【摘要】 背景 隨著失眠的發(fā)病率逐漸升高，其嚴(yán)重影響患者的精神及工作狀態(tài)。腸道菌群被認(rèn)為是失眠的一個(gè)危險(xiǎn)因素，但目前存在相關(guān)證據(jù)較為缺乏的問(wèn)題，難以準(zhǔn)確認(rèn)識(shí)二者之間的關(guān)系。目的 使用兩樣本孟德?tīng)栯S機(jī)化作為研究方法，探索腸道菌群與失眠之間的因果關(guān)系。方法 使用MiBioGen聯(lián)盟進(jìn)行的最大可用全基因組關(guān)聯(lián)研究薈萃分析（n=18 340）中腸道菌群的匯總統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，根據(jù)預(yù)設(shè)的閾值提取與196種腸道微生物相對(duì)豐度顯著相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）作為工具變量（IVs）。失眠的匯總統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來(lái)自英國(guó)生物樣本庫(kù)（UK Biobank）（n=462 341）。采用逆方差加權(quán)法（IVW）、MR-Egger回歸、加權(quán)中位數(shù)法（WME）、加權(quán)眾數(shù)法（WM）等檢測(cè)腸道菌群與失眠之間的因果關(guān)系，其中以IVW法為主，根據(jù)效應(yīng)指標(biāo)優(yōu)勢(shì)比（OR）和95%置信區(qū)間（CI）評(píng)估結(jié)果。結(jié)合敏感性分析、異質(zhì)性檢驗(yàn)、基因多效性檢驗(yàn)和異常值檢驗(yàn)（MR-PRESSO）等方法來(lái)驗(yàn)證結(jié)果的穩(wěn)定性和可靠性。并對(duì)發(fā)現(xiàn)與失眠有因果關(guān)系的菌群進(jìn)行反向孟德?tīng)栯S機(jī)化分析。結(jié)果 IVW結(jié)果顯示薔薇菌屬（OR=0.787，95%CI=0.671～0.923，PFDR=0.016）、丹毒桿菌屬（OR=0.880，95%CI=0.794～0.976，PFDR=0.077）、副普雷沃菌屬（OR=0.891，95%CI=0.801～0.991，PFDR=0.083）、瘤胃球菌屬UCG014組（OR=0.818，95%CI=0.697～0.961，PFDR=0.072）、巴斯德菌科（OR=0.897，95%CI=0.814～0.988，PFDR=0.081）、巴斯德菌目（OR=0.897，95%CI=0.814～0.988，PFDR=0.094）和失眠有關(guān)，未發(fā)現(xiàn)IVs存在基因多效性或顯著異質(zhì)性。根據(jù)反向孟德?tīng)栯S機(jī)化分析結(jié)果，失眠對(duì)腸道菌群無(wú)顯著的因果影響。結(jié)論 薔薇菌屬、丹毒桿菌屬、副普雷沃菌屬、瘤胃球菌屬UCG014組、巴斯德菌科、巴斯德菌目6種腸道菌群豐度與失眠的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)，即豐度降低會(huì)增加失眠的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，為失眠的保護(hù)因素。

【關(guān)鍵詞】 腸道菌群；失眠；孟德?tīng)栯S機(jī)化；因果關(guān)聯(lián)

【中圖分類號(hào)】 R 741 R 378.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0656

Based on Mendelian Randomization to Explore the Causal Relationship with Insomnia and Gut Microbiota

GUO Yumeng1，CUI Yanglin1，ZHANG Xianzhong2*

1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China

2.Classic Department of Chinese Medicine，Rizhao Hospital of Traditional Chinese Medicine，Rizhao 276800，China

*Corresponding author：ZHANG Xianzhong，Chief physician；E-mail：rzzxz@163.com

【Abstract】 Background As the prevalence of insomnia is gradually increasing，it is seriously affecting the mental and work status of patients. The gut microbiota is considered to be a risk factor for insomnia，but there is a relative lack of evidence to accurately recognize the relationship between gut microbiota and insomnia. Objective Using two-sample Mendelian randomization as a research methodology to explore the causal relationship between gut microbiota and insomnia. Methods Single nucleotide polymorphisms（SNPs） significantly associated with the relative abundance of 196 gut microorganisms were extracted as instrumental variables（IVs） according to predefined thresholds using pooled statistics of the gut microbiota from the largest available genome-wide meta-analysis of association studies conducted by the MiBioGen consortium（n=18 340）. Pooled statistics for insomnia were obtained from the UK Biobank（n=462 341）. Inverse variance weighting（IVW），MR-Egger regression，weighted median（WME），and weighted multinomial（WM） were used to detect the causal relationship between gut microbiota and insomnia，with IVW being the predominant method，and the results were assessed according to the effect indicator dominance ratio（OR） and 95% confidence interval（CI）. Sensitivity analysis，heterogeneity test，gene multiplicity test，MR multiplicity residual and outlier test（MR-PRESSO） were combined to verify the stability and reliability of the results. Reverse Mendelian randomization analysis was also performed on the colonies found to be causally associated with insomnia. Results IVW results showed that genus_Roseburia（OR=0.787，95%CI=0.671-0.923，PFDR=0.016），genus_Erysipelatoclostridium（OR=0.880，95%CI=0.794-0.976，PFDR=0.077），genus_Paraprevotella（OR=0.891，95%CI=0.801-0.991，PFDR=0.083），genus_Ruminococcaceae UCG014（OR=0.818，95%CI=0.697-0.961，PFDR=0.072），family_Pasteurellaceae（OR=0.897，95%CI=0.814-0.988，PFDR=0.081），order_Pasteurellales（OR=0.897，95%CI=0.814-0.988，PFDR=0.094） were associated with insomnia，and no genetic pleiotropy or significant heterogeneity of IVs was found. According to the results of reverse MR analysis，insomnia had no significant causal effect on gut microbiota. Conclusion The abundance of six species of GM from the genus_Roseburia，genus_Erysipelatoclostridium，genus_Paraprevotella，genus_Ruminococcaceae UCG014 group，family_Pasteurellaceae，and order_Pasteurellales is negatively correlated with the risk of developing insomnia，i.e.，decreased abundance increased the risk of developing insomnia and is a protective factor against insomnia.

【Key words】 Intestinal flora；Insomnia；Mendelian randomization；Causal correlation

失眠是一種常見(jiàn)的臨床疾病，其特征是難以入睡，或夜間易醒［1］。10%～20%的患者有失眠，其中50%為慢性進(jìn)展。據(jù)估計(jì)，全世界約有1/5的人患有失眠［2］。腸道菌群（gut microbiota，GM）是一個(gè)動(dòng)態(tài)而復(fù)雜的生態(tài)細(xì)菌群落［3］，近年來(lái)，越來(lái)越多的證據(jù)表明，GM的失衡與失眠密切相關(guān)，維持平衡的腸道微生物種群在失眠調(diào)節(jié)中起重要作用［4］。既往研究指出，腸道細(xì)菌可以通過(guò)腦-腸道-微生物群（brain-gut-microbiot axis，BGM）軸，影響人體的神經(jīng)、免疫、代謝和內(nèi)分泌系統(tǒng)，進(jìn)而導(dǎo)致睡眠異常［5］，如PETRA等［6］證實(shí)，GM能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)活性分子的合成，例如乙酰膽堿、兒茶酚胺、γ-氨基丁酸、組胺、褪黑激素和血清素等，這些物質(zhì)對(duì)正常睡眠起重要作用。亦有研究表明，失眠患者GM的組成和結(jié)構(gòu)與健康人群有明顯不同［7］。但是，與失眠相關(guān)的腸道微生物群和血清代謝物在很大程度上仍然未知。

孟德?tīng)栯S機(jī)化（Mendelian randomization，MR）是一種利用遺傳變異構(gòu)建暴露的工具變量（instrumental variables，IVs），以估計(jì)暴露與結(jié)局疾病之間的因果關(guān)系的方法［8］。由于基因型從父母到后代的分配是隨機(jī)的，故可視為隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（randomized controlled trials，RCT）的一種替代方法［9］，且遺傳變異與結(jié)局之間的關(guān)聯(lián)不受常見(jiàn)混雜因素的影響，因果序列是合理的［10］。目前MR已被廣泛用于探索GM與疾病間的因果關(guān)系，包括代謝性疾病［11］、自身免疫性疾病［12］等。本研究使用來(lái)自MiBioGen和UK Biobank的全基因組關(guān)聯(lián)研究（Genome Wide Association Study，GWAS）匯總統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，進(jìn)行兩樣本孟德?tīng)栯S機(jī)化（two-sample Mendelian randomization，TSMR）分析，以評(píng)估GM與失眠之間的因果關(guān)系，并找尋與失眠相關(guān)的腸道微生物。

1 資料與方法

1.1 研究設(shè)計(jì)

本研究采用TSMR的方法，以GM作為暴露，失眠作為結(jié)局，探究GM與失眠間的因果關(guān)聯(lián)，主要以逆方差加權(quán)法（inverse-variance weighted，IVW）方法為主，然后進(jìn)行敏感性分析、異質(zhì)性檢驗(yàn)、基因多效性檢驗(yàn)以及異常值檢驗(yàn)（MR pleiotropy residual sum and outlier，MR-PRESSO）等方法來(lái)驗(yàn)證結(jié)果的可靠性。

MR分析需滿足以下3個(gè)假設(shè)：（1）IVs與暴露需有較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)（關(guān)聯(lián)性假設(shè)）；（2）IVs不應(yīng)通過(guò)混雜因素與結(jié)果相關(guān)（獨(dú)立性假設(shè)）；（3）IVs不能直接影響結(jié)局，而只能通過(guò)暴露（排他性假設(shè)），見(jiàn)圖1。

1.2 數(shù)據(jù)來(lái)源

選取GM相關(guān)單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）作為暴露的IVs。這些SNPs的匯總數(shù)據(jù)來(lái)自MiBioGen聯(lián)盟，該聯(lián)盟分析了18 340名不同種族和國(guó)籍的參與者的16S rRNA基因測(cè)序數(shù)據(jù)（72.3%的人口是歐洲人，其余為來(lái)自中東、東亞、美國(guó)西班牙裔/拉丁裔和非裔美國(guó)人）［13］；失眠的遺傳數(shù)據(jù)來(lái)自UK Biobank，通過(guò)IEU OpenGWAS project（https：//gwas.mrcieu.ac.uk/）訪問(wèn)該數(shù)據(jù)（GWAS ID：ukb-b-3957），樣本包括462 341名健康歐洲參與者，共有9 851 867個(gè)SNPs。

1.3 工具變量的選擇

211種腸道微生物剔除15種未知菌屬后，本研究共納入196種腸道微生物，采用以下標(biāo)準(zhǔn)篩選IVs：（1）在基因位點(diǎn)范圍內(nèi)顯著性閾值（Plt;1.0×10-5）的SNPs被選作潛在的IVs［11］；（2）連鎖不平衡閾值設(shè)置為r2lt;0.001；（3）聚集窗口大小設(shè)置為10 000 kb，以確保納入的SNPs之間相互獨(dú)立。最后，從結(jié)局變量中提取上述選定的SNPs 數(shù)據(jù)。

為排除弱工具變量偏差對(duì)關(guān)聯(lián)效應(yīng)估計(jì)的影響，使用F值來(lái)檢驗(yàn)工具變量的強(qiáng)度，計(jì)算公式如下：F=β2/SE2［14］，β為效應(yīng)值，SE為標(biāo)準(zhǔn)誤，若Fgt;10，則認(rèn)為沒(méi)有顯著的弱工具偏倚［15］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用R（版本4.3.1）中的TwoSampleMR軟件包（版本0.5.7）、MR-PRESSO軟件包（版本1.0）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

本研究主要采用IVW進(jìn)行分析，計(jì)算OR值和95%CI，評(píng)估腸道微生物豐度與失眠發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的潛在因果關(guān)聯(lián)，結(jié)合MR-Egger回歸、加權(quán)中位數(shù)法（weighted median，WME）、加權(quán)眾數(shù)法（weighted mode，WM）作為IVW的補(bǔ)充方法。當(dāng)IVW方法的Plt;0.05，且MR-Egger回歸，WME和WM方向相同時(shí)，即考慮為相對(duì)穩(wěn)定的因果關(guān)聯(lián)［9］。

此外，分析MR-Egger截距項(xiàng)（Egger-intercept）可識(shí)別水平多效性，若Egger-intercept無(wú)限接近0或無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，表明不存在基因多效性［16］，本研究還采用了MR-PRESSO方法，該方法可以檢測(cè)可能的異常值，并在剔除離群值（Plt;0.05）后重新進(jìn)行因果分析［17］。使用留一法（leave-one-out）進(jìn)行敏感性分析，通過(guò)依次刪除單個(gè)SNP計(jì)算剩余SNPs的合并效應(yīng)值，以此判斷每個(gè)SNP對(duì)因果關(guān)系的影響［18］。為了測(cè)量異質(zhì)性的程度，應(yīng)用Cochran Q檢驗(yàn)，IVW Q統(tǒng)計(jì)量用于量化IVs的異質(zhì)性，評(píng)估IVs之間是否存在潛在的異質(zhì)性，Plt;0.05提示存在顯著異質(zhì)性。

為了避免結(jié)果因多重檢驗(yàn)出現(xiàn)假陽(yáng)性，故進(jìn)行錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）校正，以PFDRlt;0.1為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［10，19］。當(dāng)Plt;0.05但PFDR≥0.1時(shí)，GM和失眠被認(rèn)為具有潛在關(guān)聯(lián)。

為了評(píng)估GM與失眠之間的因果關(guān)系，本研究還對(duì)在正向MR分析中發(fā)現(xiàn)與失眠有因果關(guān)系的細(xì)菌進(jìn)行了反向MR分析，采用的方法和設(shè)置與正向一致。

2 結(jié)果

2.1 工具變量

去除15個(gè)未知菌屬，本研究共納入196種腸道微生物，包括9門、16綱、20目、32科、119屬，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)篩選后得到2 774個(gè)與GM相關(guān)的SNPs。其中F值均gt;10，消除了弱工具變量產(chǎn)生的偏倚。分析流程見(jiàn)圖2。

2.2 MR分析

本研究采用4種TSMR方法，其中以IVW方法為主，并用FDR方法校正分析結(jié)果，詳見(jiàn)表1。IVW結(jié)果顯示，6種腸道微生物與失眠存在因果關(guān)聯(lián)（PFDRlt;0.1），在屬水平上，薔薇菌屬（OR=0.787，95%CI=0.671～0.923，PFDR=0.016）、丹毒桿菌屬（OR=0.880，95%CI=0.794～0.976，PFDR=0.077）、副普雷沃菌屬（OR=0.891，95%CI=0.801～0.991，PFDR=0.083）、瘤胃球菌屬UCG014組（OR=0.818，95%CI=0.697～0.961，PFDR=0.072）與失眠風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)；另外還發(fā)現(xiàn)巴斯德菌科（OR=0.897，95%CI=0.814～0.988，PFDR=0.081）、巴斯德菌目（OR=0.897，95%CI=0.814～0.988，PFDR=0.094）這兩種腸道微生物豐度增加，也會(huì)降低失眠的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。如圖3所示，4種TSMR方法的效應(yīng)值方向一致，故認(rèn)為以上6種腸道微生物為失眠的保護(hù)因素。此外擬桿菌類、腸道桿菌屬、瘤胃球菌屬UCG003組、擬桿菌目、脫硫弧菌目、廣古菌門、黏膠球形菌門與失眠的IVW分析Plt;0.05，但在FDR校正后不再顯著（PFDRgt;0.1），故提示上述7類腸道微生物與失眠具有潛在性關(guān)聯(lián)。

2.3 質(zhì)量控制

留一法分析顯示，當(dāng)逐個(gè)去除SNP時(shí)，剩余SNPs的合并效應(yīng)與總效應(yīng)之間無(wú)實(shí)質(zhì)性差異，具體見(jiàn)圖4。如表2所示，MR-PRESSO分析結(jié)果亦顯示不存在離群值（Pgt;0.05），進(jìn)一步驗(yàn)證了結(jié)果的可靠性。另外Cochran Q檢驗(yàn)、Egger-intercept 檢驗(yàn)結(jié)果P值均gt;0.05，表明本研究的IVs沒(méi)有顯著的異質(zhì)性，結(jié)果不受基因多效性的影響。

2.4 反向MR分析

通過(guò)對(duì)正向MR分析中與失眠存在顯著或潛在因果關(guān)系的13個(gè)腸道微生物群（2個(gè)門、1個(gè)綱、3個(gè)目、1個(gè)科、6個(gè)屬）進(jìn)行反向MR分析。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)失眠與上述腸道菌群具有因果關(guān)聯(lián)（Pgt;0.05）。

3 討論

本研究使用MiBioGen和UK Biobank的GWAS匯總數(shù)據(jù)，經(jīng)過(guò)TSMR分析，發(fā)現(xiàn)薔薇菌屬、丹毒桿菌屬、副普雷沃菌屬、瘤胃球菌屬UCG014組、巴斯德菌科、巴斯德菌目相對(duì)豐度與失眠的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)。

近年來(lái)有研究認(rèn)為GM與失眠具有一定相關(guān)性，如CHOI等［20］發(fā)現(xiàn)GM所表現(xiàn)出晝夜節(jié)律，與宿主晝夜節(jié)律存在相互作用，TEICHMAN等［21］證實(shí)GM衍生物短鏈脂肪酸（SCFAs）（主要是乙酸、丙酸和丁酸）可改變晝夜節(jié)律，并影響時(shí)鐘基因的表達(dá)，可見(jiàn)GM與睡眠時(shí)間節(jié)律存在聯(lián)系。有學(xué)者提出BGM軸是GM參與失眠發(fā)病的重要途徑［5］，因BGM軸是一個(gè)復(fù)雜的雙向通信系統(tǒng)，其主要由神經(jīng)、免疫、代謝和內(nèi)分泌途徑組成，能緊密連接腸道和大腦，故炎性因子、腸道代謝產(chǎn)物、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、迷走神經(jīng)皆可經(jīng)此影響睡眠［22］。關(guān)于GM經(jīng)由BGM軸與失眠發(fā)病相關(guān)的機(jī)制有以下5種說(shuō)法：（1）下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸：有研究發(fā)現(xiàn)，某些腸道益生菌可以調(diào)控HPA軸相關(guān)的應(yīng)激反應(yīng)［23］，而HPA軸活躍會(huì)改變腸道通透性并釋放更多的皮質(zhì)醇［24］，經(jīng)此可產(chǎn)生更多影響睡眠的炎癥因子，進(jìn)而導(dǎo)致睡眠時(shí)間變淺，夜間覺(jué)醒增加［25］；（2）神經(jīng)遞質(zhì)：失眠與神經(jīng)遞質(zhì)密切相關(guān)，例如γ-氨基丁酸（GABA）和5-羥色胺（5-HT）均有正向調(diào)節(jié)睡眠的作用，研究發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌和雙歧桿菌等益生菌能夠產(chǎn)生GABA和促進(jìn)5-HT的轉(zhuǎn)化，表明GM可以通過(guò)調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)從而影響睡眠［26-27］；（3）免疫系統(tǒng)：IMERI等［28］研究發(fā)現(xiàn)，中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）中白介素1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）發(fā)出信號(hào)傳導(dǎo)可調(diào)節(jié)睡眠-覺(jué)醒行為，一項(xiàng)臨床研究亦表明，慢性失眠患者的IL-1β水平顯著升高，說(shuō)明失眠與炎癥有一定聯(lián)系。GM失調(diào)可損傷腸道屏障，介導(dǎo)人體炎癥反應(yīng)，進(jìn)而影響CNS導(dǎo)致失眠［29］；（4）代謝產(chǎn)物：有證據(jù)顯示，GM產(chǎn)生的代謝物是促進(jìn)睡眠信號(hào)的重要來(lái)源，尤其是SCFA，該物質(zhì)在GM食物發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生，其作用可以減輕炎癥，增強(qiáng)腸道屏障［5，30］，是一個(gè)潛在誘導(dǎo)睡眠的信號(hào)分子，若GM失調(diào)而使SCFA產(chǎn)生減少，可增加失眠風(fēng)險(xiǎn)；（5）迷走神經(jīng)：連接大腦和GM的主要信號(hào)通路之一是迷走神經(jīng)［31］，有研究發(fā)現(xiàn)益生菌可通過(guò)增加小鼠中樞γ-氨基丁酸（GABA）受體的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)睡眠［32］。

既往臨床研究亦顯示，失眠患者GM的組成和多樣性顯著改變，如XU等［7］通過(guò)對(duì)失眠個(gè)體和健康個(gè)體中GM相對(duì)豐度的比較，發(fā)現(xiàn)失眠患者的厚壁菌與擬桿菌比例顯著降低，且擬桿菌是失眠組中的主要分類群。ZHOU等［33］發(fā)現(xiàn)失眠患者的擬桿菌科、瘤胃球菌科和擬桿菌屬顯著減少，而普雷沃菌科和普雷沃菌屬顯著增加。上述研究表明GM可能與失眠存在相關(guān)性，但失調(diào)的菌群種類沒(méi)有統(tǒng)一，研究結(jié)論尚存在一定爭(zhēng)議。

本研究發(fā)現(xiàn)薔薇菌屬、丹毒桿菌屬、副普雷沃菌屬、瘤胃球菌屬UCG014組、巴斯德菌科、巴斯德菌目等6類GM豐度失調(diào)與失眠有顯著相關(guān)性，且6類菌群的OR值均lt;1，故皆為失眠的保護(hù)性因素，其中尤以薔薇菌屬最為重要，該菌屬由專性革蘭陽(yáng)性厭氧菌組成，能夠產(chǎn)生一種抗炎SCFA——丁酸鹽，有研究顯示丁酸鹽可顯著促進(jìn)大鼠和小鼠的非快速眼動(dòng)睡眠，故被認(rèn)為是誘導(dǎo)睡眠潛在的信號(hào)分子［34-35］。若薔薇菌屬豐度降低，可能通過(guò)影響丁酸鹽的產(chǎn)生進(jìn)而導(dǎo)致睡眠異常。瘤胃球菌屬是消化球菌科的革蘭陽(yáng)性厭氧細(xì)菌屬，既往研究發(fā)現(xiàn)瘤胃球菌科在失眠患者體內(nèi)亦明顯減少［33］。副普雷沃菌屬是2009年建立的屬分類學(xué)，在系統(tǒng)發(fā)育和表型上與普雷沃菌屬最相似［36］，但兩物種基因組中亦存在48個(gè)不同的分泌肽酶家族［37］，既往研究發(fā)現(xiàn)失眠人群腸道中的普雷沃菌屬豐度增加［33］，但本研究認(rèn)為副普雷沃菌屬是失眠的保護(hù)性因素，說(shuō)明兩菌屬雖有相似性，但導(dǎo)致失眠的發(fā)病機(jī)制可能存在差異。

具有潛在相關(guān)性的菌群包括擬桿菌類、腸道桿菌屬、瘤胃球菌屬UCG003、擬桿菌目、脫硫弧菌目、廣古菌門、黏膠球形菌門，此類菌群Plt;0.05，但PFDRgt;0.1，故被認(rèn)為具有暗示性關(guān)聯(lián)。在既往研究中，ZHANG等［38］發(fā)現(xiàn)腸道桿菌屬在并發(fā)睡眠障礙的重度抑郁癥（major depressive disorders，MDD）患者中顯著減少。ANDERSON等［39］調(diào)查了64名老年人GM與睡眠質(zhì)量的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)高質(zhì)量的睡眠與的高比例黏膠球形菌門有關(guān)。

本研究的優(yōu)勢(shì)是利用MR方法得出GM與失眠之間的因果關(guān)系，可為后續(xù)研究提供候選的腸道微生物；且本研究樣本量較大，可較大程度避免混雜因素的干擾；此外利用MR-PRESSO和MR-Egger截距試驗(yàn)以檢測(cè)和排除基因多效性。局限性方面，首先由于暴露數(shù)據(jù)中最低的分類水平是屬，這導(dǎo)致無(wú)法在物種水平上進(jìn)一步探索GM與失眠之間的因果關(guān)系。其次為了進(jìn)行敏感性分析和水平多效性檢測(cè)，需要將更多的遺傳變異作為IVs，這樣導(dǎo)致MR分析中所用的SNPs未達(dá)到傳統(tǒng)的GWAS顯著性閾值（Plt;5×10-8），因此又用FDR校正來(lái)限制誤報(bào)的可能性。另外本研究納入的數(shù)據(jù)來(lái)源于歐洲人群，研究結(jié)果與亞洲人群可能有所差別，因此后續(xù)可在亞洲人群中進(jìn)一步研究GM與失眠發(fā)生的相關(guān)性。

綜上所述，本研究通過(guò)MR分析發(fā)現(xiàn)薔薇菌屬、丹毒桿菌屬、副普雷沃菌屬、瘤胃球菌屬UCG014組、巴斯德菌科、巴斯德菌目與失眠有因果關(guān)系，此6類腸道微生物相對(duì)豐度增加，可降低失眠發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，為失眠的診治提供新的思路，但仍需進(jìn)一步的大樣本RCT，以闡明相關(guān)菌群對(duì)失眠的保護(hù)作用及機(jī)制。

作者貢獻(xiàn)：郭玉夢(mèng)、張憲忠提出研究思路；崔楊霖設(shè)計(jì)研究方案，負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)收集、采集、清洗；郭玉夢(mèng)負(fù)責(zé)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、繪制圖表；郭玉夢(mèng)、崔楊霖負(fù)責(zé)論文起草；郭玉夢(mèng)、張憲忠負(fù)責(zé)最終版本修訂，對(duì)論文負(fù)責(zé)。

本文無(wú)利益沖突。

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（收稿日期：2024-01-03；修回日期：2024-03-29）

（本文編輯：賈萌萌）