摘 要:目的:建立一種測(cè)定益智溫腎十味丸含量的方法#65377;方法:以O(shè)DS Hypersil（5μm，4.6mm×200mm）為分析柱，甲醇-水(76：24)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)343nm，進(jìn)樣量10μL#65377;采用HPLC法測(cè)定胡椒堿的含量#65377;結(jié)果:胡椒堿在0.172～1.033μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.9996)，平均回收率為97.64%，RSD=1.4%(n=9)#65377;結(jié)論:本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，重現(xiàn)性好，可作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制的方法#65377;

關(guān)鍵詞:益智溫腎十味丸 胡椒堿 HPLC 含量測(cè)定

益智溫腎十味丸是由益智#65380;干姜#65380;蓽茇#65380;榧子#65380;蓮子等10味藥材組成的復(fù)方制劑#65377;為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(蒙藥分冊(cè))155頁(yè)項(xiàng)下品種，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為ZZ-8385#65377;具有祛腎寒#65380;利尿之功效#65377;臨床用于腎寒腎虛，腰腿痛，尿閉，腎結(jié)石等癥#65377;國(guó)內(nèi)對(duì)該藥質(zhì)量控制的報(bào)導(dǎo)較少，2005年版中國(guó)藥典一部項(xiàng)下，采用HPLC法，以胡椒堿為對(duì)照品，對(duì)蓽茇藥材進(jìn)行了含量測(cè)定[1]，因此選擇胡椒堿為對(duì)照品，對(duì)成品質(zhì)量進(jìn)行控制#65377;

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10ATvp液相泵#65380;SPD-10Avp檢測(cè)器(日本島津公司)#65377;

1.2 試劑 甲醇為色譜純，水為重蒸餾水#65377;其他均為分析純#65377;

1.3 對(duì)照品 胡椒堿對(duì)照品對(duì)照品由中國(guó)生物制品檢定所提供（批號(hào):0775-9702含量測(cè)定用）#65377;益智溫腎十味丸(市售品，內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司生產(chǎn))

2 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ODS Hypersil(北京八方公司)（5μm，4.6mm×200mm）;流速:1.0mL·min-1;柱溫:25℃，測(cè)定波長(zhǎng)選定為343 nm#65377;流動(dòng)相:甲醇-水(76：24)，按胡椒堿色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3000#65377;

2.2 線性范圍的考察 精密稱取胡椒堿對(duì)照8.61mg，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻#65377;精密吸取1.0mL，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL含胡椒堿86.10μg的對(duì)照品溶液#65377;精密吸取2#65380;4#65380;6#65380;8#65380;10和12μL，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以進(jìn)樣量（μg）為橫座標(biāo)，峰面積（A）為縱座標(biāo)，進(jìn)行回歸，得回歸方程:Y=1.166×10-8X+3.210×10-3r=0.9996#65377;結(jié)果表明，在擬定的色譜條件下，胡椒堿在0.172～1.033μg之間，進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好#65377;

2.3 供試品溶液的制備 取本品(批號(hào):070402)20粒，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，加甲醇約40mL，超聲提取40min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液，即得#65377;

2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備 取處方量藥材，除去蓽茇，按制備工藝制成陰性對(duì)照品，再按“2.3”項(xiàng)下方法制備#65377;

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取胡椒堿對(duì)照品溶液1OμL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算胡椒堿吸收峰面積，結(jié)果RSD=0.5%，說明本方法精密度良好#65377;

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液(批號(hào):070402)與胡椒堿對(duì)照品溶液，分別于室溫放置，按0#65380;2#65380;4及6h時(shí)間間隔，分別進(jìn)樣lOμL，結(jié)果樣品RSD為1.82%<2%，對(duì)照品RSD為0.8%#65377;試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品溶液待測(cè)組分在6h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定#65377;

2.7 樣品含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào):070402)20粒，研成細(xì)粉，取0.5g，精密稱定，共6份#65377;按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10μL和對(duì)照品溶液10μL，分別注入液相色譜儀中，測(cè)定胡椒堿色譜峰面積，計(jì)算胡椒堿含量#65377;結(jié)果樣品中胡椒堿含量的RSD=1.32%，表明，本實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性良好#65377;

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的本品(批號(hào):070402，含胡椒堿1.495mg·g^-1)細(xì)粉0.25g，共計(jì)9份，每3份平行，分別精密稱定重量，精密加入0.524mg·mL^-1胡椒堿對(duì)照品溶液1.0mL#65380;0.405mg·mL^-1胡椒堿對(duì)照品溶液1.0mL及0.315mg·mL^-1胡椒堿對(duì)照品溶液1.0mL，按按前述液相色譜條件測(cè)定胡椒堿峰面積，計(jì)算樣品中胡椒堿含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見表1#65377;

2.9 樣品中胡椒堿含量測(cè)定 取本品10批次樣品各20粒，分別研成細(xì)粉，各稱取0.5g，精密稱定重量，按“含量測(cè)定”項(xiàng)下試驗(yàn)，測(cè)定各批樣品中胡椒堿含量，分別為1.495，2.025，1.650，2.050，1.815，1.420，1.640，1.860，2.015，1.610 mg·g^-1#65377;

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，初步將本品每g含蓽茇以胡椒堿(C₁₇H₁₉NO₃)計(jì)不得少于1.40mg#65377;

3 討論

本品制備工藝中，蓽茇藥材以原粉入藥，因此參照2005年版中國(guó)藥典項(xiàng)下方法，將乙醇提取改為甲醇提取樣品，并分別考察不同超聲提取時(shí)間提取液中胡椒堿含量#65377;結(jié)果表明超聲提取40min以后，提取液中胡椒堿含量不再增加，因此確定供試品溶液超聲提取時(shí)間為40 min#65377;

參考文獻(xiàn)

1. 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)編 中國(guó)藥典[S]，化學(xué)工業(yè)出版社.2005:163

(收稿日期:2007.12.3)