中圖分類號:S853.7 文獻標識碼:A文章編號:1673-1085(2025)05-0048-06
濕熱泄瀉是中醫(yī)泄瀉當中的一種類型,指感受濕熱之邪,傷及腸胃,傳化失常,水濕下注大腸而發(fā)生的腹瀉病證,具體癥狀為泄瀉腹痛,瀉下急迫或瀉而不爽,糞便色黃臭穢,肛門灼熱[1-3]。家禽濕熱泄瀉是最為常見的腹瀉性疾病,嚴重影響家禽健康,降低生產(chǎn)性能,影響飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生,可導致飼料轉(zhuǎn)化率降低,成活率下降,成為制約家禽業(yè)生產(chǎn)效益的重要因素[4-5]。在濕熱泄瀉的防控上,目前養(yǎng)殖者普遍使用抗生素等西藥治療,但抗生素等化藥的長期使用,也帶來了獸藥殘留難以控制、細菌產(chǎn)生耐藥性等問題,進而對食品安全和人類健康造成危害[。我國傳統(tǒng)中獸藥有幾千年的歷史,不僅積累了豐富的臨床經(jīng)驗,也形成了獨特的中獸藥理論體系與診療方法,具有顯著的臨床療效。同時,中獸藥以其藥源的天然性、功效的整體性、低毒副作用、低殘留、不易導致病原微生物產(chǎn)生耐藥性等特點,近年來贏得了國內(nèi)獸藥界和畜牧界的廣泛認同和歡迎。在中獸醫(yī)濕熱泄瀉研究中,本試驗采用SPF雛雞,經(jīng)口腔灌服大腸桿菌CVCC1558株,成功構(gòu)建了雞濕熱泄瀉病證模型。該方法建立的病證模型完全符合中獸醫(yī)濕熱泄瀉證的病因、病位、病機和證候特點,臨床癥狀明顯,剖檢特征典型,病程時間長,模型穩(wěn)定,重復性好[。為研發(fā)出防治濕熱泄瀉的安全高效中獸藥產(chǎn)品,利用成熟的雞濕熱泄瀉病證模型構(gòu)建方法,選用葛根芩連湯、白頭翁湯、加減蒿芩清膽湯3種經(jīng)典方劑為試驗藥物,進行了臨床藥效試驗,以篩選出有效的中藥組方,用于家禽。
1材料與方法
1.1試驗材料
1.1.1中藥方劑葛根芩連湯:葛根 15g ,黃芩9g ,黃連 9g ,甘草 6g 。白頭翁湯:白頭翁 15g 黃柏 12g ,黃連 6g ,秦皮 12gc ,加減蒿芩清膽湯:青蒿 4.5g ,淡竹茹 gg ,仙半夏 4.5g ,赤茯苓 gg 滑石 6g ,黃芩 4.5g ,生枳殼 4.5g ,陳皮 4.5g ,金銀花 3g ,馬齒莧 6g ,甘草 1g 。各中藥飲片,均購自濟南百味堂中藥飲片有限公司。
1.1.2試驗動物30日齡 SPF雞,由山東昊泰實驗動物有限公司提供。
1.1.3大腸埃希菌菌株菌種保藏編號CVCC1558,購自中國獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。
1.1.4儀器試劑顯微鏡,日本奧林巴斯公司;普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,北京奧博星生物技術(shù)有限責任公司,批號20221103。血細胞計數(shù)板、采血管、
沙利吸血管,均購自濟南盛偉生物技術(shù)有限公司。
軟頭數(shù)字溫度計,精度 ,丹麥古氏集團。
1.2試驗方法
1.2.1試驗分組共分為5組,每組10只SPF雞,其中3個藥物試驗組、1個攻毒對照組和1個陰性對照組。
1.2.2中藥液的制備將以上處方量的3種中藥方劑,分別加水煎煮兩次,合并兩次煎液,濃縮定容至 200mL ,加入 1% 苯甲酸鈉防腐。
1.2.3大腸埃希菌菌液培養(yǎng)取保存的菌種0.2mL ,接種于 50mL 營養(yǎng)肉湯中, 搖床培養(yǎng)18h ,測定細菌含量為 1.125×109 CFU/mL,置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2.4雞濕熱瀉泄模型的構(gòu)建按照前期模型構(gòu)建方法,每只雞胃管灌服上述大腸埃希菌新鮮肉湯培養(yǎng)液 4mL ,陰性對照組不攻毒。
1.2.5用藥方法與劑量攻毒6h后,各藥物試驗組開始用藥,經(jīng)口腔灌服藥液,每天上、下午各灌服1次,連用 5d ,各組用藥情況及劑量見表1。
1.2.6臨床表現(xiàn)每天認真觀察雞群精神癥狀,若出現(xiàn)羽毛逆立、縮頭閉眼、呆立等癥狀,均判為精神沉郁。若精神無明顯異常表現(xiàn),神情活潑、采食飲水正常,均判為精神正常。每天分別統(tǒng)計各組精神沉郁、精神正常的雛雞數(shù)量,并計算各組精神正常雞占總雞數(shù)的百分比。
1.2.7糞便觀察每天觀察各組雞群的糞便,對各組糞便狀況分級計分評定,共分4級:水樣糞便的,判為重度腹瀉,記作3分;糞便黃色稀薄,不成形的,判為中度腹瀉,記為2分;糞便黃色稀軟,基本成形的,判為輕度腹瀉,記作1分;糞便黑灰色,成形,略有白色尿酸鹽附著的,判為糞便正常,記作0分。
1.2.8體溫測定使用電子測溫計測量直腸溫度。攻毒前測量體溫一次,記錄基礎體溫。攻毒后,每天相同時間測量體溫并記錄,直至試驗結(jié)束。
1.2.9體重測定攻毒前,稱量體重一次,記錄初始體重;用藥結(jié)束時,稱重一次;試驗結(jié)束時,稱重一次,計算增重率。
增重率 Σ=Σ (終末體重-初始體重)/初始體重×100% 1.2.10血液學檢查試驗結(jié)束時,每只雞翅靜脈采血,置EDTA-K2抗凝采血管中。采用計數(shù)板顯微鏡計數(shù)法,進行紅細胞計數(shù)。
紅細胞計數(shù):用 5mL 吸管吸取紅細胞稀釋液3.98mL 置于試管中。用沙利吸血管吸取全血樣品至 20μL 刻度處。擦去吸管外壁粘附的血液,將血液吹入試管底部,再吹吸數(shù)次,以洗凈沙利管內(nèi)粘附的血細胞,然后將試管顛倒混合數(shù)次。用毛細吸管吸取已稀釋好的血液,放于計數(shù)室與蓋玻片接觸處,讓血液稀釋液自然流入計數(shù)室中靜置 1~2min 。先用低倍鏡,光線要稍暗些,找到計數(shù)室后,把中央的大方格置于視野之中,然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在中央大方格內(nèi)選擇四角與最中間的五個中方格,數(shù)取五個中方格內(nèi)的紅細胞總數(shù),按公式 X/80×400×200×10×106 計算出1L血液中紅細胞個數(shù),其中X為五個中方格內(nèi)的紅細胞總數(shù)。
白細胞計數(shù):將一小滴血液置于載玻片上,將推片與載玻片形成 30° 夾角,制成分布均勻的薄血片,經(jīng)瑞氏染色后,置顯微鏡下觀察。在油鏡下,從左向右選取6個不同的視野,保存圖片于計算機中,將保存的圖片于imageJ軟件中進行紅細胞和白細胞計數(shù),計算白細胞與紅細胞的百分比。將紅細胞總數(shù) × 白細胞與紅細胞的百分比,間接計算出試驗雞血液中白細胞的數(shù)量。
1.2.11剖檢試驗結(jié)束時,試驗雞全部頸部放血處死,剖檢,記錄病變。
2試驗結(jié)果
2.1雞群精神狀況
攻毒后次日,攻毒各雞群均表現(xiàn)為扎堆,部分雞出現(xiàn)明顯的縮頭、閉眼、羽毛逆立、呆立等精神沉郁癥狀,整個試驗期各組均未出現(xiàn)死亡。A組(葛根芩連湯)、B組(白頭翁湯)、C組(加減蒿芩清膽湯)3個藥物組,雞精神狀態(tài)明顯好于陽性對照組,差異顯著( Plt;0.05 );陰性對照組精神均正常,結(jié)果見表2。
2.2腹瀉情況
攻毒后次日發(fā)現(xiàn),攻毒各雞群均表現(xiàn)出腹瀉癥狀,拉黃色稀糞,每天各組糞便情況及腹瀉程度計分,統(tǒng)計結(jié)果見表3、4。試驗表明,各藥物組從用藥第4天開始起,腹瀉程度較陽性對照組癥狀變輕;從平均腹瀉計分情況分析,B組、C組與陽性對照組相比差異顯著( Plt;0.05 )。
2.3體溫測定結(jié)果
攻毒前各組的基礎體溫(0d)均無差異。攻毒1d后,與陰性對照相比,各攻毒組體溫均升高。整個試驗期間總的平均體溫,A組、B組、C組顯著低于陽性對照組( Plt;0.05 ),與陰性對照組間無顯著差異( Pgt;0.05 );而陽性對照組總的平均體溫,顯著高于陰性對照組( Plt;0.05 )。試驗結(jié)果表明,3個藥物方劑均具有較好的清熱效果。攻毒后不同天數(shù)各組平均體溫見表5。
2.4增重情況
各組在攻毒后第6天、第9天稱重及增重率,詳見表6。結(jié)果表明,B組、C組增重率高于陽性對照組,C組第9天時增重率甚至超過陰性對照組。
2.5血液學檢查紅細胞與白細胞情況
紅細胞和白細胞計數(shù)結(jié)果見表7。結(jié)果表明,各組紅細胞計數(shù)無明顯差異。3個藥物組白細胞數(shù)少于陽性對照組,高于陰性對照組。白細胞數(shù)量增加一般為細菌性炎癥的表現(xiàn),表明各藥物組炎癥較陽性對照組為輕。
2.6 剖檢結(jié)果
陽性對照組個別雛雞具有輕微心包炎、肝周炎病變;藥物組均未出現(xiàn)心包炎、肝周炎、腹膜炎病變。陽性對照組和3個藥物組均全部表現(xiàn)腸炎病變,腸黏膜脫落,腸壁變薄,內(nèi)容物稀薄、色黃;但陽性對照組腸黏膜脫落最嚴重,腸壁更薄,有2只雛雞腸黏膜出血;陰性對照組無明顯病變。
3討論
從試驗結(jié)果來看,各藥物組在精神狀況、體溫變化、腹瀉程度、白細胞計數(shù)、增重率、病理變化方面,與陽性對照組相比,各項指標均有較好表現(xiàn),表明葛根芩連湯、白頭翁湯、加減蒿芩清膽湯均對雞濕熱泄瀉具有較好的防治效果??紤]到畜牧業(yè)經(jīng)濟效益中,增重率是非常重要的一項指標,因此可優(yōu)選加減蒿芩清膽湯。
葛根芩連湯、白頭翁湯皆是中醫(yī)中最為常用的治療濕熱泄瀉的經(jīng)典方[8-9],都可用于熱性腹瀉,癥見糞便黃、黏稠而臭穢。但葛根芩連湯功效為解表清里,主要用于外邪由表入里、熱入胃腸、邪迫津液下泄而形成的一種熱瀉。白頭翁湯功效為清熱解毒、涼血止痢,更側(cè)重于主治濕熱壅塞于腸道與熱毒熏灼腸胃氣血所致的熱毒血痢[10]。兩個方劑雖都可用于治療濕熱泄瀉,但應用時要有所偏重。
蒿芩清膽湯具有和解少陽、清膽利濕、和胃化痰之功效,是主治少陽濕熱證的名方[1]。但是本方用于治療因外感濕熱邪氣而出現(xiàn)嘔吐、泄瀉、大便黃臭、舌苔黃膩的濕熱泄瀉,也具有很好的效果[12]。機體感受了濕熱邪氣,濕遏熱郁,則三焦氣機不暢,手少陽三焦經(jīng)是氣機升降之樞,足少陽膽經(jīng)是氣機出入之樞,可相互影響。三焦氣機不暢,就會導致少陽膽氣郁化火,出現(xiàn)膽熱;膽火熾盛,必然橫逆犯胃,木郁土壅,使脾胃的升清降濁功能失常,致津液不能正常敷布,凝聚而成痰濕,水濕下注大腸而發(fā)生泄瀉,胃氣上逆則嘔。胃腸郁熱,則糞便黃臭。方中青蒿微苦微寒而芳香,輕宣透熱,芳香化濕,疏通少陽氣機,透散表邪;黃芩苦寒,清泄少陽而清半里的郁熱。兩藥合用,一透表,一清里,既能清透少陽濕熱,又能祛邪外出,和解表里。半夏、陳皮辛溫,燥濕和胃理氣。茯苓、甘草健脾益氣。枳殼配陳皮理氣行滯開郁。竹茹苦寒,清膽胃之熱,化痰止嘔?;?、赤茯苓,清熱利濕,導邪從小便而出。本方是辛開苦降與淡滲利濕共用,通過辛開苦降來燥濕降氣化痰,通過淡滲利濕使?jié)裥跋滦校环矫鎻闹薪故固禎駨脑锘?,一方面使痰濕下行從小便而出。總體來看,這個方劑具有清透少陽、分消走泄、清膽和胃、祛除濕熱之功效,對濕熱泄瀉具有很好的治療效果[13-14]。金銀花甘寒,功效為清熱解毒、疏散風熱、涼血止痢。馬齒莧酸寒,清熱解毒,涼血止痢。兩者常配伍使用,用于治熱毒血痢。蒿芩清膽湯中,加入金銀花、馬齒莧,以發(fā)揮清熱解毒、涼血止痢的作用,對濕熱泄瀉尤其是出現(xiàn)下痢膿血時,效果更佳。因原方中青黛功效也是清熱瀉火、涼血解毒,因此增加金銀花、馬齒莧后,減去了青黛。本試驗為了增強治療濕熱泄瀉的作用,以青蒿芩清膽湯為基礎方,對方劑進行了加減。
參考文獻:
[1]劉小玉,李玉娟,姜厚望,等.葉天士與薛生白治療濕熱泄瀉的用藥特色分析[J].中國中藥雜志,2018,43(8):1720-1725.
[2]左黎黎.基于古籍醫(yī)家的痢疾源流探析[D].北京:中國中醫(yī)科學院,2022.
[3]劉嘉欣,周天羽.《臨證指南醫(yī)案》痢疾辨治特色探析[J].中醫(yī)臨床研究,2022,14(32):21-24.
[4]錢恒.蛋鴨流行性腹瀉的原因及中藥治療分析[J].家禽科學,2023,45(10):67-68.
[5]劉月月,殷斌,解云輝,等.禽用中獸藥的研究與應用現(xiàn)狀[J].家禽科學,2020(11):53-58.
[6]肖軍,李進衛(wèi).中草藥微生物飼料添加劑在家禽中的作用及其應用策略[J].家禽科學,2019(7):51-56.
[7]趙增成,殷斌,劉月月,等.雞濕熱泄瀉病證模型的建立[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2024,43(3):10-14.
[8]李勝,馮志海.《傷寒論》“熱利三證”淺談[J].新中醫(yī),2018,50(12):273-274.
[9]王倩.基于《傷寒論》熱利三方醫(yī)案文獻的中藥處方用量研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學,2015.
[10]陳代奕,郭迪.葛根芩連湯證、白頭翁湯證、黃連阿膠湯證、駐車丸證異同[J].河南中醫(yī),2023,43(06):811-815.
[11]沈元良.蒿芩清膽湯方證釋義與臨證心悟[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,30(10):3562-3566.
[12]劉景源.溫病學講稿[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:233-235.
[13]董雪,王洪彬,閆昕.蒿芩清膽湯研究進展[J].中國民族民間醫(yī)藥,2022,31(7):58-61.
[14]李龍,楊馥語,譚萬初,等.蒿芩清膽湯在消化系統(tǒng)疾病中的應用及現(xiàn)代研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(21):28-30.