龔占峰　陳進(jìn)文　章文穎　王　輝　劉焱文

摘 要：目的：建立中藥復(fù)方防曬添加劑的定性定量分析方法。方法：采用薄層色譜法對(duì)槐花、陳皮、五倍子進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定蘆丁的含量。結(jié)果：槐花、陳皮、五倍子的特征斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性對(duì)照無(wú)干擾；對(duì)照品蘆丁在0.2048~2.048μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系（r=0.9995）；平均回收率為96.98%，RSD=1.42%。結(jié)論：該質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)便可行，薄層色譜鑒別專屬性強(qiáng)，含量測(cè)定的分離效果好，準(zhǔn)確性強(qiáng)，可用于防曬添加劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：防曬添加劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；蘆丁；質(zhì)量分析

中圖分類號(hào)：R914.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0055-03

中藥復(fù)方防曬添加劑的處方由槐花、陳皮、桔核、五倍子、女貞子、甘草六味藥組成。采用溶劑法和大孔吸附樹(shù)脂純化技術(shù)對(duì)復(fù)方進(jìn)行提

取純化［1］，所得提取物可作為化妝品的添加劑，具有防曬的功效。為控制本品質(zhì)量，我們對(duì)其主要成分進(jìn)行了薄層定性鑒別，并采用HPLC法測(cè)定了本品主要成分蘆丁的含量［2］，建立了中藥復(fù)方防曬添加劑的質(zhì)量分析方法［3］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀， BP211D電子天平（Sartorius公司），十萬(wàn)分之一分析天平（Sartorius BP-211D），萬(wàn)分之一分析天平（Metter Toledo AL204）超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

防曬添加劑、蘆丁對(duì)照品及陰性對(duì)照品均為本實(shí)驗(yàn)室自制；橙皮苷對(duì)照品（批號(hào)731－8601），槲皮素對(duì)照品（批號(hào)081－9003）均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。硅膠G、F254由青島海洋化工廠提供，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 槐花的TLC鑒別

取本品1mL，加60%乙醇定容至10mL，作為供試品溶液；取槲皮素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含0.24mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；取槐花對(duì)照藥材粉末0.2g，加甲醇5mL，密塞，振搖10min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；按同法制備該處方缺槐花陰性對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、槲皮素對(duì)照品溶液、槐花對(duì)照藥材溶液、槐花陰性對(duì)照液各10、5、10、5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（5∶3∶1.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；槐花陰性對(duì)照色譜在與槲皮素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)干擾（見(jiàn)圖2）。

2.2 陳皮的TLC鑒別

取本品1mL，加60%乙醇稀釋至5mL，作為供試品溶液；取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液；取陳皮對(duì)照藥材粉末0.3g，加甲醇10mL，加熱回流20min，濾過(guò)，取濾液5mL，濃縮至1mL，作為對(duì)照藥材溶液；按同法制備該處方缺陳皮陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、橙皮苷對(duì)照品溶液、陳皮對(duì)照藥材溶液、陳皮陰性對(duì)照液各10μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；而陳皮陰性對(duì)照色譜無(wú)干擾（見(jiàn)圖2）。

2.3 五倍子的TCL鑒別

取本品1mL，加60%乙醇稀釋至10mL，作為供試品溶液；取沒(méi)食子酸對(duì)照品，加甲醇制成1mg/mL溶液，作為對(duì)照品溶液；取五倍子藥材粉末0.5g，加甲醇5mL，超聲處理15min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液；按同法制備得到缺五倍子陰性對(duì)照品溶液。吸取上述供試品溶液、沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液、五倍子對(duì)照藥材溶液、五倍子陰性對(duì)照液各10μL，分別點(diǎn)于同一塊硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸（5∶5∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；而五倍子陰性對(duì)照色譜無(wú)干擾（見(jiàn)圖3）。

3 含量測(cè)定

3.1 溶液的制備

3.1.1 對(duì)照品溶液的制備

取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含蘆丁0.1024mg的溶液，即得。

3.1.2 供試品溶液的制備

取本品1mL，置蒸發(fā)皿中揮干，殘?jiān)?0%乙醇溶液并定容至100mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.1.3 陰性樣品溶液的制備

按本品處方比例取缺槐花的其余藥材，按本品的制備工藝制成不含槐花的陰性樣品。按供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

3.2 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸溶液（40∶60）；流速：1mL?min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：257nm；柱溫：25℃；分析時(shí)間：25min，進(jìn)樣量10μL。

3.3 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液2，5，8，10，15，20μL，分別進(jìn)樣，測(cè)定，記錄色譜峰面積，以蘆丁質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得線性回歸方程為：y=1523.2x-84.759，r=0.9995（n=6）。結(jié)果表明，蘆丁進(jìn)樣量在0.2048~2.048μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，蘆丁峰面積的RSD為0.54%，表明精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μL，分別于制備后0、2、4、6、8h注入色譜儀，測(cè)定，結(jié)果蘆丁峰面積RSD為0.9%。表明供試品溶液在制備后8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取同一批樣品溶液，按供試品制備方法制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算蘆丁含量，其RSD為0.79%，表明本方法重復(fù)性良好。

3.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品5份，分別精密加入一定量的蘆丁對(duì)照品，按供試品的制備與測(cè)定方法，在上述色譜條件下，進(jìn)行含量測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果蘆丁平均加樣回收率為96.98%，RSD為1.42%，表明本方法回收率好。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.8 樣品含量測(cè)定

取本品3批，按供試品制備方法制成供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

4 討論

槐花、陳皮、五倍子為該中藥復(fù)方防曬添加劑的主藥，蘆丁、槲皮素、橙皮苷、沒(méi)食子酸等為其有效成分，本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法鑒別了其中的槲皮素、橙皮苷、沒(méi)食子酸，并建立了高效液相色譜法測(cè)定其中蘆丁含量的測(cè)定方法。

處方中槐花具有涼血止血，清肝瀉火的功能，文獻(xiàn)報(bào)道槐花主含黃酮及苷類，其中蘆丁為其主要化學(xué)成分，因此選擇蘆丁作為含量測(cè)定指標(biāo)能夠達(dá)到控制其質(zhì)量的目的。測(cè)定波長(zhǎng)及流動(dòng)相的選擇參考《中國(guó)藥典》2005年版一部“槐花”項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，檢測(cè)波長(zhǎng)為257nm，流動(dòng)相為甲醇-1%冰醋酸溶液（40∶60）。經(jīng)試驗(yàn)，蘆丁與其相鄰峰的分離效果良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在選定的色譜條件下，蘆丁的色譜峰無(wú)干擾，方法可靠性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 程莉，龔耀剛，安凱，王文興.大孔樹(shù)脂在三七葉皂苷脫色中的應(yīng)用研究［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，9(3):13-14.

［2］ 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

［3］ 王寶鯣.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1995.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）