摘要：目的 明確CEACAM6在鼻咽癌中的表達(dá)，探索CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷移的影響以及潛在的作用機(jī)制。方法通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析CEACAM6在鼻咽癌中表達(dá)情況。TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析CEACAM6在頭頸部癌中表達(dá)情況以及與生存預(yù)期的關(guān)系。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)CEACAM6在鼻咽癌組織中的表達(dá)情況。構(gòu)建CEACAM6過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型，分為control組（空載）和Lv-CEACAM6組（過(guò)表達(dá)）；CEACAM6敲低細(xì)胞模型，分為control組（空載）、sh#1組（敲低）和sh#2組（敲低）。通過(guò)CCK-8和Edu染色檢測(cè)CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖的影響。傷口愈合和Transwell檢測(cè)CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲遷移的影響。鬼筆環(huán)肽染色檢測(cè)CEACAM6 對(duì)鼻咽癌細(xì)胞骨架排列的影響。Western blotting 檢測(cè)CEACAM6 對(duì)鼻咽癌細(xì)胞中FN1、ITGA5、ITGB1、N-cad、Vim和E-cad 的蛋白表達(dá)影響以及FN1 過(guò)表達(dá)對(duì)CEACAM6 過(guò)表達(dá)的鼻咽癌細(xì)胞中ITGA5 和ITGB1蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明CEACAM6在鼻咽癌中低表達(dá)，TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明CEACAM6在頭頸部癌中低表達(dá)，CEACAM6 低表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6 在鼻咽癌組織中低表達(dá)。CCK-8 和Edu 檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6 可抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力（Plt;0.05）。傷口愈合和Transwell 檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6 可抑制鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移能力（Plt;0.05）。鬼筆環(huán)肽染色結(jié)果顯示上調(diào)CEACAM6 表達(dá)后肌動(dòng)蛋白熒光表達(dá)降低。Westen blotting檢測(cè)結(jié)果表明上調(diào)CEACAM6表達(dá)后FN1、ITGA5、ITGB1下調(diào)，E-cad上調(diào)，N-cad和Vim下調(diào)（Plt;0.05），F(xiàn)N1 過(guò)表達(dá)可緩解CEACAM6 對(duì)ITGA5 和ITGB1 表達(dá)的抑制作用（Plt;0.05）。結(jié)論 CEACAM6 可能通過(guò)調(diào)控FN1、ITGA5、ITGB1蛋白表達(dá)影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而抑制鼻咽癌的侵襲和遷移。

關(guān)鍵詞：CEACAM6；鼻咽癌；遷移；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

鼻咽癌（NPC）是鼻咽部惡性腫瘤，在東南亞國(guó)家和中國(guó)發(fā)病率最高［1， 2］。鼻咽癌患者確診時(shí)通常為局部晚期，復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致鼻咽癌患者死亡的常見(jiàn)原因［3］。放射治療是鼻咽癌患者的主要治療手段，可提高局部晚期鼻咽癌患者的生存率，但仍有30%的患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移［4， 5］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)鼻咽癌患者5 年凈生存率約47%［6］。因此，探索與鼻咽癌發(fā)展相關(guān)的潛在機(jī)制對(duì)鼻咽癌患者制定新的治療策略至關(guān)重要。

人類癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子（CEACAM）家族是一個(gè)由12 個(gè)獨(dú)立基因編碼的蛋白質(zhì)家族，位于染色體19q13.1-13.2 上［7］。癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子6（CEACAM6，CD66c，非特異性交叉反應(yīng)抗原，NCA，或NCA-50/90）是一種糖基磷脂酰肌醇（GPI）連接的細(xì)胞表面蛋白，屬于CEACAM家族的免疫球蛋白（Ig）表觀基因［8］。CEACAM蛋白亞家族參與調(diào)控細(xì)胞間粘附、存活和增殖、腫瘤抑制、侵襲和轉(zhuǎn)移［9］。研究發(fā)現(xiàn)，CEACAM6在喉癌、喉咽癌和口咽癌組織中表達(dá)下調(diào)，在膀胱癌中CEACAM6可調(diào)控smad2/3-基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）信號(hào)的激活［10， 11］。CEACAM6可通過(guò)調(diào)控整合素信號(hào)通路在肺腺癌中發(fā)揮作用［12］。然而，CEACAM6在鼻咽癌中的作用和潛在機(jī)制尚不清楚。

本研究通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)分析CEACAM6在鼻咽癌組織中的表達(dá)情況。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)分析CEACAM6 對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力的影響以及對(duì)FN1、ITGA5、ITGB1和EMT相關(guān)生物標(biāo)志蛋白表達(dá)的影響，以期為鼻咽癌的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要材料

慢病毒載體LV5-NC、LV5-CEACAM6、LV3-NC、LV3-sh#1 和LV3-sh#2（ 上海吉瑪）；HiScript?IIQRTSuperMixforqPCR（ +gDNAwiper）試劑盒和AceQ?qPCRSYBRGreenMasterMix試劑盒（諾維贊）；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒、BeyoClickTMEdu-594 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（碧云天）；TRITC Phalloidin 羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（索萊寶）；anti-CEACAM6（Affinity，1∶2000）；anti-FN1（1∶10000）、anti-ITGA5（1∶3000）、anti-ITGB1（1∶4000）、anti-E-cadherin（1∶5000）、anti-Ncadherin（1∶20000）、anti-Vimentin（1∶50000）和HRPconjugatedAffinipure Goat Anti-Mouse/Anti-RabbitIgG（H+L）（1：3000）（武漢山鷹）；β-actin（ABclonal，1∶3000）；引物序列（上海生工）。

1.2 免疫組織化學(xué)技術(shù)

從我院病理科調(diào)取鼻咽癌患者癌組織和癌旁組織，切片3 μm厚度，進(jìn)行脫蠟、水化、抗原修復(fù)、阻斷和封閉，anti-CEACAM6（1：200）孵育過(guò)夜，酶標(biāo)山羊抗兔孵育1 h，DAB顯色后復(fù)染細(xì)胞核，最后脫水、透明和封片。倒置顯微鏡下觀察和拍照。本研究通過(guò)我院倫理委員會(huì)審查（倫理批號(hào)：倫科批字［2022］第170號(hào)）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染

人永生化正常鼻咽上皮細(xì)胞（NP69）和鼻咽癌細(xì)胞（HNE1，C666-1，HK1，5-8F，CNE2Z）購(gòu)自IMMOCELL公司，所有細(xì)胞均在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液為RPMI 1640、1%青霉素-鏈霉素混合物和10%胎牛血清，溫度為37 ℃，二氧化碳濃度為5%。構(gòu)建CEACAM6過(guò)表達(dá)細(xì)胞模型，分為Control 組（空載）和Lv-CEACAM6組（過(guò)表達(dá)）；CEACAM6敲低細(xì)胞模型，分為Control組（空載）、sh#1組（敲低）和sh#2組（敲低）。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

Trziol 提取總RNA，HiScript?IIQRTSuperMixforqPCR（+gDNAwiper）試劑盒反轉(zhuǎn)錄RNA 為cDNA，AceQ?qPCRSYBRGreenMasterMix 試劑盒擴(kuò)增，設(shè)置參數(shù)：95 ℃， 10 s；56 ℃， 30 s；72 ℃， 30 s。40個(gè)循環(huán)。以GADPH為內(nèi)參，用2-ΔΔct計(jì)算相對(duì)定量。引物序列如下：

CEACAM6-F：ACCCACCCACCACTGCCAAG，R：TGCCATCCACTCTTTCGCCTTTG；

GAPDH-F：TGACATCAAGAAGGTGGTGAAGCAG， R：GTGTCGCTGTTGAAGTCAGAGGAG.

1.5 Western blotting

從RIPA裂解液和蛋白酶抑制劑混合液中提取總蛋白，用BCA 蛋白濃縮試劑盒測(cè)定蛋白濃度，加入SDS-PAGE蛋白取樣緩沖液高溫變性。用5%脫脂奶粉封膜，一抗［anti-CEACAM6；anti-FN1、anti-ITGA5、anti-ITGB1、anti-E-cadherin、anti-N-cadherin 和anti-Vimentin；β-actin］4 ℃孵育過(guò)夜，二抗［HRP-conjugatedAffinipure Goat Anti-Mouse/Anti-Rabbit IgG（H+L）］孵育2 h，用MKUltraSensitive ECL Luminol（BIOMIKY）顯色。用ImageJ進(jìn)行灰度值分析。

1.6 CCK-8實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞計(jì)數(shù)并均勻接種到96 孔板中，分別在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48、72 h，然后加入CCK-8 溶液，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2.5 h 后，使用酶標(biāo)記物檢測(cè)吸光度值A(chǔ)450 nm。

1.7 Edu細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞計(jì)數(shù)后接種到6孔板中，然后在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加入Edu 工作液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h，4%多聚甲醛固定，0.3% TritonX-100通透15 min，每孔加入500 μL反應(yīng)混合物，避光培養(yǎng)30 min，用DAPI染色細(xì)胞核15 min，然后在熒光顯微鏡下拍照。

1.8 傷口愈合實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞接種到6孔板中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞接近長(zhǎng)滿時(shí)，用槍頭垂直劃傷單層細(xì)胞傷口，換上新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h后取出，在顯微鏡下拍照，ImageJ計(jì)算傷口愈合面積。

1.9 Transwell實(shí)驗(yàn)

用無(wú)血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)后將細(xì)胞均勻接種到細(xì)胞室中（在侵襲實(shí)驗(yàn)中將一層基質(zhì)凝膠鋪在細(xì)胞室的上層），在下層細(xì)胞室中加入10% FBS完全培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出，用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色15 min，用棉簽擦拭上層細(xì)胞室的細(xì)胞，在顯微鏡下拍照。

1.10 鬼筆環(huán)肽染色

將細(xì)胞接種到細(xì)胞爬片上，待細(xì)胞密度接近50%時(shí)終止培養(yǎng)，用4%多聚甲醛固定，用0.5% TritonX-100通透5 min，用TRITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液避光孵育30 min，用DAPI染色細(xì)胞核15 min，用抗熒光淬滅劑封片，在共聚焦顯微鏡下拍照。

1.11 數(shù)據(jù)來(lái)源和數(shù)據(jù)分析

鼻咽癌數(shù)據(jù)（數(shù)據(jù)集GSE12452）來(lái)自GEO數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/），設(shè)置差異基因篩選標(biāo)準(zhǔn)差異表達(dá)倍數(shù)的對(duì)數(shù)絕對(duì)值大于1 且Plt;0.05。使用R（4.3.2版）軟件繪制差異基因熱圖和聚類圖；通過(guò)GEPIA（http：//gepia.cancer-pku.cn/）獲得TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中CEACAM6 在HNSC中的差異表達(dá)和總生存分析；通過(guò)VENNY（https：//bioinfogp. cnb. csic. es/tools/venny/index. html）在線繪制Venn 圖；利用STRING（https：//cn.string-db.org/）和Cytoscape（3.9.1 版）繪制蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖；通過(guò)Wei Sheng Xin（https：//www.bioinformatics.com.cn/）繪制CEACAM6，F(xiàn)N1和ITGB1基因表達(dá)小提琴圖和相關(guān)性圖。

1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 26.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CEACAM6在鼻咽癌組織和細(xì)胞中低表達(dá)

GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析得到差異基因熱圖，WGCNA分析得到基因聚類樹(shù)和模塊熱圖（圖1A～C）。將GEOdiff和GEO-green模塊基因進(jìn)行Venn分析，共得到107個(gè)交叉基因（圖1D）。通過(guò)在線STRING數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)這107個(gè)基因進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，發(fā)現(xiàn)CEACAM6基因是鼻咽癌的潛在核心基因，在腫瘤中低表達(dá)（圖1A～E）。TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明，CEACAM6在頭頸部腫瘤中低表達(dá)， CEACAM6 低表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)（圖1F、G）。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6在鼻咽癌組織中低表達(dá)（圖2A）。Western blotting 和熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示與NP69相比，CEACAM6在鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)較低（圖2B、C，Plt;0.05，Plt;0.01）。

2.2 CEACAM6高表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖

CCK-8 檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6 表達(dá)上調(diào)可抑制細(xì)胞活力，下調(diào)CEACAM6 表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞活力（圖3A，Plt;0.01）。Edu 檢測(cè)結(jié)果顯示上調(diào)CEACAM6表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖，下調(diào)CEACAM6表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞增殖（圖3B、C，Plt;0.05，Plt;0.01）。

2.3 CEACAM6高表達(dá)抑制鼻咽癌細(xì)胞遷移

傷口愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示上調(diào)CEACAM6表達(dá)細(xì)胞傷口愈合能力減弱，下調(diào)CEACAM6 表達(dá)細(xì)胞傷口愈合能力增強(qiáng)（圖4A、B，Plt;0.01）。Transwell檢測(cè)結(jié)果表明上調(diào)CEACAM6 表達(dá)可抑制細(xì)胞侵襲和遷移能力，下調(diào)CEACAM6 表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞侵襲和遷移能力（圖4C～E，Plt;0.01）。

2.4 CEACAM6可調(diào)控FN1/ITGA5/ITGB1表達(dá)

GSEA富集分析表明CEACAM6 與VEGF通路有關(guān)，經(jīng)Genecard 獲取VEGF通路相關(guān)蛋白，構(gòu)建PPI 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果顯示CEACAM6的表達(dá)與FN1、ITGA5和ITGB1蛋白互作（圖5A～C）。GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明，CEACAM6在鼻咽癌中表達(dá)較低，F(xiàn)N1和ITGB1在鼻咽癌中表達(dá)較高，CEACAM6 與FN1 和ITGB1 呈負(fù)相關(guān)（圖5D、E）。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示上調(diào)CEACAM6 表達(dá)可抑制FN1、ITGA5 和ITGB1 表達(dá)，F(xiàn)N1 過(guò)表達(dá)可緩解CEACAM6 對(duì)ITGA5 和ITGB1 表達(dá)的抑制作用；下調(diào)CEACAM6 表達(dá)可促進(jìn)FN1、ITGA5和ITGB1表達(dá)（圖5F～H，Plt;0.05，Plt;0.01）。

2.5 FN1過(guò)表達(dá)可逆轉(zhuǎn)CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的影響

CCK-8 和Edu 檢測(cè)結(jié)果顯示FN1 過(guò)表達(dá)可緩解CEACAM6 過(guò)表達(dá)對(duì)HNE1 細(xì)胞增殖的抑制作用（圖6A、B，Plt;0.05，Plt;0.01）。傷口愈合和Transwell檢測(cè)結(jié)果顯示FN1過(guò)表達(dá)可改善CEACAM6過(guò)表達(dá)對(duì)HNE1細(xì)胞侵襲遷移能力的抑制作用（圖6C～F，Plt;0.01）。

2.6 CEACAM6通過(guò)調(diào)控EMT通路抑制遷移

鬼筆環(huán)肽染色檢測(cè)結(jié)果顯示上調(diào)CEACAM6表達(dá)后細(xì)胞質(zhì)中的肌動(dòng)蛋白熒光減弱；下調(diào)CEACAM6 表達(dá)后細(xì)胞質(zhì)中肌動(dòng)蛋白的熒光增強(qiáng)（圖7A）。Westernblotting檢測(cè)結(jié)果表明上調(diào)CEACAM6表達(dá)后E-cad表達(dá)上調(diào)，N-cad 和Vim 表達(dá)下調(diào)；下調(diào)CEACAM6 表達(dá)后E-cad表達(dá)下調(diào)，N-cad和Vim表達(dá)上調(diào)（圖7B、C，Plt;0.05，Plt;0.01）。

3 討論

本研究明確了CEACAM6 在鼻咽癌中的表達(dá)情況，并進(jìn)一步分析CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的作用以及潛在的作用機(jī)制。研究結(jié)果顯示CEACAM6 在鼻咽癌組織和細(xì)胞中均低表達(dá)；上調(diào)CEACAM6 表達(dá)可抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移；CEACAM6可能是通過(guò)調(diào)控EMT信號(hào)抑制鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移能力。

既往未見(jiàn)CEACAM6 參與鼻咽癌進(jìn)展報(bào)道，但有研究表明CEACAM6 在喉癌、喉咽癌和口咽癌等腫瘤中表達(dá)下調(diào)，并于癌癥進(jìn)展有關(guān)［10， 13， 14］。這與本研究結(jié)論相似。本研究通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)CEACAM6在鼻咽癌中表達(dá)下調(diào)。TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)CEACAM6在HNSC中表達(dá)下調(diào)，并與癌癥患者預(yù)后有關(guān)。進(jìn)一步通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)證實(shí)了CEACAM6在鼻咽癌組織中低表達(dá)，Western blotting 和熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示CEACAM6 在鼻咽癌細(xì)胞中蛋白水平和mRNA水平均較低。既往研究表明CEACAM6參與腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移［14， 15］，這與本研究結(jié)果一致。本研究通過(guò)構(gòu)建CEACAM6表達(dá)上調(diào)或下調(diào)細(xì)胞株進(jìn)行功能學(xué)研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)下調(diào)CEACAM6 表達(dá)可促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移；上調(diào)CEACAM6表達(dá)可抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。這些結(jié)果說(shuō)明了CEACAM6 在鼻咽癌中低表達(dá)并參與鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲遷移，但其對(duì)鼻咽癌的功能機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

本研究通過(guò)GSEA 富集分析發(fā)現(xiàn)CEACAM6 與VEGF信號(hào)通路相關(guān)，進(jìn)一步通過(guò)Genecard在線分析獲取VEGF 信號(hào)通路相關(guān)蛋白，利用PPI 在線分析CEACAM6與VEGF信號(hào)關(guān)鍵蛋白的互作關(guān)系。結(jié)果顯示，CEACAM6 與關(guān)鍵蛋白（FN1/ITGA5/ITGB1）相互作用。既往研究表明，纖連蛋白（FN1）與腫瘤細(xì)胞絲狀偽足的形成和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)［16］，整合素α?5/β-1（ITGA5/ITGB1）是纖連蛋白（FN1）的受體，也參與腫瘤進(jìn)展，包括腫瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移［17-19］。這與本研究結(jié)果一致。本研究通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，CEACAM6在鼻咽癌中表達(dá)較低，F(xiàn)N1和ITGB1在鼻咽癌中表達(dá)較高，CEACAM6 與FN1 和ITGB1 呈負(fù)相關(guān)。Westernblotting 檢測(cè)結(jié)果表明下調(diào)CEACAM6 表達(dá)可促進(jìn)FN1/ITGA5/ITGB1的表達(dá)；上調(diào)CEACAM6表達(dá)可抑制FN1/ITGA5/ITGB1 的表達(dá)，F(xiàn)N1 過(guò)表達(dá)可挽救CEACAM6過(guò)表達(dá)對(duì)ITGA5和ITGB1蛋白表達(dá)水平的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)FN1 過(guò)表達(dá)可逆轉(zhuǎn)CEACAM6過(guò)表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的抑制作用。這些結(jié)果表明CEACAM6可能通過(guò)調(diào)控FN1/ITGA5/ITGB1軸來(lái)影響鼻咽癌的發(fā)展。

上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是極化的上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)程［20， 21］。這一過(guò)程是腫瘤異質(zhì)性的關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)因素，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及對(duì)化療或免疫療法的耐藥性有關(guān)［22］。癌細(xì)胞中的EMT涉及細(xì)胞骨架的大規(guī)模重組、上皮完整性的喪失以及間質(zhì)特征的獲得，如間質(zhì)型細(xì)胞遷移，在癌癥中，EMT會(huì)不同程度地干擾各種信號(hào)通路，導(dǎo)致基因表達(dá)程序發(fā)生重大改變，影響大多數(shù)癌癥特征，如對(duì)增殖和死亡誘導(dǎo)信號(hào)的反應(yīng)［ 20， 23］。癌細(xì)胞系中EMT 標(biāo)記物的表達(dá)水平可表明EMT的程度，包括細(xì)胞粘附蛋白（如E-cad）表達(dá)的下調(diào)和間質(zhì)標(biāo)記物（如N-cad、Vim）表達(dá)的增強(qiáng)，其中，鈣粘蛋白是一類跨膜蛋白，與連接蛋白一起參與細(xì)胞粘附，波形蛋白是間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞骨架的主要成分［24-26］。這與本研究結(jié)果一致。本研究通過(guò)鬼筆環(huán)肽染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上調(diào)CEACAM6 表達(dá)后，細(xì)胞質(zhì)中肌動(dòng)蛋白熒光減弱；下調(diào)CEACAM6表達(dá)后，細(xì)胞質(zhì)中肌動(dòng)蛋白熒光增強(qiáng)，肌絲在細(xì)胞質(zhì)中無(wú)規(guī)則排列。表明CEACAM6 可影響鼻咽癌細(xì)胞的細(xì)胞骨架重組。Western blotting檢測(cè)表明上調(diào)CEACAM6 后E-cad 的表達(dá)水平升高，Ncad和Vim的表達(dá)水平降低；下調(diào)CEACAM6 表達(dá)后，E-cad 表達(dá)水平降低，N-cad 和Vim的表達(dá)水平升高。這些結(jié)果表明CEACAM6 上調(diào)可抑制鼻咽癌細(xì)胞的EMT 轉(zhuǎn)化。既往研究報(bào)道，F(xiàn)N1 參與調(diào)控許多癌癥EMT，主要表現(xiàn)為間充質(zhì)標(biāo)志物波形蛋白（Vim）的表達(dá)增加，而上皮標(biāo)志物E-cad 的表達(dá)減少［27， 28］。與纖連蛋白結(jié)合的整合素α-5/β-1 也可直接或間接參與EMT進(jìn)程［17］。研究表明ITGA5 可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT［18， 29］。ITGB1 的表達(dá)與EMT特征相關(guān)，包括介導(dǎo)EMT的轉(zhuǎn)錄因子SNAIL/SNAI1，阻斷ITGB1可下調(diào)間質(zhì)基因并上調(diào)E-cad 蛋白的表達(dá)［19， 30， 31］。這些表明，CEACAM6 可能通過(guò)調(diào)控FN1/ITGA5/ITGB1 影響鼻咽癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程，為揭示鼻咽癌進(jìn)展?jié)撛跈C(jī)制和未來(lái)靶向治療提供了新思路。本研究的局限性：研究?jī)H闡明了CEACAM6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲遷移能力的影響，CEACAM6對(duì)鼻咽癌的其他生物學(xué)功能可能被忽視；本研究只分析了CEACMA6 對(duì)鼻咽癌細(xì)胞EMT進(jìn)程的影響，不能排除CEACAM6對(duì)其他潛在信號(hào)通路的調(diào)控作用。

綜上所述，本研究表明CEACAM6 在鼻咽癌中低表達(dá)，并影響鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力。CEACAM6 可能通過(guò)調(diào)控FN1/ITGA5/ITGB1 來(lái)影響EMT進(jìn)程，從而影響鼻咽癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。

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（編輯：余詩(shī)詩(shī)）