摘要：目的：研究智生膠囊Ⅰ號(hào)方(ZSJN)對(duì)老年癡呆模型大鼠智力、單胺氧化酶(MAO)、β－淀粉樣蛋白(β－AP)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的影響，探討其防治老年癡呆的作用及機(jī)理。方法：應(yīng)用腹腔注射D－半乳糖制成老年癡呆大鼠，應(yīng)用Morris水迷宮法判斷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，采用生化及其放免法測(cè)定其腦內(nèi)MAO活性、β－AP及GSH-Px含量。結(jié)果：與正常組大鼠相比，模型組學(xué)習(xí)記憶能力明顯降低。應(yīng)用“智生膠囊Ⅰ號(hào)方”預(yù)防和治療后，模型鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到保護(hù)和改善，腦組織MAO活性降低、β－AP含量減少、GSH-Px酶升高。結(jié)論；智生膠囊I號(hào)方能明顯增強(qiáng)模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，通過降低單胺氧化酶活性，降低β－AP，升高GSH-Px酶活性來實(shí)現(xiàn)對(duì)老年癡呆模型鼠預(yù)防和治療作用。
　　關(guān)鍵詞：老年癡呆；單胺氧化酶；β－淀粉樣蛋白；谷胱甘肽過氧化物酶；實(shí)驗(yàn)研究
　　中圖分類號(hào)：R285.5　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A　文章編號(hào)：1007－2349(2008)03－0036－03
　　
　　老年癡呆即“阿爾茨海默病”(Alzheimer Disease；AD)，是發(fā)生于老年前期或老年期，以進(jìn)行性癡呆，認(rèn)知障礙為主要癥狀，同時(shí)伴有精神行為異常的精神退行性疾病。其特征性臨床表現(xiàn)為嚴(yán)重的學(xué)習(xí)記憶功能下降，分析判斷能力衰退，情緒改變，行為失常，甚至意識(shí)模糊。由于AD的病因病機(jī)尚未明確，所以對(duì)該病還無特效藥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所使用的藥物大多處在臨床實(shí)驗(yàn)中，而且毒副作用大。中醫(yī)學(xué)具有悠久的歷史，其豐富的藥物種類為其提供了龐大的資源庫。“智生膠囊Ⅰ號(hào)方”是導(dǎo)師王景洪教授根據(jù)多年來的研究心得。結(jié)合中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究創(chuàng)制而成，方以人參、熟地、菟絲子、川芎、菖蒲、遠(yuǎn)志、銀杏葉組成。具有益氣補(bǔ)血填精、化痰祛瘀開竅、健腦益智強(qiáng)記之功，在臨床應(yīng)用中有較好療效?，F(xiàn)就以該藥對(duì)模型大鼠腦組織的MAO活性、β－AP及GSH-Px含量的影響方面進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。
　　
　　1　實(shí)驗(yàn)材料
　　
　　1.1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物　SD大鼠60只，雄性，6月齡，體重(300±50)g。由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院驗(yàn)動(dòng)物中心提供(醫(yī)動(dòng)字第08－005號(hào))
　　1.2　實(shí)驗(yàn)用藥及試劑 智生膠囊Ⅰ號(hào)方由陜西中醫(yī)學(xué)院藥物研究所提供，制成混懸液含生藥1.2g／mL；健腦膠囊由江西廣信藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)Z36020840，加入蒸餾水配制成濃度16.2mg／mL的混懸液；D－半乳糖注射液，西安阿爾寶生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)－0637；生理鹽水、蒸餾水，由陜西中醫(yī)學(xué)院生理教研室提供。單胺氧化酶試劑盒，批號(hào)20070911；β－淀粉樣蛋白試劑盒，批號(hào)20070809；谷胱甘肽過氧化酶試劑盒，批號(hào)20070906；均由南京建成生物工程研究所提供。
　　1.3　主要實(shí)驗(yàn)儀器　Morris水迷宮(陜西中醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)中心按李儀奎方法制作)、電子天平BSl24S(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司生產(chǎn))、數(shù)顯恒溫水槽DK－8AD型(上海一恒科技有限公司生產(chǎn))、723型可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司生產(chǎn))、KDC－40低速離心機(jī)(北京科大創(chuàng)新股份有限公司生產(chǎn))、超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)JY92－Ⅱ(寧波新芝生物科技股份有限公司生產(chǎn))、玻璃勻漿器(陜西中醫(yī)學(xué)院免疫教研室提供)。
　　
　　2　實(shí)驗(yàn)方法
　　
　　2.1　動(dòng)物分組　60只SD大鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為6組：A－正常對(duì)照組、B－模型組、C－健腦膠囊組、D－ZSJN小劑量組、E－ZSJN中劑量組、F－ZSJN大劑量組，每組各10只，分籠飼養(yǎng)。
　　2.2　造模方法　除正常對(duì)照組外，其余各組按文獻(xiàn)，采用腹腔注射0.5％D－半乳糖50mg／kg·d，連續(xù)6周。
　　2.3　給藥方法　造模20d后開始給藥(大鼠用量按文獻(xiàn)法折算)，小、中、大劑量組分別相當(dāng)于成人用量的10倍、20倍、40倍。灌胃體積勻?yàn)槊刻?mL／只，中、小劑量組加蒸餾水稀釋，大劑量組水浴中加熱濃縮，3種劑量配置為等體積液體。A、B組每日給予等體積生理鹽水灌胃；C組給予健腦膠囊0.162g／kg(相當(dāng)于臨床用量10倍)加蒸餾水配置為混懸液灌胃；D組每日給予ZSJN4g／kg(10倍于臨床用量)灌胃，E組每日給予ZSJN8g／kg(20倍于臨床用量)灌胃；F組每日給予ZSJNl6g／kg(40倍于臨床用量)灌胃；各給藥組連續(xù)給藥28d。
　　
　　3　指標(biāo)觀察
　　
　　3.1　行為學(xué)指標(biāo)Morris水迷宮法將該裝置由一不銹鋼制成的圓柱形水池和一可移動(dòng)位置的圓柱形透明有機(jī)玻璃站臺(tái)組成。水池直徑120cm，高50cm，站臺(tái)直徑12cm，高24cm。水池水深25cm(高出站臺(tái)lcm)，水溫控制在(23±0.5)℃，在水池邊緣上等距離設(shè)有東南西北4個(gè)標(biāo)記，將水池均等的分為4個(gè)象限。圓形水池中加入脫脂奶粉，使水渾不見低于水面1em的隱藏平臺(tái)，每天將大鼠面向池壁分別從東南西北4個(gè)不同象限固定入水池中各1次，直至找到并站在平臺(tái)上為止，游泳超過60S后，人為將大鼠放至平臺(tái)上10S進(jìn)行訓(xùn)練。每天的四周實(shí)物等固定，6天后正式實(shí)驗(yàn)，將隱藏平臺(tái)的位置轉(zhuǎn)移到對(duì)面象限中，記錄爬上平臺(tái)潛伏期的時(shí)間。
　　3.2　試劑盒的測(cè)定　于記憶功能測(cè)定結(jié)束后第2d，用脫臼法處死動(dòng)物，在冰臺(tái)上快速取出大鼠腦組織并置于冰生理鹽水中漂洗，除去血跡，濾紙拭干、稱重后，再將腦迅速浸入冷生理鹽水中(生理鹽水重量為腦組織重量的9倍)，用玻璃勻漿器在冰浴中制成10％的組織勻漿，以3000r／min離心10min，取勻漿上清液待用。對(duì)腦組織中的MA()、β－AP、GSH-Px的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。同時(shí)快速送一部分腦勻漿至附院同位素室檢測(cè)β－AP含量。
　　
　　4　統(tǒng)計(jì)方法
　　
　　數(shù)據(jù)均采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理(2組間以t檢驗(yàn)比較差異的顯著性；多組間以單因素方差分析進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)，多重比較采用Dunnett t檢驗(yàn)、q檢驗(yàn)。)
　　
　　5　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　
　　5.1　各組大鼠在Moriss水迷宮實(shí)驗(yàn)中的檢測(cè)結(jié)果見表1。
　　
　　從表1中可以看出：與正常組相比，模型組所用時(shí)間明顯增多(P＜0.01)，造模成功；與模型組相比，各治療組所用時(shí)間減少(##P＜0.01，#P＜0.05)，治療有效；各治療組相比，中劑量組效果最佳(△P＜0.01)。
　　5.2　智生膠囊Ⅰ號(hào)方對(duì)AD模型大鼠腦組織MA()、β－AP、GSH-Px酶含量的影響　結(jié)果見表2。
　　從表2可以看出：對(duì)于MAO活性，與正常組相比，模型大鼠腦組織MAO的含量明顯升高(P＜0.01)，說明造模成功；與模型組相比，各治療組MA()的含量不同程度降低(##P＜0.01，#P＜0.05)，治療有效；各治療組間相比，中劑量組效果最佳(△△P＜0.01)，且健腦膠囊與大劑量組無差異。對(duì)于p—AP含量，與正常組相比，模型組大鼠腦組織β－AP含量明顯升高(*P＜0.01)，說明造模成功；與模型組相比，各治療組β－AP含量不同程度降低(##P＜0.01，#P＜0.05)，治療有效；各治療組間相比，中劑量組效果最佳(△△P＜0.01)。且健腦膠囊與大劑量組無差異性。對(duì)于GSH-Px活性，與正常組相比，造模組大鼠腦組織GSH-Px含量明顯降低(*P＜0.01)，造模成功；與模型組相比，各治療組GSH-Px含量不同程度的升高(##P＜0.01，#P＜0.05)，治療有效；各治療組間相比，中劑量組效果最佳(△△P＜0.01)，且健腦膠囊與大劑量組無差異性。提示健腦膠囊及智生膠囊Ⅰ號(hào)方對(duì)AD的治療作用是通過降低MA()、β－AP活性。提高GSH-Px活性來實(shí)現(xiàn)的。
　　
　　6　討論
　　
　　現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明單胺氧化酶是體內(nèi)參與胺類物質(zhì)代謝的主要酶類，其代謝底物主要為單胺類和兒茶酚胺類物質(zhì)。MA()活性隨年齡增高而加強(qiáng)，與年齡程正相關(guān)，被認(rèn)為是老化的標(biāo)志，可間接反映人體的老化程度，又稱為老化相關(guān)酶。單胺類遞質(zhì)如去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(Adr)、多巴胺(DA)、5－羥色胺(5－HT)等，與學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)系極為密切嘲。MA()單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的降解酶，AD患者組織中MA()活性升高，氧化分解單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)老化。Hei－nonen報(bào)道使用單胺氧化酶抑制劑(MAOI)Selegiline治療老年性癡呆有效。同時(shí)有關(guān)學(xué)習(xí)記憶障礙研究顯示Ahhcim－crs病(AD)在病理學(xué)上的特征性改變是發(fā)生神經(jīng)炎斑(老年斑SP)形式的淀粉樣沉淀以及神經(jīng)纖維纏(NFT)。近年來大量研究表明，β－AP是構(gòu)成SP的核心物質(zhì)?，F(xiàn)有的大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果和臨床資料表明，β－AP是各種原因誘發(fā)AD的共同通路，是AD形成和發(fā)展的關(guān)鍵因素。以往大量體內(nèi)外研究均證實(shí)β－AP，尤其是聚合成纖維形的β－AP對(duì)神經(jīng)元有毒性作用，表現(xiàn)在破壞細(xì)胞膜的完整性，擾亂細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡等方面。GSH-Px是機(jī)體抗氧化防御體系中重要的酶之一，能清除HO防止細(xì)胞脂質(zhì)過氧化，延緩生命衰老。GSH-Px在細(xì)胞內(nèi)主要位于線粒體和胞漿，據(jù)研究大鼠的大腦皮質(zhì)，海馬和小腦的神經(jīng)元中GSH-Px的含量較高、活性也較強(qiáng)。膠質(zhì)細(xì)胞的GSH-Px比在神經(jīng)元的活性強(qiáng)10倍。GSH-Px的主要作用機(jī)制是清除氧代謝產(chǎn)物和維持谷胱甘肽活性。谷胱甘肽(GSH)系統(tǒng)是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化系統(tǒng)，尤其對(duì)細(xì)胞抵抗自由基的侵害起重要作用。因此測(cè)定GSH-Px的活性對(duì)于了解體內(nèi)抗氧化狀態(tài)，研究抗AD藥物有著重要的意義。
　　中醫(yī)學(xué)認(rèn)為老年癡呆的發(fā)生主要是虛、痰、瘀三個(gè)方面，本虛為腎精虧虛、心脾不足、氣血虛損；標(biāo)實(shí)為痰濁上擾、瘀血阻竅。病位在心腦，與肝脾腎關(guān)系密切，痰濁瘀血為基本病理因素。智生膠囊Ⅰ號(hào)方以補(bǔ)腎填精、益氣活血、化痰祛瘀開竅為立法組方。方中君藥為人參、熟地、菟絲子等，氣血雙補(bǔ)，陰陽兼顧，動(dòng)靜結(jié)合；臣藥為菖蒲、遠(yuǎn)志寧心安神，祛痰開竅，兩藥和用，相輔相助，使氣血不復(fù)上苑，痰濁消散不蒙清竅，神志自可清明，川芎有活血行氣開郁，祛風(fēng)止痛之功，為血中氣藥，且能上行頭目。銀杏葉為佐使藥，功能斂肺止咳，活血止痛，健腦益智。全方邪正兼顧，標(biāo)本同治，共奏健腦益智強(qiáng)記之功。
　　智生膠囊Ⅰ號(hào)方可明顯降低D-半乳糖模型大鼠腦組織MAO活性和β-AP含量、提高腦組織GSH-Px含量，使腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)水平升高，增強(qiáng)了遞質(zhì)的傳遞，清除過多的氧自由基，拈抗了記憶障礙，改善記憶功能，是該藥發(fā)揮益智作用的重要途徑和主要機(jī)理之一，同時(shí)此作用的發(fā)揮可能是以益氣補(bǔ)血填精功用為基礎(chǔ)。藥理實(shí)驗(yàn)中大劑量組綜合評(píng)價(jià)效果不如中劑量組，可能是因?yàn)榇髣┝拷M濃度較大，灌胃后吸收差的原因造成的，需要更為詳盡的藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探索其量效關(guān)