ISSR Analysis of Genetic Diversity of Carum carvi L. Germplasm Resources in Qinghai Region

ZHENGMing-xian，YANGLi-na，HENNing-dongetal（ColegeofAgrcultureandAnimalHusbandryQinghai Universityining， Qinghai 810016）

AbstractObjective]Toexplorethegeneticdiversityandgeneticelationshipof15Carumcari germplasmsinQinghairegionandtopro vide theoretical support for the artificial cultivation of carvivarieties.[Method] DNA from 149 fresh leaves of C . carvi was extracted by modifiedCTABmethod，andthn10igeffciencISprimerswereusedfomleularlabeling.Result]Atotalof8412plymoicbnd were obtained，the total polymorphism ratio was 90.21% ，the average Nei’s gene diversity index （ ）was O.5O，the average Shannon’s information index （I） was O.75，and the genetic similarity coefficient among C . carvi germplasm was 0.84-0. 97. The genetic diversity index ）， intra-population genetic diversity index（ ），gene differentiation coefficient （ ）and gene flow （ ）were0.23，0.17，0.26 and1.42，respectively.Te5gerplasswerdvidedintothecategois.e49C.carindivualseredividdinto6ategories.Cocusione germplasm of wild .carvi in Qinghaiareahasrich geneticdiversityandthere isextensivegeneexchange between germplasms，ndthis gene exchangeshowsacertain gradual difusion lawinthesame direction intheregion，andtherichgenetic diversityof wild C . carvi in Qinghai area comes from the differences between individuals.

Key WordsCarum carvi L. ；Germplasm resource；ISSR molecular marker；Genetic diversity

藏茴香（CarumcarviL.），常生長(zhǎng)于路旁、草原、山溝、河灘、山坡等處的二年或多年生草本植物，屬傘形科（Umbellif-erae）葛縷子屬（Carum），又名葛縷子，在青藏高原俗稱郭鳥(niǎo)、馬纓子[1]，種子呈長(zhǎng)卵圓形，表面有縱棱，種皮深褐色[2]。藏茴香因其全草富含揮發(fā)性成分，氣味獨(dú)特，其種子提取精油具有多重作用，是傳統(tǒng)民俗佐料及藏藥資源之一，具有重要的藥用價(jià)值及民俗文化價(jià)值[3-7]。藏茴香在世界范圍內(nèi)均有分布，在北歐、非洲、俄羅斯等地人工種植當(dāng)?shù)赜善贩N及品系[8-9]，在我國(guó)東北、華北、西北、四川、西藏等地的藏茴香種質(zhì)基本處于未被開(kāi)發(fā)的完全野生狀態(tài)[10]，藏茴香種質(zhì)間親緣關(guān)系不明確，因此對(duì)藏茴香種質(zhì)開(kāi)展系統(tǒng)的鑒定和親緣關(guān)系分析十分必要，而傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)等方面的親緣關(guān)系鑒定存在易受環(huán)境變化、地理因素限制等影響結(jié)果準(zhǔn)確性。

隨著現(xiàn)代分子遺傳學(xué)及生物學(xué)的飛速發(fā)展，包括ISSR（inter simple sequence repeat） SSR（simple sequence repeat）、SNP（single nucleotide polymorphism）、RAPD （random ampli-fied polymorphic DNA）SRAP（sequence-related amplified pol-ymorphism）在內(nèi)的DNA分子標(biāo)記被大量開(kāi)發(fā)，且廣泛應(yīng)用于植物遺傳特性[1]、親緣關(guān)系分析[2]和遺傳多樣性研究[13]

ISSR標(biāo)記技術(shù)無(wú)需事先獲得序列信息和引物設(shè)計(jì)，具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好、多態(tài)性高、廣泛試用等特點(diǎn)[14]，可以用于藏茴香種質(zhì)親緣關(guān)系分析。

青藏高原地區(qū)具有豐富的藏茴香種質(zhì)資源，這些種質(zhì)間的親緣關(guān)系目前尚不清楚，國(guó)內(nèi)對(duì)于青海地區(qū)藏茴香種質(zhì)間親緣關(guān)系方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道，因此需要更準(zhǔn)確和可靠的方法對(duì)其進(jìn)行鑒定和親緣關(guān)系分析。該研究利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)15個(gè)不同生長(zhǎng)地藏茴香種質(zhì)的遺傳多樣性進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)，了解藏茴香種質(zhì)的遺傳特點(diǎn)和親緣關(guān)系，以期為藏回香種質(zhì)資源保護(hù)和有效開(kāi)發(fā)提供理論支撐。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料藏茴香種質(zhì)材料為2018—2019年采自青海省（編號(hào)為Q1＼～Q13）、甘肅（編號(hào)為G1）、四川（編號(hào)S1）共15個(gè)不同居群（地區(qū)）的野生藏茴香種子，各種質(zhì)來(lái)源地詳細(xì)信息見(jiàn)表1，藏茴香種質(zhì)按居群劃分并編號(hào)。2020—2021年種植于青海省互助縣五十鄉(xiāng)巴洪村的試驗(yàn)地（試驗(yàn)地海拔 ，年降水量 550.7mm ，年均溫 ，無(wú)霜期 的積溫 的積溫 1452.4℃·d，土壤類型為黃黑土，土壤有機(jī)質(zhì)含量2.52g/kg，pH7.9 ，耕作層 22cm ，全磷、全氮、全鉀含量分別為 1.91，1.88，25.42g/kg ；堿解氮、速效鉀和速效磷含量分別為118、168和 19.10mg/kg 。田間管理方法同當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)，在藏茴香第一年?duì)I養(yǎng)生長(zhǎng)期間，從15個(gè)藏茴香種質(zhì)中分別隨機(jī)選取9＼～10個(gè)健康單株（共149個(gè)單株）的完全展開(kāi)葉片，用 冰袋保存，帶回實(shí)驗(yàn)室備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1藏茴香總DNA提取與檢測(cè)。提?。翰剀钕憧侱NA的提取采用周仙莉等[15提出的改良CTAB法。檢測(cè)：藏茴香DNA樣本的質(zhì)量和濃度利用 1% 瓊脂糖凝膠電泳及酶標(biāo)儀（SpectraMax190）進(jìn)行檢測(cè)；保存： 超低溫環(huán)境保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2PCR擴(kuò)增。該研究從100個(gè)通用ISSR引物（UBC801＼～ UBC9OO，http：//www.biotech.ubc.ca/services/naps/primers/Primers.PDF）中，篩選到10個(gè)擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性好的引物（表2）用于藏茴香種質(zhì)的分析。參考田霞等[16]優(yōu)化的藏茴香ISSR-PCR反應(yīng)體系（25uL反應(yīng)體系中，Taq酶 1.0U、0.6umol/L引物、Mg1.5mmol/LdNTPs0.2mmol/L，40ng 的DNA模板）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)程序：30次循環(huán)（ 5min 預(yù)變性， ；30s變性， S退火， 延伸， ）； 5min 延伸， 。PCR產(chǎn)物 保溫。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在 1% 瓊脂糖凝膠板上進(jìn)行電泳分析（ 電壓，電泳時(shí)間 50min，0.5×TAE 電泳緩沖液），凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)上記錄擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

1.3數(shù)據(jù)分析對(duì)所得ISSR分子標(biāo)記擴(kuò)增帶譜，按照有無(wú)進(jìn)行人工記錄，無(wú)條帶記為“0”，有條帶記為“1”，在Excel中構(gòu)建0、1數(shù)據(jù)矩陣。運(yùn)行NTSYSpc2.10e進(jìn)行遺傳相似度、遺傳距離計(jì)算和 UPGMA（unweighted pair-group method witharithmeticmeans）法構(gòu)建聚類圖進(jìn)行親緣關(guān)系分析和主成分分析；POPGENE32軟件計(jì)算Nei’s基因多樣性指數(shù) 、Shannon's信息指數(shù) （I） ；MEGA64構(gòu)建群體進(jìn)化樹(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1藏茴香種質(zhì)的遺傳多樣性分析該研究利用篩選的10個(gè)ISSR引物對(duì)15個(gè)藏茴香種質(zhì)共149個(gè)個(gè)體（每個(gè)種質(zhì)隨機(jī)選取10個(gè)個(gè)體，Q10號(hào)種質(zhì)9個(gè)）中提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以引物UBC854為例（圖1），擴(kuò)增條帶清晰明亮，青海地區(qū)藏茴香的DNA片段主要集中在 250～2000bp 。

由表3可知，10個(gè)引物共檢測(cè)到9326個(gè)條帶，多態(tài)性條帶8413個(gè)，總多態(tài)性條帶比率為 90.21% ；平均多態(tài)性條帶為841個(gè)；多態(tài)性條帶比率為 72.41%～100.00% ，平均89.85% 。藏茴香種質(zhì)Nei’s基因多樣性指數(shù) ）平均為0.50，Shannon's信息指數(shù) （I） 平均為 0.75 ?？梢?jiàn)，10個(gè)引物在供試的15個(gè)藏茴香種質(zhì)中具有較好的多態(tài)性，不同藏茴香種質(zhì)間在分子層面具有遺傳差異。

2.2藏茴香種質(zhì)的親緣關(guān)系和遺傳分化分析藏茴香種質(zhì)間的遺傳結(jié)構(gòu)可知，15個(gè)藏茴香種質(zhì)的總遺傳多樣性指數(shù)（ ？？？ ）、基因多樣性指數(shù)（ ）、基因分化系數(shù)（ ）和基因流（ ）分別為 0.23，0.17，0.26 和1.42。居群的遺傳多樣性有26.02% 存在于居群間，而 73.98% 存在于居群內(nèi)部?；蚍只禂?shù)（ 越低，基因流 ）反而越大，15個(gè)藏茴香居群間的平均基因流（ ）大于1，說(shuō)明發(fā)生遺傳漂變的概率較小，藏茴香各種質(zhì)間存在廣泛的基因交流。

注：M為DL2000Marker；49＼～50為Q5種質(zhì)；51＼～60為G1種質(zhì)；61＼～70為S1種質(zhì)；71＼～72為Q6種質(zhì)。

Note：Mis DL2000Marker；49-50wereQ5germplasm；51-60wereG1germplasm；61-70wereS1germplasm；71-72 wereQ6geplasm.

2.3藏茴香種質(zhì)的遺傳距離和遺傳相似度從藏茴香15個(gè)種質(zhì)的遺傳相似度和遺傳距離矩陣（表4）可以看出，15個(gè)藏茴香種質(zhì)之間的遺傳相似系數(shù)為 0.84～0.97 ，平均為0.92；遺傳距離是 0.03～0.18 ，平均為 0.08 。其中遺傳相似度最大的是Q10號(hào)（烏蘭縣希里溝鎮(zhèn)郊區(qū)）和Q11號(hào)（都蘭縣夏日哈鎮(zhèn)）的種質(zhì)樣本，相似系數(shù)為0.97，遺傳距離最小（0.03），說(shuō)明Q10號(hào)和Q11號(hào)藏茴香種質(zhì)間親緣關(guān)系最近，差異較??；而Q4號(hào)（同仁縣隆務(wù)鎮(zhèn)）和Q13號(hào)（囊謙縣香達(dá)鎮(zhèn)東郊）種質(zhì)間的遺傳相似度最小，為0.84，遺傳距離最大（0.18），說(shuō)明這2個(gè)藏茴香種質(zhì)之間的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，差異較大，從基因?qū)用鎭?lái)說(shuō)，二者的遺傳背景差異較大，遺傳距離較大。

2.4青海15個(gè)藏茴香種質(zhì)間的聚類分析根據(jù)藏茴香居群遺傳聚類圖（圖2），在遺傳距離為0.04時(shí)，可以將15個(gè)藏茴香種質(zhì)劃分為3大類。來(lái)自四川省阿壩縣（S1）和甘肅省甘南唐克（G1）居群被劃分為第I類；青海省同仁市隆務(wù)鎮(zhèn)（Q4）和青海省班瑪縣江日堂鄉(xiāng)（Q5）的2個(gè)居群被劃分為第I類；青海省其他11個(gè)居群（Q1、Q2、Q3、Q6、Q7、Q8、Q9、Q10、Q11、Q12、Q13）劃分為第Ⅲ類。

2.5藏茴香149個(gè)個(gè)體間的聚類分析采用軟件NTSYSpc2.10e計(jì)算149個(gè)藏茴香個(gè)體的遺傳距離，并利用MEGA64構(gòu)建樹(shù)狀聚類圖（圖3），149個(gè)藏茴香個(gè)體在遺傳距離為0.38時(shí)被劃分為6個(gè)類群。第I類是最大的類群，含109個(gè)藏茴香個(gè)體，占全部供試材料的 73.15% ，地理來(lái)源較為廣泛；第Ⅱ類為Q5號(hào)種質(zhì)（班瑪縣江日堂鄉(xiāng)）的2個(gè)個(gè)體，占比1.34% ；第Ⅲ類含18個(gè)個(gè)體，占比 12.08% ，其中Q1號(hào)（祁連縣八寶鎮(zhèn)）5個(gè)、Q2號(hào)（門源縣青石嘴鎮(zhèn)馬場(chǎng)鄉(xiāng)）4個(gè)、Q3號(hào)（互助卓扎溝）1個(gè)、Q6號(hào)（達(dá)日縣窩賽鄉(xiāng)）4個(gè)、Q9號(hào)（共和縣青海湖）4個(gè)；第V類含2個(gè)個(gè)體，來(lái)自Q1號(hào)種質(zhì)（祁連縣八寶鎮(zhèn)）；第V類有16個(gè)個(gè)體，Q12號(hào)（稱多縣稱文鎮(zhèn)西郊）6個(gè)、Q13號(hào)（囊謙縣香達(dá)鎮(zhèn)東郊）10個(gè)；第V類有2個(gè)個(gè)體，來(lái)自Q11號(hào)種質(zhì)（都蘭縣夏日哈鎮(zhèn)），這一類群與其他遺傳距離最遠(yuǎn)。

藏茴香個(gè)體聚類分析結(jié)果表明，來(lái)源地相同的藏茴香資源并不完全聚類于同一類群，青海同一藏茴香種質(zhì)中的個(gè)體會(huì)分布于不同的類群中，而來(lái)自甘肅和四川的個(gè)體在分子層面親緣關(guān)系更近，都屬于第I類群。

2.6藏茴香個(gè)體的PCA分析為了更好地分析藏茴香種質(zhì)資源間的遺傳關(guān)系，采用NTSYSpc2.10e軟件以第1主成分（方差貢獻(xiàn)率為 36.25% ）和第2主成分（方差貢獻(xiàn)率為12.65% ）作為二維坐標(biāo)系構(gòu)建二維散點(diǎn)圖（圖4），對(duì)供試藏茴香的全部個(gè)體間親緣關(guān)系進(jìn)行比較。散點(diǎn)圖呈現(xiàn)出居群內(nèi)部的遺傳差異大于居群間的差異（圖4），所得結(jié)果與上述群體基因分化系數(shù)、基因流結(jié)果一致，Q3、Q4、G1居群種質(zhì)高度集中，表明其遺傳背景相似，親緣關(guān)系很近，Q1、Q9、Q10、Q11、Q12、Q13居群中個(gè)體間的遺傳差異較大，這與個(gè)體聚類分析的結(jié)果一致。

主成分分析能夠直觀反映出供試材料個(gè)體間的親緣關(guān)系，根據(jù)二維散點(diǎn)圖（圖4）可以看出149個(gè)藏茴香個(gè)體在各個(gè)象限均有分布，并且藏茴香各個(gè)種質(zhì)的個(gè)體重合度較高，個(gè)體較為分散，表明供試藏茴香個(gè)體間的遺傳多樣性較為豐富，擁有廣闊的遺傳背景，其中距離越近的藏茴香個(gè)體間的遺傳背景相似，親緣關(guān)系較近。

3討論

近年來(lái)，隨著藏茴香提取物藥理作用、精油成分鑒定及生物學(xué)效應(yīng)研究的深入，藏茴香種質(zhì)的開(kāi)發(fā)和利用價(jià)值越發(fā)受到重視。我國(guó)藏茴香資源豐富，基本處于野生未開(kāi)發(fā)狀態(tài)，系統(tǒng)的遺傳學(xué)相關(guān)研究起步晚，基礎(chǔ)信息少；不同地區(qū)藏茴香種質(zhì)存在形態(tài)差異不明顯、親緣關(guān)系不清問(wèn)題，不利于藏茴香種質(zhì)保護(hù)、開(kāi)發(fā)和利用。豐富的遺傳多樣性是物種生存、適應(yīng)和發(fā)展的前提[17]。ISSR分子標(biāo)記具有多態(tài)性豐富、靈敏度高和穩(wěn)定性高的優(yōu)勢(shì)，在各種植物遺傳多樣性研究的領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用[18]，該研究對(duì)收集到的15個(gè)不同來(lái)源地的藏茴香種質(zhì)開(kāi)展基于ISSR分子標(biāo)記的遺傳多樣性及親緣關(guān)系研究，為藏茴香種質(zhì)保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)信息。

3.1藏茴香種質(zhì)遺傳多樣性 Nei's基因多樣性指數(shù)

（204 ）[19]和Shannon's信息指數(shù) 可以表示物種的遺傳多樣性。該研究中10個(gè)ISSR引物擴(kuò)增的多態(tài)性比率高達(dá)89.85% ，Nei’s基因多樣性指數(shù) 和Shannon's信息指數(shù)（I） 平均值分別為0.50和0.75；李昂[21利用SSR標(biāo)記技術(shù)研究藏茴香種質(zhì)的遺傳多樣性，并測(cè)得Shannon’s信息指數(shù)（I） 為0.26；Shannon's信息指數(shù) （I） 可以與同類研究進(jìn)行比較[20]，因此可以表明ISSR分子標(biāo)記對(duì)藏茴香種質(zhì)資源具有更好的鑒別能力，分析得到的遺傳多樣性更豐富。藏茴香種質(zhì)的較高遺傳多樣性為未來(lái)的藏茴香種質(zhì)鑒定、篩選培育提供了理論依據(jù)。

3.2藏茴香種質(zhì)親緣關(guān)系與遺傳分化分析藏茴香15個(gè)藏茴香種質(zhì)的親緣關(guān)系發(fā)現(xiàn)，藏茴香種質(zhì)的遺傳相似度為0.84＼～0.97，而遺傳距離為 0.03～0.18，15 個(gè)藏茴香居群的平均相似度為0.92，其中遺傳相似度最大的是Q10號(hào)（烏蘭縣希里溝鎮(zhèn)郊區(qū)）和Q11號(hào)（都蘭縣夏日哈鎮(zhèn)），說(shuō)明Q10號(hào)和Q11號(hào)種質(zhì)親緣關(guān)系最近；而Q4號(hào)（同仁縣隆務(wù)鎮(zhèn)）和Q13號(hào)（囊謙縣香達(dá)鎮(zhèn)東郊）種質(zhì)的遺傳相似度最小，說(shuō)明這2個(gè)藏茴香種質(zhì)之間的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，差異較大。

基因流（ ）表示植物居群分化的重要指標(biāo)，表示基因在居群間的交流程度， Ngt;1 時(shí)，基因在居群間有較大的流動(dòng)性，有效防止居群分化[22]。該研究中 平均為1.42，說(shuō)明15個(gè)藏茴香種質(zhì)存在較強(qiáng)的基因交流。遺傳分化系數(shù)（204號(hào) ）能衡量植物群體間的分化程度，為遺傳分化的研究提供有力的解釋和說(shuō)明[23]。其取值為0＼～1，大致分為4個(gè)級(jí)別0lt;Glt;0.05、0.05G0.15lt;0.15G0.25和 0.25lt;Gst1.00，依次表達(dá)群體間遺傳分化水平較低、中度、較高、極高。該研究中 值平均為0.26，表示15個(gè)藏茴香種質(zhì)存在極高的遺傳變異，這種變異來(lái)自居群間和居群內(nèi)部，居群間的遺傳變異占 26.02% ，居群內(nèi)部的變異占比 73.98% ，說(shuō)明藏茴香的遺傳分化主要來(lái)源于居群內(nèi)部的變異，這表明生活在相同地區(qū)和環(huán)境下的居群間基因交流十分普遍。而個(gè)體間強(qiáng)烈的變異導(dǎo)致青海地區(qū)藏茴香基因多樣性非常豐富，這也為藏茴香的人工育種提供了豐富的變異來(lái)源。同時(shí)種質(zhì)間的基因交流也解釋了個(gè)體聚類分析和主成分分析時(shí)，同一種質(zhì)的個(gè)體分布范圍很大，居群間重合度較高的現(xiàn)象。

3.3藏茴香種質(zhì)間和個(gè)體間聚類分析種質(zhì)間聚類分析將15個(gè)藏茴香種質(zhì)分成3個(gè)類群，表現(xiàn)出地理位置相近的種質(zhì)聚為同一類，如S1（四川阿壩）種質(zhì)和G1（甘肅甘南）被劃分為第1類群，這2個(gè)種質(zhì)分布的地理位置相鄰，遺傳距離相近，明顯有別于青海境內(nèi)的其他種質(zhì)；Q4和Q5為第I類群，分布于青海省東北部地區(qū)呈向北走向的地區(qū)； Q1～ Q3 種質(zhì)、Q6＼～Q13種質(zhì)為第Ⅲ類群，包括分布在青海東北部大部分地區(qū)的種質(zhì)，該類群可分為2個(gè)亞群，第1亞群在青海省內(nèi)呈西南向分布，第2亞群在青海省東北部地區(qū)呈東北向分布，很可能由于人為或自然因素進(jìn)行種質(zhì)遷移。

藏茴香個(gè)體間聚類將149個(gè)個(gè)體劃分為6個(gè)類群。而來(lái)源地相同的藏茴香個(gè)體并不完全聚類于同一類群，青海省內(nèi)的藏茴香個(gè)體會(huì)分布于不同的類群中，而來(lái)自甘肅和四川的個(gè)體在分子層面親緣關(guān)系更近，都屬于第I類群。從個(gè)體層面分類，藏茴香的分布呈現(xiàn)出雜亂無(wú)序的現(xiàn)象，即遺傳分類并沒(méi)有明顯的地域差異性。這進(jìn)一步說(shuō)明藏茴香豐富的遺傳多樣性來(lái)自種群內(nèi)部藏茴香個(gè)體間的差異。

3.4藏茴香個(gè)體間主成分分析主成分分析能夠直觀反映出供試材料間的親緣關(guān)系[24]，為了更好地驗(yàn)證藏茴香種質(zhì)資源間的親緣關(guān)系，構(gòu)建二維主成分分析圖比較分析親緣關(guān)系，發(fā)現(xiàn)149個(gè)藏茴香個(gè)體的分布非常廣泛，個(gè)體間的遺傳差異大于居群間的遺傳差異，這一結(jié)果與個(gè)體聚類分析結(jié)果一致。因此在分子層面來(lái)源地的差異不能決定藏茴香的親緣關(guān)系，同一居群的個(gè)體與個(gè)體間的差異也有可能很大。造成這種現(xiàn)象的原因有很多，首先野生藏茴香遺傳信息復(fù)雜，單一的分子標(biāo)記不能全面反映品種的遺傳信息；其次，生活在同一地理環(huán)境下的同一物種間更容易發(fā)生基因交流，導(dǎo)致即使生活的區(qū)域不同但在基因?qū)用嫔喜⑽幢憩F(xiàn)出強(qiáng)烈的地域性；最后由于地域、空間和經(jīng)費(fèi)等諸多條件限制，能利用的野生藏茴香居群類型較少，尤其缺少青藏地區(qū)以外的野生藏茴香種質(zhì)，因此可能沒(méi)有全面、準(zhǔn)確地反映出藏茴香這一物種的遺傳特性。

4結(jié)論

青海地區(qū)野生藏茴香在分子層面的親緣關(guān)系并沒(méi)有明顯的地域差異性，所得結(jié)果與歐洲學(xué)者Laribi等[25]利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)5個(gè)居群的藏茴香進(jìn)行聚類，類群間具有極強(qiáng)地域差異性的研究結(jié)果不相符合，可能原因是該研究中所用的藏茴香種質(zhì)均采集自青藏高原地區(qū)，地理環(huán)境獨(dú)特，野生藏茴香種子在地區(qū)內(nèi)進(jìn)行普遍遷移，種質(zhì)間存在廣泛的基因交流。從種質(zhì)范圍來(lái)看，青海地區(qū)藏茴香種質(zhì)的遷移具有一定的方向性，或呈東北，或呈西南，因此青海地區(qū)野生藏茴香可能是通過(guò)各種自然因素進(jìn)行擴(kuò)散繁衍，而種質(zhì)間的遺傳差異性更多是種群內(nèi)部個(gè)體基因突變、基因交流和自然環(huán)境影響共同作用的結(jié)果。該研究通過(guò)ISSR分子標(biāo)記技術(shù)揭示了青海地區(qū)藏茴香種質(zhì)的高遺傳多樣性和獨(dú)特的親緣關(guān)系，對(duì)于該地區(qū)藏茴香資源的科學(xué)開(kāi)發(fā)利用具有借鑒意義，同時(shí)為其他地區(qū)野生藏茴香的種質(zhì)鑒別、遺傳特性研究、資源保護(hù)等工作提供了科學(xué)依據(jù)。

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