王松林

【摘要】 目的 對時間分辨熒光免疫技術(shù)(TRFIA)定量檢測乙型肝炎病毒(HBV)五個血清學(xué)標志物進行臨床評價。方法 用TRFIA法和酶免法(EIA)對定值樣品和 355 份臨床標本同時測定，對兩種方法的結(jié)果進行比較分析。結(jié)果 TRFIA檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的靈敏度分別為0．2 ng/ml、10 mIU/ml、0．05 Ncu/ml、2 Ncu/ml和 0．2 Ncu/ml;對355 份臨床血清測定,除 HBeAg外,其余 4 個指標檢測陽性率均大于 EIA，兩個高濃度 HBsAg血清 EIA法陰性，但 TRFIA為陽性。結(jié)論 TRFIA 較 EIA 更為敏感;TRFIA在一定程度上可克服 EIA法中的高劑量鉤狀效應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】時間分辨熒光免疫技術(shù);免疫酶技術(shù);乙型肝炎血清標志物

時間分辨熒光免疫分析( time-resolved fluores cence immunoassay，TRFIA)是用鑭系元素Eu3+ (銪)螯合物作為示蹤物標記抗原或抗體,在免疫反應(yīng)完成后加入特殊的增強液,將Eu3+從標記抗原或抗體上解離下來并與增強液中的組分形成新的具有強烈熒光的螯合物,用特定的儀器測定熒光強度,從而判斷反應(yīng)體系中被測物濃度 TRFIA 具有靈敏度高,特異性強,操作簡便,示蹤物穩(wěn)定,可進行定量分析,無環(huán)境污染等優(yōu)點。乙肝病毒感染是常見感染性疾病之一,臨床常用酶免技術(shù)檢測乙肝病毒血清學(xué)標志物,診斷HBV 感染,由于鉤狀效應(yīng)和敏感性的原因，常造成HBV 感染的漏診。本文對TRFIA 定量檢測乙肝病毒五個血清標志物進行臨床評價為實驗室方法學(xué)選擇提供參考,現(xiàn)介紹如下。

1 材料和方法

1．1 標本 355份HBV感染者血清來自本院門診及住院患者。

1．2 試劑 定量檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb試劑盒:上海新波生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號20030526。EIA 試劑盒:北京金豪生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號20070512。乙肝病毒血清標志物定值質(zhì)控樣品:衛(wèi)生部臨床檢驗中心,批號0703。

1．3 儀器 時間分辨熒光免疫分析儀:Anytest2000。酶標儀:EL2800。

1．4 方法 TRFIA/EIA 試劑盒定量/定性檢測乙肝病毒血清標志物,均嚴格按各自說明書要求進行質(zhì)控樣品和臨床標本檢測。

1．5 結(jié)果判斷 TRF IA 法:HBsAg≥0．5 ng/ml，HBsAb ≥10 m IU/ml，HBeAg ≥0．03 Ncu/ml，HBeAb≥1．5 Ncu/ml，HBcAb≥1．0 NCU/ml為陽性。

2 結(jié)果

2．1 TRFIA 敏感性 對HBsAg 0．2 ng/ml、HBsAb 10 mIU/ml、HBeAg 0．5 Ncu/ml、HBeAb 2 Ncu/ml 和HBcAb 0．2 Ncu/ml 質(zhì)控樣品TRFIA 均可檢出。TRFIA 敏感性見表1。

2．2 TRFIA檢測HBsAg范圍 HBsAg質(zhì)控樣品0．2、2、5 ng/ml和高值(>10 000 ng/ml) TRFIA 均可檢出。

2．3 TRFIA檢測HBsAg的重復(fù)性 用TRFIA對1 ng/ml和HBsAg定值質(zhì)控血清重復(fù)20次測定,CV值為4．35%。

2．4 TRFIA法和EIA法測定355份 臨床血清標本結(jié)果見表2。

3 討論

3．1 EIA是目前臨床檢測HBV血清標志物普遍采用的方法,由于各試劑生產(chǎn)廠家所采用的包被基因片段的差異、操作步驟的有所不同(一步法、二步法)及操作時差、污染等因素的影響,致使檢測結(jié)果有所出入^[1],傳統(tǒng)方法(EIA)對乙肝兩對半血清標志物測定是定性法,只能判斷其陰陽性,無法得知其真正的濃度,對臨床診斷和治療帶來許多不便。而HBV血清標志物定量檢測能較為準確地反映其血清中的含量,可以間接反映體內(nèi)HBV 復(fù)制活躍程度,對臨床藥物療效評價具有重要意義^[2]。

3．2 TRFIA法檢測乙肝病毒五項血清學(xué)標志物的靈敏度均高于EIA 法,并具有較好的重復(fù)性,可檢出>10 000 ng/ml的HBsAg，提示對弱陽性和高濃度HBsAg 標本，TRFIA 檢出率高于EIA。

3．3 檢測結(jié)果顯示,兩種方法HBeAg 結(jié)果一致率較好,其余4個指標TRFIA 檢測的陽性率均大于EIA，TRFIA 檢測較EIA 檢測更敏感,可減少低濃度的HBsAg、HBeAg 感染患者的漏診^[3]。

3．4 TRFIA 對HBsAg>10 000 ng/ml 可檢出,對296 份臨床血清檢測時,2 份HBsAg 高值血清,在1∶100 稀釋后EIA 才出現(xiàn)陽性,而TRFIA 檢測原血清即為陽性。結(jié)果表明,與EIA 比較,TRFIA 不易出現(xiàn)高劑量HBsAg 的假陰性。

參 考 文 獻

［1］ 魏來,陶其敏.努力規(guī)范肝臟疾病的免疫學(xué)診斷.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2003，26(2) :69-71.

［2］ 張繼東．乙型肝炎表面抗原定量檢測臨床意義的探討.標記免疫分析與臨床,2000 ，7 (4):138-151.

［3］ 農(nóng)天雷,等.乙肝兩對半試驗定量放射免疫測定和臨床價值.放射免疫學(xué)雜志,2000 ，13 (4):246-471.