中圖分類(lèi)號(hào)R965；R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）13-1610-07

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2025.13.10

Mechanisms of paeoniflorin in treating hyperprolactinemia based on gut microbiota and metabolomics LIN Bingqi2，WEI Yuanyi2，YI Yun’，WANG Chunxia’（1.Dept. of Pharmacy，Nanfang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510080，China;2.Dept.of Pharmacy，Women and Children’s Medical Center Affiliated to Guangzhou Medical University，Guangzhou 510623，China）

ABSTRACTOBJECTIVETo investigate the mechanismsof paeoniflorin（PF） inanti-hyperprolactinemia（HPRL）.METHODS Twenty-four female SD rats were divided into blank control group （intragastric administration of 5% gum arabic solution）， olanzapine group （model group，intragastric administration of 5mg/kg olanzapine suspension），and PF group （intragastric administration of 5mg/kg olanzapine suspension，followed by gavaging with 50mg/kg PF solution 2 hours later）with 8rats in each group.Onceaday，continuouslymodel/administeruntil the plasma prolactin （PRL）levels intheolanzapine group were twiceas highasthoseintheblankcontrolgroup.PRLlevelswere measured.Techangesingut microbiotaofrats wereanalyzed，including assessments of α -diversity（Simpson，Chaol，and Shannon indexes）， β -diversity，species composition analysis （at the phylum and genuslevels），andmicrobiomeLEfSeanalysis.Fecaluntargetedmetabolomics technologywasemployed toanalyzethefectsof PFonthefecalmetabolomcsofrats，inludngmultivariatestatisticalanalysis，sreningofdierentialmetabolites，andpathway enrichment analysis.Spearmancoelationanalysiswas performedtoexaminethecorrelations between diferentialmicroiotaand differential fecal metabolites.RESULTSPF significantlyreduced serum PRLlevelsofrats inolanzapinegroup ?Plt;0.05 ）.16S rRNA sequencing revealed that PF improved the α -diversity and β -diversity of gut microbiota in HPRL rats （Plt;0.05 ），restoring themtolevelssimilartotheblankcontrolgroup.Atthephylumlevel，PFsignificantlyrducedtherelativeabundanceofiicutes

andDesulfobacterota，while increasingtherelativeabundance of Verrucomicrobiota in HPRL rats（all Plt;0.05 ）.At the genus level，PF reversed the relative abundance of Desulfovibrio， Allobaculum，andPrevotellaceae_NK3B31_group，etc（all Plt; 0.05）．The resultsof LEfSe analysis revealed that PF significantlyenriched microbial taxa such asActinobacteriota，

Staphylococcales，Corynebacteriales，etc （all Plt;0.05 ）.Metabolomics analysis identified 51 differential metabolites，with key metabolicpathwaysenrichedinsteroidhormonebiosynthesis，prostatecancerovariansteroidogenesis，etc.Correlationanalysis showedthattherelativeabundanceofgut microbiotasuchasDesulfovibrioandAerococcus wassignificantlycorrelated withthe levels of steroid hormone metabolites such as tetrahydrocortisol and adrenosterone （ ?Plt;0.05 .CONCLUSIONSPFalleviates PRL bymodulatinggut microbiota structureinHPRLrats（including significantlyreducing therelativeabundanceof Desulfovibrio， AllbaculumandAerococcus，aswellassignificantlyincreasing therelativeabundanceofRuminococcceae_UBA1819and Muribaculum），and regulating steroid hormone pathways，then exerting its anti-HPRL effect.

KEYWORDSpaeoniflorin；hyperprolactinemia；metabolomics；gut microbiota；prolactin；diferential meta-bolites

高泌乳素血癥（hyperprolactinemia，HPRL）是一種常見(jiàn)的危害女性生殖健康的內(nèi)分泌疾病，可引起異常泌乳、排卵抑制、月經(jīng)紊亂和骨質(zhì)疏松等[1-2]。臨床把血清泌乳素（prolactin，PRL）水平 gt;25ng/mL 定義為HPRL[目前，臨床治療HPRL的一線藥物主要包括多巴胺D2受體（dopamineD2receptor，DRD2）激動(dòng)劑（如溴隱亭及卡麥角林），但仍有高達(dá) 25% 的HPRL患者對(duì)溴隱亭存在抵抗，導(dǎo)致溴隱亭療效不佳[3]。

芍藥甘草湯源自《傷寒論》，是調(diào)理肝脾的著名古方，由白芍和甘草組成，主治津液受損、陰血不足、筋脈失濡所致諸證。國(guó)內(nèi)外專家常用該方加減治療HPRL，療效較好，副作用小[4-5]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，芍藥昔是加味芍藥甘草湯中含量最高的有效成分，可以通過(guò)調(diào)節(jié)DRD2以外的靶點(diǎn)來(lái)降低PRL水平，從而改善抗精神病藥物奧氮平引起的HPRL，但具體機(jī)制尚不明確[]。近年來(lái)有研究表明，腸道菌群失調(diào)與HPRL及相關(guān)內(nèi)分泌代謝紊亂的發(fā)生密切相關(guān)；此外，長(zhǎng)期使用奧氮平可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，并進(jìn)一步促進(jìn)HPRL[，而芍藥苷可調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu)和功能9，提示腸道菌群可能是芍藥昔治療HPRL的潛在靶點(diǎn)?；诖?，本研究采用奧氮平誘導(dǎo)構(gòu)建大鼠HPRL模型，結(jié)合腸道菌群16SrRNA高通量測(cè)序技術(shù)和糞便非靶向代謝組學(xué)技術(shù)，探討芍藥昔治療HPRL的潛在藥效機(jī)制，以期為HPRL的治療提供新策略。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用主要儀器包括PowerPacBasic型電泳儀 ?100^TM ThermalCycler型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國(guó)Bio-Rad公司），Spark型多功能酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司），QExactiveHF-X型質(zhì)譜儀、VanquishTM型超高效液相色譜儀、Qubit3.0型熒光定量?jī)x（美國(guó)ThermoFisherScientific公司），D3024R型低溫離心機(jī)（美國(guó)Scilogex公司），IlluminaMiseq型高通量測(cè)序儀（廣州基迪奧生物科技有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

芍藥苷（原料藥，貨號(hào)P815485，純度 ?98% ）、奧氮平（原料藥，貨號(hào)0830525，純度 98% ）均購(gòu)自上海麥克林生化科技股份有限公司；大鼠PRL酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（貨號(hào)E-EL-R3006）購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司；BCA蛋白定量試劑盒（貨號(hào)P0010）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；HiPureSoilDNA提取試劑盒（貨號(hào)D3143B）購(gòu)自廣州美基生物科技有限公司； 5% 阿拉伯膠（貨號(hào)MB1728）購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司；IIluminaDNA建庫(kù)試劑盒（貨號(hào)13577ES24）購(gòu)自上海翌圣生物科技有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雌性SD大鼠24只，體重 180～200g ，購(gòu)自珠海百試通生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2020-0051。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，環(huán)境溫度為 ，相對(duì)濕度為50%～60% ，遵循 12h 光照 黑暗的晝夜規(guī)律，使動(dòng)物自由攝食和飲水，以標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料喂養(yǎng)。所有實(shí)驗(yàn)符合南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的規(guī)定和要求，倫理號(hào)為IACUC-LAC-20240508-005。

2 方法

2.1 溶液的配制

芍藥苷溶液的制備：精密稱取芍藥苷 1.0g ，加水定容至 100mL ，即得。

奧氮平混懸液的制備：精密稱取奧氮平原料藥 100mg 與阿拉伯膠粉末 5g ，采用等量遞加法混勻后，加水適量研磨至形成均質(zhì)混懸液，再用水定容至 100mL ，即得。

2.2 分組、造模與給藥

基于本課題組前期藥效學(xué)研究結(jié)果， 50mg/kg 芍藥苷可顯著改善 5mg/kg 奧氮平誘導(dǎo)的HPRL[]，故本研究采用 50mg/kg 芍藥苷、 .5mg/kg 奧氮平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

適應(yīng)性飼養(yǎng)后，將24只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、奧氮平組（即模型組）芍藥苷組，每組8只。干預(yù)方案如下：每天上午9：00，空白對(duì)照組大鼠灌胃等體積 5% 阿拉伯膠溶液，奧氮平組和芍藥苷組大鼠灌胃奧氮平混懸液5mg/kg ；同一天上午11：00，空白對(duì)照組和奧氮平組大鼠灌胃等體積水，芍藥苷組大鼠灌胃芍藥苷溶液50mg/kg 。當(dāng)奧氮平組大鼠血清PRL水平高于空白對(duì)照組2倍時(shí)，認(rèn)為HPRL大鼠模型誘導(dǎo)成功[1，10]。

2.3 大鼠血漿中PRL水平測(cè)定

采用ELISA法測(cè)定。末次給藥后，將大鼠麻醉（腹腔注射戊巴比妥鈉），收集其腹主動(dòng)脈血 5mL ，置于抗凝管中，在 4^°C 下以 3000r/min 離心 10min ，分離血漿，使用酶標(biāo)儀于 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)血漿中PRL水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2.4大鼠腸道菌群分析

2.4.1樣本采集與DNA提取

末次給藥后，隨機(jī)選擇每組6只大鼠，輕擠其尾巴根部取糞便，置于無(wú)菌凍存管中，經(jīng)液氮速凍后于 -80^°C 下保存。取上述糞便樣品，采用DNA試劑盒提取腸道菌群DNA，經(jīng) 2% 瓊脂糖凝膠電泳分析測(cè)定DNA純度。

2.4.2PCR擴(kuò)增、文庫(kù)構(gòu)建及高通量測(cè)序

以所提DNA作為模板，擴(kuò)增16SrRNA基因的 V3+ V4區(qū)。V3上游引物序列為 5^′ -ACTCCTACGGGNGGC-WGCAG- ?3^′ ，V4下游引物序列為 5^′ -GGACTACHVG-GGTATCTAAT- ?3^′ 。產(chǎn)物經(jīng)純化、定量后，使用IlluminaDNA建庫(kù)試劑盒構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)，并進(jìn)行高通量測(cè)序分析。測(cè)序分析由廣州基迪奧生物科技有限公司完成。

2.4.3 生物信息學(xué)分析

采用R4.2.3軟件對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行腸道菌群的 ∝ 多樣性、β多樣性、物種組成（門(mén)/屬水平）微生物組學(xué)LEfSe分析。其中， ∝ 多樣性以 Simpson、Chao1、Shannon指數(shù)為檢測(cè)指標(biāo)， β 多樣性采用主坐標(biāo)分析（principalco-ordinatesanalysis，PCoA），物種組成以相對(duì)豐度作為檢測(cè)指標(biāo)，以線性判別分析（lineardiscriminantanalysis，LDA）效應(yīng)值（LDA閾值為 2，Plt;0.05 篩選各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的菌群標(biāo)志物[]。

2.5 糞便非靶向代謝組學(xué)分析

2.5.1 樣品制備

取“2.4.1”項(xiàng)下凍存的各組大鼠的糞便樣本，稱取50mg ，置于含有 80% 甲醇 300μL 的EP管中，以液氮速凍 5min 后，在冰上融化、渦旋 30s ，再超聲 6min ；于 4^°C 下以 5000r/min 離心 1min ，取上清液至另一EP管中，凍干成粉；取上述凍干粉適量，以 10% 甲醇溶液溶解，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

2.5.2 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱為Hypersil Gold C₁₈（100mm×2.1mm，1.9 μm） ；流動(dòng)相A為水 .25mmol/L 乙酸銨 .25mmol/L 氨水混合溶液（體積比為 94：5：1 ，流動(dòng)相B為乙腈，進(jìn)行梯度洗脫（ 0～0.5min 95%B ： 0.5～7min 95%B?65%B 7～9min ， 65%B?40%B . 9～9.1min ， 40%B?95%B 9.1～12min，95%B） ；柱溫為 25^°C ;流速為 0.5mL/min 進(jìn)樣量為 2μL 。

采用電噴霧離子源進(jìn)行正負(fù)離子掃描，掃描范圍為正 n/z 100～1 500 ；正離子模式噴霧電壓為 3.2kV ，負(fù)離子模式噴霧電壓為 -3.0kV ；包覆氣壓力為40arb；輔助氣流壓力為 10arb ；毛細(xì)管溫度為 320^°C ;二級(jí)掃描為數(shù)據(jù)依賴性掃描。

2.5.3 代謝組學(xué)分析

取\"2.5.1\"項(xiàng)下樣品溶液，按\"2.5.2\"項(xiàng)下條件進(jìn)樣分析，所得質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過(guò)CompoundDiscoverer3.1軟件進(jìn)行處理，并進(jìn)行偏最小二乘法-判別分析（partialleastsquares-discriminantanalysis，PLS-DA）和正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least squares discrimi-nantanalysis，OPLS-DA），以變量投影重要性（variableimportance in projection，VIP） gt;1 且 Plt;0.05 為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異代謝物[12]。

2.5.4 通路富集分析

對(duì)“2.5.3”項(xiàng)下所得差異代謝物進(jìn)行京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）代謝通路富集分析，以 Plt;0.05 表示通路顯著富集。

2.6糞便差異代謝物與差異菌群的相關(guān)性分析

采用R4.2.3軟件對(duì)大鼠腸道差異菌群與類(lèi)固醇差異代謝產(chǎn)物進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，探討腸道微生物與其代謝物之間的相關(guān)性，結(jié)果以熱圖呈現(xiàn)。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以 表示，多組間比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用Tukey事后檢驗(yàn)；不滿足正態(tài)分布的計(jì)量資料以 M（P_²⁵，P_⁷⁵） 表示，多組間比較采用非參數(shù)Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)，進(jìn)一步兩兩比較采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05 。

3結(jié)果

3.1芍藥苷對(duì)HPRL大鼠血清PRL水平的影響

與空白對(duì)照組[ （20.42±1.38）ng/mL] 比較，奧氮平組大鼠血清PRL水平[ （53.54±4.71）ng/mL] 顯著升高C Plt;0.05 ），表明造模成功。與奧氮平組比較，芍藥苷組大鼠血清PRL水平 [（24.66±3.15）ng/mL] 顯著降低0 （Plt;0.05 。

3.2芍藥苷對(duì)HPRL大鼠腸道菌群的影響

3.2.1 腸道菌群多樣性分析結(jié)果

∝ 多樣性分析結(jié)果（圖 1A～C 顯示，奧氮平組大鼠Chao1、Simpson、Shannon指數(shù)均顯著高于空白對(duì)照組C （Plt;0.05 ）；芍藥苷組大鼠上述指數(shù)均顯著低于奧氮平組 （Plt;0.05 ）。PCoA結(jié)果（圖1D）顯示，與空白對(duì)照組比較，奧氮平組大鼠的腸道菌群分布發(fā)生了明顯偏移（ Plt; 0.05）；而芍藥苷組大鼠的腸道菌群分布更趨向于與空白對(duì)照組一致 （Pgt;0.05 ）。上述結(jié)果表明，芍藥苷的干預(yù)能夠恢復(fù)奧氮平所致HPRL大鼠的腸道菌群失調(diào)，使其∝ 多樣性和β多樣性向空白對(duì)照組趨近。

圖1芍藥苷對(duì)HPRL大鼠腸道菌群 α_α，β 多樣性的影響

3.2.2 腸道菌群物種組成分析結(jié)果

在門(mén)水平（圖2A）上，與空白對(duì)照組比較，奧氮平組大鼠厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、脫硫菌門(mén)（Desulfobacterota）的相對(duì)豐度均顯著升高，而疣微菌門(mén)（Verrucomicro-biota）的相對(duì)豐度顯著降低 （Plt;0.05） ；與奧氮平組比較，芍藥苷組大鼠厚壁菌門(mén)、脫硫菌門(mén)的相對(duì)豐度均顯著降低，而疣微菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著升高 （Plt;0.05） 。在屬水平（圖2B）上，與空白對(duì)照組比較，奧氮平組脫硫弧菌屬（Desulfovibrio）異桿菌屬（Allobaculum）、普雷沃氏菌屬NK3B31組（Prevotellaceae_NK3B31_group）、氣球菌屬（Aerococcus）的相對(duì)豐度均顯著升高，而瘤胃球菌科UBA1819組（Ruminococcaceae_UBA1819）、鼠腸桿菌屬（Muribaculum）的相對(duì)豐度均顯著降低 （Plt;0.05） ;與奧氮平組比較，芍藥苷組脫硫弧菌屬、異桿菌屬、普雷沃氏菌屬NK3B31組、氣球菌屬的相對(duì)豐度均顯著降低，而瘤胃球菌科UBA1819組與鼠腸桿菌屬的相對(duì)豐度均顯著升高 ?Plt;0.05 。

3.2.3 腸道菌群微生物組學(xué)LEfSe分析結(jié)果

LDA分布直方圖（圖3）顯示，空白對(duì)照組可顯著富集擬桿菌門(mén)（Bacteroidota）、疣微菌綱（Verrucomicrobia-les）、單球菌目（Monoglobales）等菌群（ Plt;0.05 ；奧氮平組可顯著富集棒狀厚壁菌門(mén)、芽孢桿菌綱（Bacilli）、乳酸桿菌目（Lactobacillales）等菌群 （Plt;0.05） ；芍藥苷組芍藥苷可顯著富集放線菌門(mén)（Actinobacteriota）、葡萄球菌目（Staphylococcales）棒狀桿菌目（Corynebacteriales）等菌群 （Plt;0.05 。

3.3芍藥苷對(duì)HPRL大鼠糞便代謝組學(xué)的影響

3.3.1各組間糞便代謝物的多元統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

PLS-DA得分圖（圖4A）顯示，在正、負(fù)離子混合模式下，空白對(duì)照組、奧氮平組和芍藥苷組之間呈現(xiàn)良好的分離效果；OPLS-DA結(jié)果（圖 4B{～E} 顯示，空白對(duì)照組與奧氮平組的模型參數(shù)為 R²Y=0.984，Q²=0.726 ，奧氮平組與芍藥苷組的模型參數(shù)為 R²Y=0.992 、 Q²= 0.784；經(jīng)過(guò)200次置換檢驗(yàn)驗(yàn)證，正、負(fù)離子混合模式下的 R²"和 Q²"值均低于原始模型值（空白對(duì)照組與奧氮平組的 R²=0.940，Q²=0 ;奧氮平組與芍藥苷組的 R²=0.970 Q²=0.080 ），表明模型未出現(xiàn)過(guò)擬合且預(yù)測(cè)能力良好[13]。以上表明，所構(gòu)建的模型具有較高的穩(wěn)定性和可靠性，能夠有效區(qū)分不同組別間的代謝物差異。根據(jù)多元統(tǒng)計(jì)結(jié)果，以 Plt;0.05 且 ΔVIPgt;1 為標(biāo)準(zhǔn)篩選得到51個(gè)潛在的差異代謝物。與空白對(duì)照組比較，奧氮平組有32個(gè)差異代謝物水平顯著降低，19個(gè)差異代謝物水平顯著升高；與奧氮平組比較，芍藥苷顯著回調(diào)了以上差異代謝物的水平。差異代謝物如雄烯二酮（androstendione）、反式脫氫表雄酮（trans-dehydroandrosterone） ，11β，21 -二羥基 ?5β -孕酮-3，20-二酮（"^{11β，21}"-dihydroxy- .5β -pregnane-3，20-dione）、四氫皮質(zhì)醇（tetrahydrocortisol）、腎上腺甾酮（adrenosterone）、雌激素酮葡糖苷酸（estrone glucuro-nide）的二級(jí)質(zhì)譜圖見(jiàn)圖5（僅展示6個(gè)代表性的差異代謝物）。

I：空白對(duì)照組;Ⅱ：奧氮平組;Ⅲ：芍藥苷組。

3.3.2差異代謝物的KEGG通路富集分析

KEGG通路富集分析結(jié)果（圖6）顯示，差異代謝物顯著聚集的前5個(gè)信號(hào)通路為類(lèi)固醇激素生物合成（steroidhormonebiosynthesis）、前列腺癌（prostatecancer）、卵巢類(lèi)固醇生成（ovariansteroidogenesis）、癌癥相關(guān)信號(hào)通路（pathwaysincancer）、羥甲基戊二酰輔酶A（hy-droxymethylglutarylcoenzymeA，HMG-CoA）還原酶抑制劑（HMG-CoAreductaseinhibitors），其中差異代謝物對(duì)類(lèi)固醇激素生物合成通路的影響最為顯著。上述提示，芍藥苷可能通過(guò)調(diào)控類(lèi)固醇激素的生物合成及其相關(guān)代謝途徑，發(fā)揮對(duì)HPRL的干預(yù)作用。

3.4糞便差異代謝物與差異菌群的相關(guān)性分析

由圖7可知，脫硫弧菌屬、氣球菌屬的相對(duì)豐度與11β，21-二羥基-5β-孕酮-3，20-二酮、四氫皮質(zhì)醇、腎上腺甾酮、雌激素酮葡糖苷酸含量呈顯著正相關(guān)，與反式脫氫雄酮、雄烯二酮含量呈顯著負(fù)相關(guān) （Plt;0.05） 。異桿菌屬的相對(duì)豐度與腎上腺甾酮含量呈顯著正相關(guān) （Plt;0.05） 。瘤胃球菌科UBA1819組、鼠腸桿菌屬的相對(duì)豐度與四氫皮質(zhì)醇含量呈顯著負(fù)相關(guān) （Plt;0.05） 。上述結(jié)果表明，特定菌屬與類(lèi)固醇激素代謝物間存在顯著相關(guān)性，這為闡明腸道微生物群調(diào)控類(lèi)固醇激素代謝的機(jī)制提供了依據(jù)。

I：空白對(duì)照組;ⅡI：奧氮平組;ⅡI：芍藥苷組。

4討論

腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的改變會(huì)影響機(jī)體的代謝表型，其可通過(guò)發(fā)酵膳食成分、生成代謝物（如短鏈脂肪酸、膽汁酸、神經(jīng)遞質(zhì)前體、類(lèi)固醇代謝物等）、調(diào)節(jié)宿主代謝酶活性等多種方式，直接或間接調(diào)控包括內(nèi)分泌穩(wěn)態(tài)在內(nèi)的多種生理與病理過(guò)程[714]。代謝組學(xué)分析能夠揭示腸道微生物代謝物對(duì)機(jī)體的影響，明確宿主-腸道微生物群的代謝相互作用[15]。因此，腸道菌群分析聯(lián)合代謝組學(xué)技術(shù)可以揭示菌群結(jié)構(gòu)變化如何通過(guò)調(diào)控代謝物水平來(lái)參與疾病的發(fā)生發(fā)展[。越來(lái)越多的證據(jù)表明，腸道菌群失調(diào)與包括HPRL在內(nèi)的多種內(nèi)分泌代謝疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-8]。芍藥苷是一種天然植物成分，具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等多種生理活性[7-18]。本研究通過(guò)構(gòu)建奧氮平誘導(dǎo)的HPRL大鼠模型，結(jié)合16SrRNA高通量測(cè)序及非靶向代謝組學(xué)技術(shù)，初步探討了芍藥苷改善HPRL的潛在分子機(jī)制。

本研究結(jié)果顯示，奧氮平可使大鼠血漿PRL水平顯著升高；經(jīng)芍藥昔干預(yù)后，大鼠血漿PRL水平顯著降低，證實(shí)該成分具有降PRL分泌的作用。腸道菌群是內(nèi)分泌與代謝免疫調(diào)控的關(guān)鍵參與者[0]。本研究通過(guò)16SrRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)，HPRL模型大鼠腸道菌群的 ∝ 多樣性和β多樣性均發(fā)生顯著改變；同時(shí)，奧氮平誘導(dǎo)的HPRL模型大鼠厚壁菌門(mén)、脫硫菌門(mén)的相對(duì)豐度均顯著升高，而疣微菌門(mén)的相對(duì)豐度顯著降低；經(jīng)芍藥昔干預(yù)后，上述菌群的相對(duì)豐度均顯著回調(diào)，提示芍藥昔能夠逆轉(zhuǎn)奧氮平誘導(dǎo)的HPRL模型大鼠的腸道菌群失調(diào)。微生物組學(xué)LEfSe分析進(jìn)一步揭示，芍藥昔的干預(yù)顯著富集了放線菌門(mén)、葡萄球菌目、棒狀桿菌目等有益菌群，提示上述菌群的變化可能與芍藥昔的降PRL作用密切相關(guān)。

本研究采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)分析了芍藥昔降低PRL的相關(guān)代謝效應(yīng)，探索其對(duì)HPRL模型大鼠糞便代謝物的調(diào)控作用。PLS-DA與OPLS-DA結(jié)果顯示，各組大鼠的代謝譜能夠明顯區(qū)分，且未發(fā)生過(guò)擬合，證明所建模型有效。本研究共篩選出了51個(gè)潛在差異代謝物，這些代謝物富集的代謝通路主要包括類(lèi)固醇激素生物合成、前列腺癌、卵巢類(lèi)固醇生成等，其中類(lèi)固醇激素生物合成是最主要的代謝途徑。諸多研究表明，類(lèi)固醇激素與PRL的分泌調(diào)節(jié)密切相關(guān)：雌激素可作用于垂體前葉雌激素受體刺激PRL的分泌[9；孕激素通過(guò)下丘腦和垂體膜上的孕激素受體抑制PRL的分泌[2；在應(yīng)激條件下，皮質(zhì)醇的增加能夠通過(guò)調(diào)節(jié)垂體的分泌功能，從而抑制PRL的分泌[21]。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，脫硫弧菌屬、氣球菌屬等菌群的相對(duì)豐度與類(lèi)固醇激素代謝物（如四氫皮質(zhì)醇、腎上腺甾酮）含量呈顯著正相關(guān)，而瘤胃球菌科UBA1819組、鼠腸桿菌屬等菌群的相對(duì)豐度與四氫皮質(zhì)醇含量呈顯著負(fù)相關(guān)。這一結(jié)果提示，芍藥昔可能通過(guò)調(diào)控腸道菌群、改變腸道菌群相關(guān)的代謝物含量來(lái)發(fā)揮降低PRL水平的作用。后續(xù)本研究團(tuán)隊(duì)將使用抗菌藥物干預(yù)及糞菌移植實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確腸道菌群與PRL之間的關(guān)系，以期為芍藥昔治療HPRL的具體機(jī)制提供理論依據(jù)。

綜上所述，芍藥苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)HPRL大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)（包括顯著降低脫硫弧菌屬、異桿菌屬、氣球菌屬的相對(duì)豐度，顯著上調(diào)瘤胃球菌科UBA1819組、鼠腸桿菌屬的相對(duì)豐度）調(diào)控類(lèi)固醇激素生物合成代謝通路來(lái)降低PRL水平，從而發(fā)揮抗HPRL的作用。

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（收稿日期：2025-03-11 修回日期：2025-06-27）