yù)后不佳、激素治療和常規(guī)化療效果差[7~8]。膀胱癌是繼乳腺癌、大腸癌之后第三個(gè)有較高HER2蛋白表達(dá)的腫瘤，近年來，許多學(xué)者研究報(bào)告指出，膀胱癌HER2蛋白表達(dá)陽性率的平均值約為29.8%，中位值約為31.5%，最高值約為37%[9~12]。

本研究免疫組化結(jié)果表明，HER2蛋白陽性染色主要定位于胞膜，少數(shù)位于胞漿內(nèi)，為棕黃色，顯色過強(qiáng)時(shí)呈棕褐色，大多數(shù)為片狀分布，少數(shù)為局灶性、彌漫性分布，在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率為32.00%，而在正常膀胱黏膜與癌旁黏膜組織中的陽性率分別為5%和12.00%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)高于在非癌組織中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明HER2蛋白在膀胱癌中呈較高表達(dá)，也證明了其表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)HER2的表達(dá)與腫瘤的大小、病理分級有關(guān)，直徑>2 cm的腫瘤HER2表達(dá)率為42.42%，直徑≤2 cm的腫瘤HER2表達(dá)率為11.76%(P<0.05)，隨著腫瘤的增大，HER2表達(dá)有逐漸增高的趨勢，腫瘤的大小與生長分?jǐn)?shù)、腫瘤細(xì)胞的生成與丟失的比例及發(fā)病后就診的早晚等諸多因素有關(guān)。HER2過表達(dá)能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，研究發(fā)現(xiàn)其過表達(dá)亦有抑制凋亡的作用[13]，故HER2的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)，隨著病理分級增高，HER2表達(dá)率也隨之增高(P<0.01)， 說明HER2高表達(dá)狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞的分化有關(guān)，與其它臨床和病理參數(shù)無關(guān)，腫瘤細(xì)胞分化越低，其陽性表達(dá)率越高。

HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系目前存在不同看法。Coombs研究86例膀胱癌HER2原癌基因的擴(kuò)增和過表達(dá)，認(rèn)為HER2基因的擴(kuò)增及過表達(dá)為膀胱癌提供了有用的分子標(biāo)志，但作為潛在預(yù)后指標(biāo)尚需進(jìn)一步觀察[9~10]。Wright等[13]對乳腺癌研究表明HER2蛋白產(chǎn)物的陽性表達(dá)可作為人乳腺癌惡性程度和預(yù)后的一項(xiàng)獨(dú)立估價(jià)指標(biāo)，但也有一些學(xué)者研究報(bào)告，HER2表達(dá)與乳腺癌惡性程度及預(yù)后的關(guān)系仍不明確。目前，膀胱癌病人的預(yù)后估計(jì)仍主要依靠腫瘤的病理分級和臨床分期，HER2蛋白產(chǎn)物的表達(dá)是否可作為膀胱癌惡性程度及預(yù)后的一項(xiàng)估價(jià)指標(biāo)，還需大量病例的隨機(jī)研究和觀察。本試驗(yàn)中對研究的臨床病例亦做相關(guān)跟蹤調(diào)查，記錄患者術(shù)后治療及腫瘤復(fù)發(fā)情況，但隨訪時(shí)間較短，尚無法對HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系做正確的判斷分析，需要進(jìn)一步積累隨訪資料加以總結(jié)。

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(收稿日期:2009-07-23 修回日期:2009-08-13)

(編輯:潘明志 英文審校:唐雄林)