Analysisof VaginalMicroecological Changes，SubtypeDistributionof HPVInfection inPatients with Cervical HSIL，and Influencing Factors of HPVOutcome/YUAN Aiqin，XUMeihua，YUJiamei.//Medical Innovation of China，2025，22（18）：157-162

[Abstract]Objective：To explore the vaginal microecology changes and the subtype distribution of human papillma virus （HPV） infection in patients with cervical high-grade squamous intraepithelial lesion （HSIL），and toanalyzethe influencing factorsofHPVoutcome.Method：A totalof15Opatients withcervical HSIL diagnosed bypathological examination inYichun Maternal and Child Health Center from January 2O21 to December 2022 were selected as the disease group，and another1OO healthy women who underwent physical examinations at the Outpatient Department durig the same period were selected as the control group.The disease group was divided into the HPV persistent infection group and the HPV negative conversion group based on whether HPV turned negative after one year of treatment.The vaginal microecology of the disease group and the control group was compared，thedistributionof high-risk HPV（HR-HPV）infectionsubtypes wasanalyzed，andtheinfluencing factors of HPVoutcome were analyzed.Result：The proportions of patients with densityof normalflora，the diversityof normal floraand normal flora in thedisease group were allower thanthose in the control group，the proportions of patients with hydrogen peroxide （ H₂0₂ ） deficiency，sialidase （SNa） positive，leukocyte esterase （LE） positive， N-acetylaminohexosidase （NAG） positive and pH value gt;4.5 in the disease group were all higher than those in the control group，the differenceswere all statistically significant（ P lt;0.05）.Among the 150 patientswith cervical HSIL， the infection rate of HPV16 was the highest，folowed by HPV18.Compared with the HPV negative conversion group， age，infection subtype 16/18，pathological diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia （CIN） at grade || ，and the proportions of patients with abnormal flora density，abnormal flora diversity，flora imbalance， H₂O₂ deficiency， SNa （+），ndpHgt;4.5intheHPVpersistentinfectiongroupwereallhigher，thediferences werestatisticallysignificant （ P lt;0.05）.Multivariate logistic regresson analysis showed that age，infection subtype 16/18，pathological diagnosis of CIN grade II，abnormal flora density，abnormal flora diversity，flora dysbiosis， H₂₂ deficiency， SNa （+） ，and pH gt;4.5 were independent risk factors for persistent HPV infection （ P lt;0.05）. Conclusion： Patients with cervical HSIL may present vaginal microecological changes.Age，infection subtype，pathological grade，microbiota density， microbiota diversity，dominant bacteria，and changes in H₂O₂ ，SNa and pH are independent risk factors for persistent HPV infection.

[Key words] Cervical high-grade squamous intraepithelial lesion Vaginal microecology Human papilloma virus

First-author'saddress：Department of Obstetricsand Gynecology，Yichun Maternaland Child Health Center，Yichun33600o，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2025.18.036

子宮頸癌是危害女性健康的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，2022年我國新發(fā)子宮頸癌約有15萬例，死亡人數(shù)約為5.6萬，我國子宮頸癌防控形勢嚴(yán)峻，發(fā)病人數(shù)占全球的 18.6%^[1] 子宮頸癌的主要病因是人乳頭狀瘤病毒（HPV）的持續(xù)感染，尤其是高危型HPV（HR-HPV），其主要發(fā)病特點為經(jīng)過10年以上的癌前病變期，即子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變（SIL），包括低級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）和高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）。SIL與女性感染年齡、HPV感染亞型及病毒載體數(shù)量等密切相關(guān)，大部分LSIL可自然消退，而HSIL存在癌變的可能。SIL若不及時接受有效治療，進展為浸潤性癌和原位癌的可能性極大[2]。HPV感染患者中有 10%～30% 繼續(xù)進行性發(fā)展，既往研究證實，陰道微生態(tài)在HSIL進展的過程中具有重要影響[。健康女性陰道內(nèi)環(huán)境以乳酸、過氧化氫0 H₂O₂ ）、乳酸菌素等革蘭氏陽性乳桿菌為優(yōu)勢菌，主要發(fā)揮預(yù)防感染、維持陰道微生態(tài)平衡的作用[4。據(jù)文獻報道，陰道菌群長期失調(diào)可影響病毒清除，增加子宮頸HPV感染的風(fēng)險，促進子宮頸病變的進一步發(fā)展5?；诖?，本研究旨在探討子宮頸HSIL患者陰道微生態(tài)變化及與HPV感染的相關(guān)性，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2021年1月—2022年12月宜春市婦幼保健院經(jīng)病理檢查確診的150例子宮頸HSIL患者，設(shè)為疾病組。另擇同期門診體檢的健康女性100例納入對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）疾病組參照文獻[6]《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷，均經(jīng)陰道鏡活檢、病理學(xué)檢查確診子宮頸HSIL且HPV感染；（2）對照組體檢健康；（3）非妊娠期、非月經(jīng)期；（4）育齡期且有性生活史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近3個月內(nèi)使用過激素，近1周內(nèi)有陰道灌洗放藥；（2）急性生殖道感染；（3）近2周內(nèi)有抗生素用藥史；（4）合并造血系統(tǒng)疾??；（5）宮腔手術(shù)史，全子宮切術(shù)及放化療；（6）伴有陰道炎癥、伴有嚴(yán)重內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。唬?）合并惡性腫瘤、免疫性疾病;（8）合并腎、肝、心臟系統(tǒng)疾病；（9）合并精神疾病或認(rèn)知障礙。本研究經(jīng)宜春市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)；患者自愿參與本研究并簽字。

1.2 方法

1.2.1病理學(xué)檢查采集子宮頸脫落細(xì)胞，細(xì)胞洗液植入新柏氏保存液中，Bethesda分級系統(tǒng)進行細(xì)胞學(xué)診斷，對宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）者進行組織切片檢查，最終診斷為HSIL。

1.2.2陰道微生態(tài)檢測擴陰器暴露陰道，2根無菌棉簽于陰道上1/3段處旋轉(zhuǎn)10s后平鋪于載玻片上，進行檢測。第一張涂片革蘭染色， 10×100 倍油鏡下進行觀察。（1）菌群密集度分級依據(jù)為視野平均細(xì)菌數(shù)，共分為4個等級，視野平均細(xì)菌數(shù)為1＼～9個（I級）10＼～99個（Ⅱ級） ?100 個（Ⅲ級）細(xì)胞聚集或密集覆蓋黏膜上皮細(xì)化（IV級）分別記為 +.++.+++.++++.+++ 為正常，+、 ⁺⁺⁺⁺⁺ 為異常。（2）菌群多樣性：分級依據(jù)為能分辨的細(xì)菌菌群數(shù)目，共分為4個等級，能分辨的細(xì)菌菌群數(shù)目為1＼～3種（I級）4＼～6種（Ⅱ級）7＼～10種（Ⅲ級） ?11 種（IV級）分別記為 +、++、+++ ⁺⁺⁺⁺⁺ ： ⁺⁺ 、 ⁺⁺⁺ 為正常， + 、 ⁺⁺⁺⁺ 為異常。（3）優(yōu)勢菌：第二張涂片蘇木素伊紅染色， 10×40 倍鏡下觀察陰道桿菌、滴蟲、線索細(xì)胞等病原微生物；優(yōu)勢菌為乳酸桿菌為正常菌群，優(yōu)勢菌為線索細(xì)胞或其他病原體感染判定為菌群失調(diào)，包括需氧菌性陰道炎。（4）另測定唾液酸苷酶（SNa）、過氧化氫（ H₂O₂ ）、 ΔpH 值、N-乙酰氨基己糖苷酶（NAG）、白細(xì)胞酯酶（LE）等，其陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為： H₂O₂ 濃度 lt;2μmol/L 為 H₂O₂ 缺乏；SNa水平 ?7.0U/L 為SNa （+） ；LE水平 ?9.0U/L 為LE （+） ;NAG水平 ?6.0U/L 為NAG （+）。

1.2.3HR-HPV檢測（1）采樣：無菌取樣刷于子宮頸口取樣本，送檢。（2）檢測：實時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），儀器為全自動基因擴增儀（ABI7500），試劑盒購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司。（3）HR-HPV亞型：68、59、58、52、51、45、39、35、33、31、18、 16 （4）術(shù)后3個月再次檢查，2次檢查結(jié)果為同一分型（+）則表明患者HPV持續(xù)陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）對比疾病組和對照組的陰道微生態(tài)。（2）統(tǒng)計疾病組HR-HPV亞型感染檢出情況。（3）根據(jù)治療1年后HPV是否轉(zhuǎn)陰，將疾病組分為HPV持續(xù)感染組與HPV轉(zhuǎn)陰組，比較兩組陰道微生態(tài)及臨床資料。（4）分析HPV轉(zhuǎn)歸的影響因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析和處理，計量資料以（ ）表示，采用 χ_t 檢驗；計數(shù)資料以率（ % ）表示，采用 χ² 檢驗；應(yīng)用logistic回歸分析HPV轉(zhuǎn)歸的影響因素。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較

疾病組年齡23-62歲，平均（ 45.02±7.54 ）歲；體重指數(shù)（BMI） 18.3～28.7kg/m² ，平均（ 24.31±3.57 ） kg/m² 。對照組年齡20＼～64歲，平均（ 44.86±7.79 ）歲；BMI 18.7～28.5kg/m² ，平均（ 24.19±3.22 ） kg/m² 。兩組基線資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（ Pgt;0.05 ），有可比性。

2.2 兩組陰道微生態(tài)比較

與對照組比較，疾病組正常菌群密集度、正常菌群多樣性及正常菌群患者占比均更低， H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 、LE （+） 、NAG （+） 及 pH 值 gt;4.5 患者占比均更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表1。

2.3疾病組HR-HPV亞型感染檢出情況

HR-HPV感染亞型為16和18的占比明顯高于其他亞型，HPV16感染率最高。見表2。

2.4HPV轉(zhuǎn)歸的單因素分析

同HPV轉(zhuǎn)陰組比較，HPV持續(xù)感染組的年齡、HPV16/18型感染、病理診斷CIN為Ⅲ級、菌群密集度構(gòu)成異常率、菌群多樣性構(gòu)成異常率、菌群失調(diào)、 H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 及 pHgt;4.5 患者占比均更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表3。

2.5 HPV轉(zhuǎn)歸的多因素分析

將表3中比較有統(tǒng)計學(xué)意義的數(shù)據(jù)納入多因素logistic回歸分析，結(jié)果顯示，年齡、感染亞型16/18、病理診斷CIN為Ⅲ級、異常菌群密集度構(gòu)成、異常菌群多樣性構(gòu)成、菌群失調(diào)、 H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 及 pHgt;4.5 是HPV持續(xù)感染的獨立危險因素（ Plt;0.05 ），見表4。

3討論

陰道微生態(tài)失衡與宮頸病變進展密切關(guān)聯(lián)，相關(guān)研究指出，陰道菌群失調(diào)可導(dǎo)致宮頸HR-HPV感染，而HR-HPV感染可能會促進SIL進展為HSIL，HSIL具有明顯的惡變潛能，若果未能及時治療，可能進展為浸潤性子宮頸癌。文獻[8]報道，未接受治療的CINI平均13年內(nèi)有 15%～23% 的患者會發(fā)展為浸潤性癌，終身風(fēng)險可達 40% 。陰道微生態(tài)失衡的病理機制復(fù)雜，涉及多種因素，包括女性雌激素水平的變化、微生物群落結(jié)構(gòu)變化、免疫系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響及年齡和生理周期等因素[9-10]。早期發(fā)現(xiàn)患者陰道微環(huán)境改變并及時采取相應(yīng)的干預(yù)治療措施，對降低HR-HPV感染率、延緩子宮頸癌發(fā)生有重要意義。

本研究中，同對照組比較，疾病組正常菌群密集度、正常菌群多樣性及正常菌群患者占比均更低，H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 、LE （+） 、NAG （+） 及 pH 值gt;4.5 患者占比均更高（ Plt;0.05 ）。同HPV轉(zhuǎn)陰組比較，HPV持續(xù)感染組異常菌群密集度構(gòu)成、異常菌群多樣性構(gòu)成及菌群失調(diào)率均更高（ Plt;0.05 ）。表明子宮頸HSIL患者的陰道菌群構(gòu)成發(fā)生變化，且HR-HPV持續(xù)感染與陰道微生態(tài)改變有關(guān)。乳酸桿菌是健康女性陰道微生態(tài)中的優(yōu)勢菌，通過多種機制維持陰道微生態(tài)平衡：一方面，乳酸桿菌可通過將單糖轉(zhuǎn)化為乳酸，維持陰道局部 pH 值保持在3.8＼～4.4，有效抑制部分病原體生長；另一方面，乳酸桿菌能夠通過分解陰道黏膜中的糖原，產(chǎn)生 H₂O₂ 和乳酸，促進微生態(tài)平衡的同時，還能發(fā)揮自凈作用，總之，陰道乳酸桿菌在維持女性生殖道健康中起重要作用[11-13]?？琢值萚4]研究顯示，子宮頸病變與子宮頸卷曲乳酸桿菌相對豐度相關(guān)聯(lián)，卷曲乳酸桿菌相對豐度變化可預(yù)測子宮頸病變及HPV感染。劉慧等[15]報道，相較于低危HPV，HR-HPV患者陰道菌群多樣性、菌群密集度異常率更高，細(xì)菌性陰道炎、需氧菌性陰道病及外陰陰道假絲酵母菌病的檢出率更高，提示陰道微生物失調(diào)可導(dǎo)致HR-HPV感染，參與宮頸病變進展。細(xì)菌性陰道炎是子宮頸癌的高危因素，線索細(xì)胞陽性患者的陰道微生物中黏蛋白降解酶增加，可對陰道上皮保護性黏膜屏障造成破壞，為病原微生物黏附入侵提供條件[。此外，細(xì)菌性陰道炎還可通過影響炎癥因子分泌干擾子宮頸組織內(nèi)免疫平衡的輔助因子分泌。伏晨陽等[研究發(fā)現(xiàn)，與正常HPV陰性患者對比，HPV陽性患者線索細(xì)胞、SNa、LE陽性占比、陰道微生態(tài)失調(diào)占比均更高，說明陰道微生態(tài)失衡容易導(dǎo)致HPV感染，引發(fā)宮頸病變。鄭晶晶等[8]研究表明，HPV持續(xù)感染組與轉(zhuǎn)陰組對比，前者陰道菌群密集度異常、菌群多樣性異常及滴蟲陰道炎發(fā)生率均更高，且持續(xù)感染組患者陰道微生態(tài)失衡率更高，陰道微生態(tài)失衡預(yù)測HPV持續(xù)感染的曲線下面積為0.601，提示陰道微生態(tài)失衡的病理改變可能參與HPV感染的獲得過程，其對HPV感染具有一定的預(yù)測價值，檢測患者陰道微生態(tài)有重要意義。

此外，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，HR-HPV感染亞型為16和18的占比明顯高于其他亞型，HPV16感染率最高。經(jīng)多因素logistic回歸分析得：年齡、感染亞型16/18、病理診斷CIN為Ⅱ級、異常菌群密集度構(gòu)成、異常菌群多樣性構(gòu)成、菌群失調(diào)、 H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 及 pHgt;4.5 是HPV持續(xù)感染的獨立危險因素（ Plt;0.05 ）。靳榮等研究結(jié)果顯示，在HR-HPV感染患者中，16型占比為 23.81% ，18型占比為 16.67% ，HPV16型持續(xù)感染及HR-HPV感染是導(dǎo)致子宮頸癌前病變進展的高危因素。王憲偉等[報道，HPV16/18亞型、年齡 gt;40 歲及CIN為Ⅱ級的患者在術(shù)后更容易出現(xiàn)HPV持續(xù)性感染。本研究結(jié)果與上述報道一致。HPV16和HPV18的病毒載量較高，其在宿主體內(nèi)的活躍度高，持續(xù)感染的可能性增大；此外，這兩種亞型的病毒可通過將自身基因整合到宿主細(xì)胞基因組中，抑制宿主細(xì)胞的正常功能，從而促使細(xì)胞持續(xù)增殖和癌變[20-21]。此外，有研究表明， H₂O₂ 缺乏、SNa （+） 及 pHgt;4.5 與高危型HPV感染呈正相關(guān)[22]。因此，臨床針對HPV感染亞型為16/18、CINII級及陰道微生態(tài)失衡的患者，應(yīng)積極采取相應(yīng)的針對性治療措施，加強此類病患的隨訪及管理，預(yù)防或延緩子宮頸病變進展。

綜上所述，微生態(tài)失衡是導(dǎo)致子宮頸HSIL及HPV持續(xù)感染的重要原因，對患者陰道微生態(tài)進行合理干預(yù)十分必要。此外，臨床醫(yī)師還需加強對HPV感染亞型為16/18、CINⅡI級患者的管理及隨訪，以盡早發(fā)現(xiàn)持續(xù)性感染患者，改善其預(yù)后。

參考文獻

[1]STELZLED，TANAKALF，LEEKK，etal.Estimatesoftheglobalburden ofcervical cancer associated with HIV[J].LancetGlobHealth，2021，9（2）：161-169.

[2]中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會.子宮頸錐切術(shù)后高危型人乳頭瘤病毒陽性者規(guī)范化管理的專家共識[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2021，37（6）：650-653.

[3]靳榮，李紅芳.高危型HPV持續(xù)感染對宮頸癌前病變進展的影響[J].中國婦幼保健，2020，35（3）：406-409.

[4]ZHENGJJ，MIAOJR，WUQ，etal.CorrelationbetweenHPV-negative cervical lesionsand cervical microenvironment[J].TaiwanJObstetGynecol，2020，59（6）：855-861.

[5]LINSB，ZHANGB，LINYX，etal.Dysbiosis of cervicalandvaginal microbiotaassociatedwithcervicalintraepithelialneoplasia[J].FrontCell InfectMicrobiol，2022，12：767693.

[6]謝幸，孔北華，段濤.婦產(chǎn)科學(xué)[M].9版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2018：157-166.

[7]薛啟迪，許英慧，周曼林，等.高級別上皮內(nèi)瘤變和不同型別人乳頭瘤病毒感染患者陰道微生態(tài)特征分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2024，36（3）：327-331.

[8]趙超，畢蕙，趙昀，等.子宮頸高級別上皮內(nèi)病變管理的中國專家共識[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2022，23（2）：220-224.

[9]胡佳貞，張鑫，涂少華，等.陰道微生態(tài)與絕經(jīng)期女性盆腔器官脫垂的相關(guān)性[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2023，35（2）：207-213.

[10]張頌婕，葉明珠，曲長萍，等.陰道微生態(tài)與宮頸HPV 感染患者炎性因子和T細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2023，35（12）：1449-1453.

[11]王藍(lán)康，姜家康，遲文成.陰道微生態(tài)與HPV感染及宮頸癌的相關(guān)性研究[J].中國性科學(xué)，2023，32（10）：38-41.

[12]江海燕，周燕，陳曉玲.人乳頭瘤病毒感染患者陰道菌群分布及宮頸局部免疫功能變化的分析[J].中國性科學(xué)，2022，31（4） ： 83-87.

[13]歐楊，田莉，羅勇，等.乳桿菌對HSIL全子宮切除術(shù)后HR-HPV清除率及陰道微生態(tài)的影響[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2023，35（9）：1079-1083.

[14]孔林，柴芝紅，蔡仙麗，等.子宮頸卷曲乳酸桿菌相對豐度與HPV感染和子宮頸病變的關(guān)聯(lián)性[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2022，32（4）：582-585.

[15]劉慧，趙華，李洋.陰道微生態(tài)與人乳頭瘤病毒感染及宮頸病變的相關(guān)性[J].中華實用診斷與治療雜志，2024，38（2）：195-200.

[16]陳咪咪，王瑞.宮頸癌同步放化療對陰道微生態(tài)失調(diào)的影響及BV相關(guān)菌分布特征分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2021，18（10）： 1420-1423.

[17]伏晨陽，周萍，張頻，等.陰道微生態(tài)與人乳頭瘤病毒感染和宮頸病變的相關(guān)性[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2023，27（16）： 37-42.

[18]鄭晶晶，張凡，秦晶晶，等.陰道微生態(tài)失衡聯(lián)合血清HLA-G、HLA-E水平評估HSIL 患者CKC術(shù)后HPV持續(xù)感染價值[J].中國計劃生育學(xué)雜志，2024，32（7）：1658-1662.

[19]王憲偉，袁風(fēng)菊，徐培，等.高級別鱗狀上皮內(nèi)病變病人子宮頸切除術(shù)后人乳頭瘤病毒持續(xù)感染的相關(guān)危險因素研究[J].安徽醫(yī)藥，2023，27（12）：2412-2416.

[20]李巧稚，王婭菲.子宮頸細(xì)胞系及子宮頸上皮病變中共刺激分子B7-H1的表達及與HPV16感染的關(guān)系[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2020，36（10）：1138-1143.

[21]侯任，盧劍，楊曉宇，等.HPV16/18 基因DNA存在狀態(tài)與宮頸病變發(fā)展的研究[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2021，30（1）：45-49.

[22]李敏.子宮頸病變患者陰道微環(huán)境與高危型 HPV 感染及機體免疫功能的關(guān)系[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2024，22（24）：39-42.

（收稿日期：2024-10-11）（本文編輯：馬嬌）