摘 要:目的:建立小承氣湯中番瀉苷A的HPLC含量測定方法#65377;方法:采用Sinochrom C18柱(250mm×4.6mm)，流動相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5)，流速:1.0ml/min，檢測波長:340nm#65377;結(jié)果:番瀉苷A在0.2～1.0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=124.72X+6.5(r=0.9995)#65377;結(jié)論:所建立的HPLC方法可用于小承氣湯的質(zhì)量控制#65377;

關(guān)鍵詞:HPLC 小承氣湯 番瀉苷A

小承氣湯出自《傷寒論》，適用于陽明腑實證，可以治療粘連性腸梗阻#65380;腸麻痹#65380;慢性胃炎等[1]#65377;小承氣湯現(xiàn)代處方：大黃12g#65380;厚樸6g#65380;枳實9g，水煎服[2]#65377;有關(guān)小承氣湯的質(zhì)量研究文獻報道很少，胡曉靜等測定了小承氣湯中的大黃酸和厚樸酚的含量[3]，而大黃中番瀉苷A的含量測定則未見報道#65377;本文通過HPLC測定小承氣湯中番瀉苷A的含量，為小承氣湯今后的深入研究提供參考#65377;

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 BF-KNAUER 高效液相色譜儀，K-501高壓輸液泵，K-2501紫外分光檢測器，BF-2002色譜工作站;FA210⁴ 萬分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠)#65377;TY-CZ1006超聲波清洗儀(常州天億電子設(shè)備有限公司)

1.1.2 藥材與試劑 藥材購于長沙市老百姓大藥房，經(jīng)本校生藥教研室鑒定，大黃為Rheum officinale Baill的根莖;枳實為Citrus anrantium L.的干燥幼果;厚樸為Magnolia officinalis Rehd.et Wils番瀉苷A(日本純藥工業(yè)株式會提供)#65377;乙腈為色譜純，其余所用試劑均為分析純#65377;

1.2 實驗方法

1.2.1 小承氣湯的制備 按處方比例分別稱取大黃12g#65380;厚樸6g#65380;枳實9g，按參考文獻方法精密加入10倍量水浸泡1h后，電爐直火加熱回流1h[4]，冷卻至室溫，抽濾即得小承氣湯樣品液#65377;

1.2.2 陰性對照液的制備 按處方比例稱取厚樸6g#65380;枳實9g，按2.1進行制備，得陰性小承氣湯樣品液#65377;

1.2.3 大黃煎煮液的制備 稱取大黃12g，按2.1進行制備，得大黃單煎液#65377;

2 結(jié)果

番瀉苷A的測定#65377;

2.1 色譜條件 依立特Sinochrom C18柱(250mm×4.6mm);流動相:乙腈:水:冰醋酸(60:35:5);流速:1.0ml/min;柱溫:30℃;檢測波長:340nm;進樣量:20μl#65377;

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取番瀉苷A 5mg，以pH 8.0的磷酸緩沖液溶解，并定容至50ml，得番瀉苷A貯備液#65377;精密吸取該溶液5ml，用70%甲醇定容至10ml，在所設(shè)定的HPLC條件下，以上述溶液分別進樣4μl#65380;6μl#65380;8μl#65380;10μl#65380;20μl，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=12472X+265(r=0.9995)#65377;

2.3精密度試驗 取上述番瀉苷A溶液，在上述色譜條件下測定，重復(fù)進樣5次，結(jié)果番瀉苷A RSD為1.97%， 結(jié)果表明，進樣精密度良好#65377;

2.4 穩(wěn)定性實驗 取小承氣湯樣品溶液按“樣品液中番瀉苷A含量測定”項下方法處理，分別于0，2，4，8，12，24h對樣品進行分析，RSD為3.2%#65377;

2.5 重復(fù)性實驗 取小承氣湯樣品溶液3份(每份25ml)， 按“樣品液中番瀉苷A含量測定”項下方法處理，測定并計算番瀉苷A含量，RSD為2.2%#65377;

2.6 大黃藥材中番瀉苷A的含量測定[5] 精密稱取大黃粉末5g入具塞試管中，精密加入pH 8.O的磷酸鹽緩沖液20ml，40℃超聲波提取30min，3000r/min離心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml，按上述條件，進樣量為10μl，測得原藥材中番瀉苷A的含量為0.28mg/g#65377;

2.7 樣品液中番瀉苷A含量測定:分別精密量取各樣品溶液25ml，60℃水浴上蒸干，加入pH8.0的磷酸鹽緩沖液20ml，40℃超聲波提取30min，3000r/min離心10min，精密量取5ml，加70%甲醇定容至10ml，按上述條件，進樣量為20μl，番瀉苷A含量(μg/ml)結(jié)果:大黃單煎液18.76，小承氣湯樣品液19.04，陰性對照液(-)#65377;色譜圖見圖1，圖2#65377;

2.8 加樣回收率實驗精密量取小承氣湯樣品溶液3份（每份25ml），分別精密加入番瀉苷A 對照液0.2#65380;0.4#65380;0.6ml溶液，其余操作同2.4.7，番瀉苷A得平均加樣回收率為97.4%，RSD為1.9%#65377;

3 討論

小承氣湯具有明顯瀉下作用，其物質(zhì)基礎(chǔ)在于方中的大黃及其煎出的結(jié)合蒽醌#65377;測定小承氣湯中番瀉苷A的含量，為探討小承氣湯的有效成分及其質(zhì)量評價，提供了參考依據(jù)#65377;番瀉苷A在紫外200～400nm中，在340，270nm處有較強吸收，選用270nm為檢測波長，實驗中發(fā)現(xiàn)干擾較大，所以選擇340nm作為檢測波長#65377;番瀉苷A結(jié)構(gòu)中含有-COOH，故HPLC洗脫劑應(yīng)加入酸，避免脫尾巴現(xiàn)象，本實驗中發(fā)現(xiàn)用冰醋酸的效果優(yōu)于磷酸#65377;

參考文獻

1#65380;吳照平，王全德. 加味小承氣湯臨床應(yīng)用[J]. 陜西中醫(yī)，1984，5 （4） ：25

2#65380;彭懷仁. 中華名醫(yī)方劑大全[M]. 北京：金盾出版社，1990：58

3#65380;胡曉靜，高軼哲，李飛，等. HPLC 法測定小承氣湯中大黃酸和厚樸酚的含量[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2007，24(1):26-28

4#65380;李文瑞.金匱要略湯證論治(第1版)[M].北京:中國科學(xué)出版社，1993:312

5#65380;裴 剛，何桂霞，杜方麓，等.大承氣湯分煎與混煎化學(xué)等值初步研究[J].中成藥，2000，22（9）：603-605

(收稿日期:2007.12.2)