關(guān)鍵詞斑馬魚；胚胎；急性毒性；慢性毒性中圖分類號X174文獻標(biāo)識碼A文章編號 0517-6611（2025）08-0076-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.08.016開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

AbstractIdetaaticesofchooC），-chol（-，co， DCP），2，6-dilropl（2-C），nd-dlo-C）obfsbste-statcosueoda to studytheacuteand chronic toxicityof dichlorophenolsonzebrafish embryos.Theresultsshowedthattheacutetoxicity（96 h ）of 3，4- DCP，2，5-DCP，3，5-DCP，2，6-DCP，and 2，3-DCP on zebrafish embryos was 0.31，0.36，0.47，0.53 and ，respectively.The highest no observedeffeccoctration（NOEC）of3，4CP，2-CP，3，-DCP，26-CP，and2-CPozebrafshebrysafer32dofee was15，24，24，38 and ，respectively.The above research showed that dichlorophenols showed certain toxic effects on zebrafish embryos and embryonic development.

KeywordsZebrafish；Embryo；Acute toxicity；Chronic toxicity

隨著科技的快速發(fā)展，氯酚類化合物被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域[1-4]。在生產(chǎn)和使用的過程中，大量的氯酚類化合物通過水體和大氣傳播進入自然環(huán)境中，目前在許多地區(qū)的地下水中被頻繁檢出[5-7]。研究表明，氯酚是一類有毒的化學(xué)污染物，具有生物降解性差、毒性強等特點[2.8-9]，同時具有“致畸、致癌、致突變\"等特性[10]，可通過生活飲用水和生物鏈的累積，在人體內(nèi)逐漸富集，從而威脅到人類的生命健康[11]。目前氯酚類化合物對水生生物胚胎毒性的研究報道比較缺乏，因此開展氯酚類化合物對水生生物的生態(tài)毒理學(xué)研究十分有必要。

斑馬魚（Daniorerio）是水生毒性試驗最常見的模式生物，近年來斑馬魚胚胎憑借生物樣本大、易獲取、不受動物倫理的限制、胚胎透明且發(fā)育快、基因背景明確且與人體基因組同源性高等特點[12]，逐漸代替了成魚急性毒性試驗。經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）在1996年也將斑馬魚胚胎發(fā)育方法列人測定單一化學(xué)毒性的標(biāo)準(zhǔn)方法之一[13]。試驗期間，通過對斑馬魚胚胎的反應(yīng)指標(biāo)進行觀察來判斷受試物的毒性作用類型（如遺傳毒性、神經(jīng)毒性、物理作用等）[14-18]筆者以5種二氯苯酚同分異構(gòu)體為受試物，研究其對斑馬魚胚胎的急性毒性和慢性毒性效應(yīng)，旨在為水生環(huán)境毒理學(xué)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1受試生物野生型AB品系斑馬魚，購自上海費曦生物科技有限公司，親魚體長 ，飼養(yǎng)于斑馬魚循環(huán)系統(tǒng)中，每日光照 ，水溫 ，每天喂食2次實驗室孵化的豐年蝦和紅蟲。交配期間，按照雄雌比 2 ： 1 將種魚放置在產(chǎn)卵盒，中間使用隔板分開，次日早上打開隔板，用微光刺激斑馬魚觸發(fā)交配[9]；收集 內(nèi)的受精卵，使用電動立體顯微鏡進行鏡檢，篩選健康的受精胚胎，進行胚胎急性和慢性毒性試驗。

1.2主要試劑 和2，3-DCP5種二氯苯酚均由阿拉丁試劑（上海）有限公司提供，試劑純度大于 9 7 % ，其基本信息見表1。

1.3主要儀器與設(shè)備斑馬魚繁育盒（上海海圣生物實驗設(shè)備有限公司）；十萬分之一電子天平（梅特勒托利多，XS205DU）；多參數(shù)測定儀（梅特勒托利多，SevenExcellence）；水硬度計（HANNA，HI97735）；培養(yǎng)箱（Panasonic，MLR-325-PC）；電動立體顯微鏡（萊卡，M205C）。

1.4急性毒性試驗急性毒性試驗參照OECDTG 設(shè)計，采用半靜態(tài)暴露方法，每 更換1次試驗溶液，每次更換 3 / 4 試驗溶液。試驗周期為 。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，試驗設(shè)置1個對照組和5個受試物濃度組 （ 0 . 1 ， 0 . 2 ， 0 . 4 ， 0 . 8 和 ）。試驗容器為6孔板，每個孔添加20粒胚胎和 試驗溶液，將6孔板置于 恒溫培養(yǎng)箱中。試驗24、48、72和 時在電動立體顯微鏡下觀察斑馬魚胚胎的中毒癥狀和致死情況。斑馬魚胚胎狀態(tài)以卵凝結(jié)、體節(jié)未形成、尾部未分離和無心跳為死亡終點。

1.5慢性毒性試驗慢性毒性試驗參照OECDTG210[21]設(shè)計，采用半靜態(tài)暴露方法，每 更換1次試驗溶液，每次更換3/4試驗溶液，試驗周期為 。根據(jù)胚胎急性毒性試驗結(jié)果，胚胎慢性試驗設(shè)置1個對照組和5個受試物濃度組（15、24、38、47和 ），試驗容器為1L的結(jié)晶皿，每個結(jié)晶皿中添加20粒胚胎和1L試驗溶液，每個濃度設(shè)置4個平行。將結(jié)晶血置于 恒溫培養(yǎng)箱中，光照周期為 。試驗結(jié)束時，統(tǒng)計斑馬魚仔魚的死亡率，測定其體長（全長）和體重（濕重）。

1.6數(shù)據(jù)處理利用SPSS18.0統(tǒng)計軟件和Excel2010軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計算半數(shù)致死濃度（ ） 9 5 % 置信區(qū)間，模擬回歸方程[22]。采用單因素分析研究各組斑馬魚仔魚體長、體重（濕重）和死亡率的差異。根據(jù)各處理組和對照組的差異顯著性，確定最高無可觀察效應(yīng)濃度（noobservedeffect concentration，NOEC）。

2 結(jié)果與分析

2.1受試物對斑馬魚胚胎的急性毒性通過對不同受試物的試驗胚胎死亡率的分析，得到各個時間段" L C ， 9 5% 置信區(qū)間和回歸方程。由表2可知，對于同一種二氯苯酚，隨著染毒時間的增加，斑馬魚胚胎的 不斷降低。5種受試物對斑馬魚胚胎的 急性毒性大小順序為 。試驗早期斑馬魚胚胎由透明變成白色半透明死卵，中后期出現(xiàn)心臟停正跳動和發(fā)育期間體節(jié)缺失、尾部未分離等癥狀。

2.2受試物對斑馬魚胚胎的慢性毒性

2.2.1染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對斑馬魚仔魚死亡率的影響。染毒 后，斑馬魚仔魚的死亡率見圖1。從圖1可以看出，在達到一定濃度后，斑馬魚的死亡率隨著受試物濃度的增加而升高。當(dāng)3，4-DCP和2，5-DCP的濃度為 時，斑馬魚的死亡率較CK顯著上升（ ；當(dāng)2，6-DCP和2，3-DCP的濃度為 時，斑馬魚仔魚的 死亡率與CK相比存在顯著差異（ 。由此可見，

3，4-DCP、2，5-DCP、3，5-DCP、2，6-DCP和2，3-DCP對斑馬魚仔魚死亡率的最高NOEC分別為38、38、47、47和 注： 表示與CK相比差異顯著（ ；**表示與CK相比差異極顯著（ ）。

圖1染毒二氯苯酚32d后斑馬魚仔魚的死亡率

2.2.2染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對斑馬魚仔魚體長的影響。染毒32d后，5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對斑馬魚體長的毒性效應(yīng)見表3。由表3可知，5種受試物對斑馬魚體長發(fā)育具有明顯的抑制作用，并隨著受試物濃度的升高，其生長變得緩慢，存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)3，4-DCP的濃度為 和 的濃度 ？ DCP和2，3-DCP的濃度 時，斑馬魚仔魚的體長與CK相比均無顯著差異。由此可見， 、 和 對斑馬魚仔魚體長的最高NOEC分別為15、24、24、38和

2.2.3染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對斑馬魚仔魚體重的影響。染毒32d后5種二氯苯酚同分異構(gòu)體對斑馬魚仔魚體重的毒性效應(yīng)見表4。由表4可知，5種受試物對斑馬魚體重具有明顯的抑制作用，并隨著受試物濃度的升高，其體重（濕重）下降更明顯，存在明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)3，4-DCP、2，5-DCP和3，5-DCP的濃度為15和

單位：

2，6-DCP和2，3-DCP的濃度為15、24和 時，斑馬魚仔魚的體重（濕重）與CK相比均無顯著差異（ 。由此可見， 和2，3-

DCP對斑馬魚仔魚體重（濕重）的最高NOEC分別為24、24、24、38 和 。

3結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明， DCP和2，3-DCP對斑馬魚胚胎急性毒性的 分別為0.31、0.36、0.47、0.53和 DCP、2，6-DCP和2，3-DCP對斑馬魚胚胎 慢性毒性的最高 NOEC分別為15、24、24、38和

該研究結(jié)果表明，二氯苯酚類化合物對水體環(huán)境中的魚類具有較高的生物毒性，對魚類生長發(fā)育也存在明顯的抑制作用。參照文獻[23-24]報道，二氯苯酚類化合物對海洋微藻和發(fā)光細菌的生物毒性大小順序為 或 。不同生物對二氯苯酚化合物的敏感性存在一定差異，但均體現(xiàn)出二氯苯酚對水生生物存在生物毒性效應(yīng)。因此，經(jīng)過工業(yè)、農(nóng)業(yè)與醫(yī)藥等生產(chǎn)活動產(chǎn)生氯酚類殘留物的廢水排放前需要進行凈化分解處理，減少對水生生態(tài)環(huán)境的危害。該研究評價了二氯苯酚類化學(xué)物質(zhì)對試驗魚胚胎的急性毒性和慢性毒性效應(yīng)，為風(fēng)險評價提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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