李曉陽(yáng)　練生利　程玉霞　李德強(qiáng)　何德勇　鄭　琳

摘 要：目的：觀察燈盞花素治療新生兒缺氧缺血性腦病（HIE）的臨床療效并探討其治療的作用機(jī)制。方法：將60例患兒隨機(jī)分為燈盞花素治療組和對(duì)照組各30例，治療組靜脈輸注燈盞花素，兩組同時(shí)給予丹參、胞二磷膽堿靜脈輸注，共14d。觀察兩組臨床療效及起病第4、7、14天時(shí)血清C反應(yīng)蛋白（CRP）及可溶性黏附分子（sICAM-1）的變化，并與健康對(duì)照組比較。結(jié)果：患兒血清CRP水平較健康對(duì)照組明顯增高，治療組血清CRP水平在第7、14天較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，治療組血清sICAM-1濃度亦明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，治療中未見明顯不良反應(yīng)。結(jié)論：燈盞花素治療HIE時(shí)可通過降低CRP，阻斷白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附、抑制ICAM-1表達(dá)，從而減輕腦缺血組織的炎癥反應(yīng)，改善預(yù)后。

關(guān)鍵詞：小兒腦?。荒X缺氧；腦缺血；燈盞花素；C反應(yīng)蛋白；可溶性黏附分子

中圖分類號(hào)：R722.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）02-0024-02

圍產(chǎn)期缺氧窒息后引起的缺氧缺血性腦病嚴(yán)重威脅著新生兒的生命健康，是我國(guó)傷殘兒童重要病因之一。本研究應(yīng)用燈盞花素治療新生兒缺氧缺血性腦病，觀察治療前后血清CRP及sICAM-1水平，進(jìn)一步證實(shí)新生兒缺氧缺血性腦病病變基礎(chǔ)主要為C反應(yīng)蛋白（CRP）及血管內(nèi)皮細(xì)胞間黏附分子(ICAM)所介導(dǎo)的炎性反應(yīng)［1］，探討燈盞花素治療新生兒缺氧缺血性腦病的有效作用機(jī)制，驗(yàn)證其臨床療效，為燈盞花素治療新生兒缺氧缺血性腦病的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

HIE組為我科2007年5月—2008年10月間收治住院的60例患兒，其中男32例，女28例，胎齡為37～42周，出生體重為2 500～4 000g，均有窒息史。根據(jù)意識(shí)障礙、肌張力改變、原始反射異常、驚厥等臨床表現(xiàn)及CT檢查結(jié)果分為輕度28例，中度25例，重度7例。HIE診斷符合2004年長(zhǎng)沙會(huì)議制訂的《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)》。健康對(duì)照組為本院產(chǎn)科同期出生的足月正常新生兒30例，男16例，女14例；出生體重為2500～4000g。

1.2 治療方法

患兒均予胞二磷膽堿(江蘇吳中醫(yī)藥集團(tuán)有限公司第六制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字1119993174)，發(fā)病后即應(yīng)用(顱內(nèi)出血量大的除外)(100～125)mg/d，加入5％葡萄糖液50mL于2h內(nèi)靜脈滴注完畢，連用14d。復(fù)方丹參注射液（河北天成藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字Z3021388)在發(fā)病后12～48h內(nèi)使用。首次2mL／kg加入10％葡萄糖液10倍稀釋，使用輸液泵勻速靜脈滴注持續(xù)8～10h，以后按0.5mL/kg間隔8h使用，療程14d。兩組均一般對(duì)癥處理，顱高壓者給予甘露醇脫水等。治療組在此基礎(chǔ)上加燈盞花素注射液（昆明龍津制藥有限公司生產(chǎn)）4mg，連用14d。

1.3 血清CRP的檢測(cè)

HIE患兒于入院第4、7、14天時(shí)分別抽取靜脈血2mL置于含有0.2mL依地酸(EDTA)抗凝液管中，靜置30min后離心。分離血清并將其儲(chǔ)存于-70℃冰箱待用。采用Dade-Behring Pros Spec全自動(dòng)特定蛋白分析系統(tǒng)， 以放射免疫比濁法檢測(cè)CP系統(tǒng)。采用6點(diǎn)定標(biāo)方式建立標(biāo)準(zhǔn)曲線儲(chǔ)存于儀器中，最低檢測(cè)底線為 0.15mg/L。系統(tǒng)自行對(duì)標(biāo)本進(jìn)行1∶20稀釋后檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果>5mg/L，系統(tǒng)自動(dòng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行再稀釋后復(fù)查。所需檢測(cè)試劑采用Dade-Behring公司提供的Dade-Behnng試劑盒。

1.4 血清sICAM-1測(cè)定

采用雙抗體夾心ELISA法。試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物制品公司。血清標(biāo)本1∶100稀釋，鼠抗人sICAM-l單抗包被，HRP-OPD系統(tǒng)顯色。樣品設(shè)復(fù)孔，待測(cè)樣品盒標(biāo)準(zhǔn)樣品的變異系數(shù)低于15％，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較確定待測(cè)樣品的sICAM-1濃度。分別測(cè)定患兒第4、7、14d的sICAM-1濃度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清CRP水平（見表1）

燈盞花素治療組和對(duì)照組第4、7、1d4天血清CRP水平均高于健康對(duì)照組(P<0.01);治療組第7、14天血清CRP水平較對(duì)照組均出現(xiàn)明顯降低(P<0.05)。

2.2 血清sICAM-1水平（見表2）

治療組和對(duì)照組第4d血清sICAM-1濃度均升高，與健康對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)；但治療組血清sICAM-1濃度低于對(duì)照組(P<0.05)。第7天兩組血清sICAM-1濃度均開始下降，治療組下降較為顯著，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)。第14天兩組患兒血清sICAM-1濃度進(jìn)一步下降，治療組與健康對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性(P>0.05)；而對(duì)照組與健康對(duì)照組相比仍有顯著性差異(P<0.01)。

2.3 安全性

未見臨床應(yīng)用不良反應(yīng)。

3 討論

近年來(lái)一系列研究表明CRP是缺血性腦損傷炎癥的敏感指標(biāo)之一，是缺血性腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。CRP是一種非特異性急性時(shí)相蛋白，當(dāng)組織損傷、缺血缺氧發(fā)生時(shí)，其血清濃度在6～8h開始升高，24～48h達(dá)到峰值，可升高達(dá)平時(shí)的100～1 000倍［2］。本研究結(jié)果顯示，燈盞花素治療組血清CRP水平較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，且未見臨床應(yīng)用不良反應(yīng)，提示燈盞花素治療HIE可降低血清CRP水平，抑制急性腦缺血缺氧后的血管炎性反應(yīng)，有效改善腦缺血缺氧所致的神經(jīng)功能障礙。中藥注射用燈盞花素是從燈盞花中分離出的一類黃酮類成分，主要含燈盞乙素(4，5，6-三羥基黃酮-7葡萄糖醛酸苷)。燈盞乙素能抑制細(xì)胞缺血缺氧時(shí)所致蛋白激酶C(PKC)的過度激活或位移激活。PKC的過度激活或位移激活能引發(fā)細(xì)胞外興奮性氨基酸堆積，氧自由基生成增多，細(xì)胞內(nèi)鈣超載，ADP及5-羥色胺釋放，從而導(dǎo)致血栓形成、神經(jīng)細(xì)胞凋亡及炎性反應(yīng)［3，4］。燈盞花素可降低患者血清CRP水平，從而抑制HIE后的血管炎性反應(yīng)。

在HIE發(fā)病過程中，ICAM-1介導(dǎo)外周血白細(xì)胞向缺血區(qū)聚集、浸潤(rùn)，一方面機(jī)械性堵塞微循環(huán)通道，影響組織的血液供應(yīng)；另一方面進(jìn)入組織內(nèi)活化的白細(xì)胞可釋放大量的氧自由基和白三烯、細(xì)胞因子等血管活性物質(zhì)，損害局部血管，直接破壞腦細(xì)胞和引起神經(jīng)元的損害加重。ICAM-1屬于免疫球蛋白超家族成員，其主要通過與白細(xì)胞表面的LFA-1和Mac-1分子結(jié)合，介導(dǎo)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附及白細(xì)胞穿出血管壁而發(fā)揮生物學(xué)活性。ICAM-1從血管內(nèi)皮表面脫落后成為可溶性ICAM-1(sICAM-1)，故檢測(cè)sICAM-1的水平可以準(zhǔn)確反映ICAM-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)水平。因此，ICAM-1介導(dǎo)的腦組織一系列病理改變近年來(lái)被認(rèn)為是HIE的重要原因［5，6］。HIE患兒血清sICAM-1濃度明顯高于健康對(duì)照組，這一現(xiàn)象與缺血性腦損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增強(qiáng)，血管內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞黏附增強(qiáng)是一致的?；純浩鸩?4h內(nèi)血清sICAM-1濃度迅速升高，第4d最高，然后開始下降，第14d逐漸接近正常水平。sICAM-1變化過程的時(shí)間規(guī)律與腦缺血炎性反應(yīng)程度變化的時(shí)間規(guī)律基本一致。監(jiān)測(cè)血清中sICAM-1濃度能夠較準(zhǔn)確地反映缺血性腦損傷后炎性反應(yīng)介導(dǎo)的腦損傷程度和炎性反應(yīng)的過程。本研究中燈盞花素治療組患兒第4、7天血清sICAM-1濃度低于對(duì)照組(P<0.05)，可認(rèn)為燈盞花素對(duì)抗HIE患兒血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增強(qiáng)和白細(xì)胞黏附增強(qiáng)。隨著病程的發(fā)展sICAM-1濃度可逐漸降低，但燈盞花素可以縮短這一進(jìn)程，減少缺血后腦組織神經(jīng)元的損害程度。

總之，燈盞花素可降低患兒血清CRP及sICAM-1水平，抑制腦缺血組織的炎性反應(yīng)，改善預(yù)后，且燈盞花素治療安全有效。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 吳平．新生兒缺氧缺血性腦病的發(fā)病機(jī)理及治療進(jìn)展［J］．國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2003，9(2-3)：75.

［2］ Torres JL， Ridker PM．Clinical use of high-sensitivity C-reactive protein or the prediction of adverse cardiovascular events［J］．Curr Opin Cardiol， 2003， 18(6):471.

［3］ 彭海東，涂晉文，田俊．燈盞花素對(duì)大鼠腦缺血再灌注后腦含水量和腦組織鈣含量的影響［J］.湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，4(3)：22-24.

［4］ 帥杰.蛋白激酶C抑制劑對(duì)缺血再灌注海馬CA1區(qū)遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的作用研究［J］．腦與神經(jīng)疾病雜志，2004，12(6)：407-409.

［5］ 成登菊，秦桂秀，張小莉.新生兒缺氧缺血性腦病血清中可溶性細(xì)胞間黏附分子1及P選擇素含量的變化及其臨床意義［J］. 中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，5(9)：199-200.

［6］ 寧雙飛.可溶性細(xì)胞因子受體及可溶性黏附分子［J］．國(guó)外醫(yī)學(xué)免疫學(xué)分冊(cè)，2003，26：57-60.

（責(zé)任編輯：姜付平）