姜　穎　朱曉紅

【摘要】 目的 建立紫丁香苷含量的高效液相色譜法。方法 采用Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱，甲醇-水（1C∶C4）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm，流速0．8 ml/min。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)表明，紫丁香苷采用高效液相色譜法峰面積與含量有良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)論 此方法適于紫丁香苷的含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，方法學(xué)驗(yàn)證好，能夠有效的控制紫丁香苷的含量。

【關(guān)鍵詞】刺五加；紫丁香苷；HPLC

現(xiàn)代藥理研究表明^[1]，刺五加具有抗疲勞的作用，其主要化學(xué)成分為苷類(lèi)，而主要的具有生理活性的有效成分為紫丁香苷，因此選擇紫丁香苷作為控制刺五加類(lèi)藥品的指標(biāo)成分，參照有關(guān)文獻(xiàn)^[2-3]，建立高效液相色譜法測(cè)定刺五加注射液的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，此方法分離效果好，具有良好的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性。

1 儀器與試藥

儀器：島津LC-2010A型高效液相色譜儀；島津UV-2501型紫外分光光度計(jì)。

色譜柱：Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）。

試劑：甲醇為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

對(duì)照品：紫丁香苷對(duì)照品（11574-200201）為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

刺五加注射液：黑龍江完達(dá)山藥業(yè)股份有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2．1 色譜條件的選擇

2．1．1 色譜柱 前后試用了三根柱子：Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱、Kromasil C₁₈（5 μm，250 mm×4．6 mm）色譜柱。結(jié)果，均可達(dá)到較好的分離效果。

2．1．2 流動(dòng)相的選擇 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道^[4-7]，先后試用了兩種流動(dòng)相系統(tǒng)：甲醇-水系列和甲醇-水-冰醋酸系列。結(jié)果，甲醇-水-冰醋酸系列在應(yīng)用了不同的比例后，發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)峰多；而甲醇-水系列的雜質(zhì)峰相對(duì)較少，通過(guò)不同比例的選擇，確定1C∶C4的比例分離效果最好，保留時(shí)間適中。

2．1．3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 通過(guò)紫外掃描及DAD檢測(cè)，紫丁香苷在220 nm、265 nm處有最大吸收，由于220 nm處測(cè)定有干擾，故選擇265 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2．1．4 流速的選擇 試用了3個(gè)流速：0．8、1．0、1．2 ml/min，均可獲得滿(mǎn)意的分離效果。

綜上所述，在甲醇-水（1C∶C4）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm，流速0．8 ml/min，紫丁香苷與樣品中其他組分色譜峰可基線(xiàn)分離。

2．2 方法學(xué)驗(yàn)證

2．2．1 儀器精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，紫丁香苷峰面積值的RSD為0．08%，實(shí)驗(yàn)證明，精密度良好。

2．2．2 線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密量取對(duì)照品溶液0．5、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，配制成濃度分別為0．019 98、0．039 96、0．079 92、0．119 88、0．159 84、0．199 80 mg/ml的對(duì)照品溶液。精密量取上述6種溶液各10 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積。以峰面積值（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。

A=2 548 545．093C+48 549．6，r=0．999 8。

并以峰面積值（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）作圖，得一直線(xiàn)

以上結(jié)果表明，在0．199 8~1．998 0 μg范圍內(nèi)，紫丁香苷峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2．2．3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 按含量測(cè)定方法，取同一批號(hào)樣品，分別制備6份樣品供試液，測(cè)得峰面積值并計(jì)算含量，RSD為2．9%，實(shí)驗(yàn)證明，重復(fù)性良好。

2．2．4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 取9份已知含量的樣品，按本研究中樣品制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，以下列公式計(jì)算回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：回收率在95%~105%之間，加樣回收良好。

2．2．5 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 陰性實(shí)驗(yàn) 取陰性供試品溶液（溶劑）進(jìn)樣，結(jié)果表明，陰性供試品在紫丁香苷色譜峰位置處無(wú)相應(yīng)峰出現(xiàn)。

2．2．6 耐用性實(shí)驗(yàn)

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取樣品供試液，分別于0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣10 μl，測(cè)得樣品中紫丁香苷峰面積值的RSD為0．70%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用了高效液相色譜法對(duì)刺五加注射液中紫丁香苷含量進(jìn)行了研究，結(jié)果表明采用Agilent C₁₈（5 μm，150 mm×4．6 mm）色譜柱，甲醇-水（1C∶C4）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm，流速0．8 ml/min的色譜條件可以有效的測(cè)定紫丁香苷含量，該方法簡(jiǎn)便，藥液可以直接注入，無(wú)須任何處理，分離效果好，陰性對(duì)照無(wú)任何干擾，方法學(xué)驗(yàn)證表明該方法重現(xiàn)性好，線(xiàn)性好，精密性好。因此本實(shí)驗(yàn)建立的方法可以準(zhǔn)確，快速的對(duì)紫丁香苷進(jìn)行定量分析。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 曹克蘭．刺五加國(guó)外實(shí)驗(yàn)研究．中草藥，1980，11(6)：277.

［2］ 許正斌．刺五加各部位有效成分的含量測(cè)定．中草藥，1984，15(5)：32.

［3］ 楊水新．高效液相色譜法測(cè)定刺五加注射液中紫丁香苷的含量．藥物分析雜志，2001，21(1)：16.

［4］ 陳光耀．反相高效液相色譜法測(cè)定刺五加片中紫丁香苷的含量．中國(guó)中藥雜志，1999，24(8)：472.

［5］ 劉瑩．刺五加提取物中紫丁香苷、紫丁香樹(shù)脂苷的HPLC測(cè)定法．中草藥，2000，31(8)：587.

［6］ 張世偉．刺五加提取物中紫丁香苷的HPLC測(cè)定法．中草藥，1999，30(9)：660.

［7］ 封士蘭．高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定刺五加中刺五加苷B、苷E0的含量．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2001，18(2)：124.