[摘要] 目的 探討膽脂瘤型中耳炎的病原菌分布及耐藥性。

方法 用TSB0.25%Glu、TSB2%Alc、TSB4%NaCl最佳培養(yǎng)基濃度，96孔板半定量生物膜，KB瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抗菌藥敏試驗。結(jié)果 產(chǎn)銅綠假單孢菌生物膜陽性株為第一位，其次為金葡菌，血漿凝固酶陰性的葡萄球菌也有一定比例;產(chǎn)生物膜的葡萄球菌對頭孢他啶較為敏感，假單孢/變形桿菌對喹諾酮類、三代頭孢和泰能敏感。結(jié)論 對細(xì)菌生物膜檢測和耐藥性分析，可避免臨床抗菌藥物的濫用。

[關(guān)鍵詞] 膽脂瘤;中耳炎;細(xì)菌;耐藥

文章編號:1003-1383(2009)04-0435-02

中圖分類號:R 764.210.446.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.031

膽脂瘤型中耳炎是慢性中耳炎的一種常見類型，它對人體的破壞性較強(qiáng)，如中耳內(nèi)結(jié)構(gòu)受損、顱骨破裂、嚴(yán)重的聽力下降等，甚至造成顱內(nèi)并發(fā)癥。因此，正確的診斷和臨床用藥顯得尤為重要[1]。以往人們忽視該病群細(xì)菌生物膜(BF)形成后具有抗生素抗性及對抗機(jī)體免疫防御，故臨床常用抗生素對BF細(xì)菌引起的感染療效欠佳。本研究從膽脂瘤型中耳炎細(xì)菌生物膜檢測入手，進(jìn)一步研究其耐藥機(jī)制，指導(dǎo)臨床用藥。

對象和方法

1.病例選擇 標(biāo)本來源于我院100例因慢性化膿性中耳炎住院病人，其中男性55例，女性45例，年齡15～70歲;左耳42例，右耳44例，雙耳14例，病史10個月～45年。

2.方法 ①收集菌株:所有病例均停用口服及外用抗生素3天以上。用75%酒精消毒外耳道口，無菌操作原則，用滅菌試管內(nèi)的無菌棉簽將患者中耳分泌物取出送檢。②細(xì)菌培養(yǎng)鑒定:中耳腔分泌物標(biāo)本分別接種于血瓊脂、苯唑、巧克力色血平板、麥康凱、沙氏培養(yǎng)基;巧克力色血平板培養(yǎng)基放入二氧化碳培養(yǎng)箱1～3天，其余放在普通培養(yǎng)箱24小時(如果兩種培養(yǎng)方法無細(xì)菌生長，則采用真菌培養(yǎng));挑取培養(yǎng)基中生長的單個菌落，涂片革蘭染色鏡檢，用全自動細(xì)菌鑒定分析儀對革蘭染色陰性或陽性細(xì)菌進(jìn)行最終的菌種鑒定[2]。③生物膜半定量:用血平板分離單個菌落接種于剛果紅培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24小時后，再在室溫放置24小時，金葡菌置72小時。單個菌落接種于5 mlTSB、調(diào)成0.5麥?zhǔn)蠞舛龋肨SB0.25%Glu、TSB2%Alc、TSB4%NaCl最佳培養(yǎng)濃度在96孔板半定量生物膜[2]。用酶標(biāo)儀490 nm比色，讀取數(shù)值。④藥敏試驗:采用KirbyBauer瓊脂擴(kuò)散法，按美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員NCCLS2000年版判斷標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控要求進(jìn)行操作和判讀結(jié)果。3.統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。

結(jié)果

1.病原菌構(gòu)成 100例標(biāo)本中有72例病原菌培養(yǎng)陽性，其陽性率為72.0%;共分離培養(yǎng)出需氧菌和真菌110株，G+菌68株占61.8%，金黃色葡萄球菌占其中的60.3%，表皮葡萄球菌占其中的20.1%;G-菌40株占36.4%，銅綠假單孢菌占其中的70.0%;真菌2株占1.8%。厭氧菌培養(yǎng)未發(fā)現(xiàn)厭氧菌菌株。

2.生物膜半定量檢測結(jié)果 銅綠假單孢菌平均OD為0.4;金黃色葡萄球菌平均OD為0.2;表皮葡萄球菌平均OD為0.15。由此可見銅綠假單孢菌生物膜產(chǎn)生陽性株為第一位，其次為金葡菌，血漿凝固酶陰性的葡萄球菌也有一定比例。

3.藥敏結(jié)果 ①產(chǎn)生物膜的假單孢/變形桿菌比無生物膜的該菌耐藥性高，對先鋒霉素Ⅴ的耐藥率大于70.0%，對阿米卡星、哌拉西林、慶大霉素的耐藥率大于50.0%，和無生物膜的該菌耐藥率相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，沒有發(fā)現(xiàn)耐泰能的假單孢/變形桿菌(見表1)。②產(chǎn)生物膜的葡萄球菌呈多重耐藥，對青霉素、紅霉素和復(fù)方新諾明耐藥率高達(dá)80.0%以上，和無生物膜的該菌耐藥率相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);有生物膜葡萄球菌對苯唑西林、環(huán)丙殺星、克林霉素、慶大霉素的耐藥率分別為58.0%、60.5%、58.2%、46.5%，且高于無生物膜葡萄球菌，對頭孢他啶較為敏感;無生物膜的葡萄球菌對青霉素類、喹諾酮類抗生素和β內(nèi)酰胺類的耐藥率也在40.0%以上，沒有發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的葡萄球菌(見表2)。表1 有無生物膜假單孢/變形桿菌的耐藥率差異(%)

抗菌藥物假單孢菌有生物膜菌無生物膜菌

變形桿菌有生物膜菌無生物膜菌

頭孢他啶11.310.2 12.310.1

慶大霉素57.3 38.5※ 51.3 37.5※

哌拉西林58.3 39.3※ 50.2 32.1※

阿米卡星59.3 42.1※ 55.2 41.4※

環(huán)丙沙星13.711.2 16.215.3

先鋒霉素Ⅴ73.266.7 89.276.5

泰 能00 00

注:與有生物膜同菌種比較，※P<0.05

表2 有無生物膜葡萄球菌的耐藥率差異(%)

抗菌藥物有生物膜的葡萄球菌無生物膜的葡萄球菌

苯唑西林58.046.0

青霉素86.4 42.5※

復(fù)方新諾明80.4 32.8※

紅霉素82.4 40.3※

克林霉素58.252.4

萬古霉素0.00.0

環(huán)丙沙星60.553.1

慶大霉素46.545.6

頭孢他啶28.527.5

四環(huán)素59.453.5

注:與有生物膜的菌種比較，※P<0.05

討論

目前膽脂瘤型中耳炎治療以手術(shù)為主，但術(shù)后聯(lián)合應(yīng)用抗生素治療是必不可少的。本研究發(fā)現(xiàn)該病群的病原菌種類較多，以銅綠假單孢菌所占的比例為最多，其次為金黃色葡萄球菌。有文獻(xiàn)報道奇異變形桿菌在膽脂瘤型中耳炎中也有相當(dāng)?shù)谋壤3]。而本文發(fā)現(xiàn)血漿凝固酶陰性的葡萄球菌所占的比例較多，究其原因是葡萄球菌的莢膜如同生物膜成分是脂多糖，形成一道天然屏障，有抗吞噬作用，同時阻礙了抗生素滲透入菌體發(fā)揮殺菌作用[4]。

膽脂瘤型中耳炎如分泌物培養(yǎng)出葡萄球菌屬，像喹諾酮類抗生素如環(huán)丙殺星，β內(nèi)酰胺類抗生素如苯唑西林、克林霉素，還有青霉素類等其他抗菌藥物已高度耐藥，不宜作為臨床經(jīng)驗用藥。如分泌物培養(yǎng)出假單孢/變形桿菌屬，臨床首選喹諾酮類、三代頭孢和泰能類藥物。所以臨床應(yīng)用單一抗生素效果不佳，應(yīng)聯(lián)合使用幾種抗生素才能起到最佳抑菌效果。最重要的是在臨床治療和細(xì)菌學(xué)檢驗中，應(yīng)先將菌屬嚴(yán)格區(qū)分為有無生物膜，有利于對細(xì)菌耐藥性的正確分析和抗菌藥物的選擇，避免抗菌藥物的濫用[5]。

目前，生物膜引發(fā)的細(xì)菌耐藥越來越得到臨床醫(yī)生的廣泛重視，如何規(guī)范生物膜細(xì)菌的鑒定程序是當(dāng)務(wù)之急。另外臨床醫(yī)生合理使用抗生素是杜絕有生物膜細(xì)菌耐藥的重要環(huán)節(jié)。希望本文的研究能給廣大醫(yī)務(wù)工作者一些借鑒。

參考文獻(xiàn)

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(收稿日期:2009-07-03 修回日期:2009-08-19)

(編輯:潘明志)