摘 要： 旨在解析白藜蘆醇（resveratrol，RES）介導PROX1基因調(diào)控山羊骨骼肌肌纖維類型轉化的分子機制。體內(nèi)試驗部分，試驗選取12只180日齡去勢努比亞山羊（（28.25±0.26）kg）隨機分為2組，每組6個重復。以補飼0、150 mg·kg^-1 RES組山羊背最長肌組織為試驗樣品，采用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）及Western blot技術檢測PROX1基因的表達量；體外試驗，基于課題組前期試驗所篩選出的20 μmol·L^-1 RES是細胞培養(yǎng)最佳濃度，通過轉染PROX1干擾片段及干擾片段與20 μmol·L^-1 RES共處理山羊骨骼肌成肌細胞，檢測CaN/NFAT通路關鍵基因與肌纖維四型標志基因在mRNA水平及蛋白水平的表達情況；同時，利用蛋白-蛋白對接技術檢測SIRT1與PROX1蛋白是否互作，并通過SIRT1抑制劑EX-527和RES共處理山羊成肌細胞，驗證SIRT1與CaN/NFAT通路的調(diào)控關系。結果表明，與對照組相比，補飼150 mg·kg^-1 RES處理山羊成肌細胞可使SIRT1基因及CaN/NFAT通路關鍵基因的mRNA表達量極顯著上調(diào)（Plt;0.001），使MYH7蛋白的表達水平顯著上調(diào)（Plt;0.01），MYH4蛋白的表達水平顯著下降（Plt;0.01）。而干擾PROX1基因后，CaN/NFAT通路關鍵基因mRNA表達水平及MYH7、MYH4基因mRNA表達水平與蛋白表達水平的表達情況都與上述相反，該情況則在干擾片段與RES共處理成肌細胞后發(fā)生改變。蛋白-蛋白對接結果表明，SIRT1蛋白與PROX1蛋白可以互作。SIRT1抑制劑處理成肌細胞后，CaN/NFAT通路關鍵基因（NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN）的mRNA表達量較CON組顯著下調(diào)（Plt;0.01）；再經(jīng)過RES干預后，TNNC1、TNNI1的mRNA表達量極顯著上調(diào)（Plt;0.01）。本研究初步揭示了RES通過SIRT1/PROX1/CaN/NFAT途徑調(diào)控肌纖維類型轉化的機制，為后續(xù)畜禽肉品質的改良提供理論依據(jù)。

關鍵詞： 白藜蘆醇（RES）；CaN/NFAT信號通路；山羊成肌細胞；肌纖維轉化

中圖分類號：S827.1""""" 文獻標志碼：A""""" 文章編號： 0366-6964（2025）01-0201-12

收稿日期：2024-07-29

基金項目：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系廣西創(chuàng)新團隊建設項目（nycytxgxcxtd-2021-09）

作者簡介：吳少強（2000-），男，河南南陽人，碩士生，主要從事動物遺傳育種方向的研究，E-mail：2418086469@qq.com

*通信作者：蔣欽楊，主要從事動物遺傳育種方向的研究，E-mail：jiangqinyang@126.com

Mechanism of Resveratrol Regulating Myofiber Type Transformation through PROX1/SIRT1

Signaling Pathway in Goats

WU" Shaoqiang， LIU" Yufan， WEI" Yirong， HUANG" Yanna， JIANG" Qinyang*

（Guangxi Key Laboratory of Livestock and Poultry Breeding and Disease Prevention and

Control， College of Animal Science and Technology， Guangxi University， Nanning 530004，" China）

Abstract： "The aim of this study was to analyze the molecular mechanism of resveratrol （RES） regulating myofiber type transformation by mediating PROX1 gene in goat skeletal muscle. In vivo component， twelve 180-day-old depopulated Nubian goats （（28.25±0.26） kg） were randomly divided into two groups， with 6 replicates each， the PROX1 gene expression levels of in dorsal longest muscle tissues supplemented with 0 and 150 mg·kg^-1 RES were detected by real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） and Western blot. In vitro test， based on the previous research results， 20 μmol·L^-1 RES was identified as the optimal concentration for cell culture. PROX1 interference fragments and a combination of interference fragments with 20 μmol·L^-1 RES were transfected into goat skeletal muscle myoblasts. The expression levels of key genes in the CaN/NFAT pathway and the marker genes for the four muscle fiber types were measured at both mRNA and protein levels. Meanwhile， protein-protein docking technology was used to detect whether SIRT1 interacts with the PROX1 protein interact， and the regulatory relationship between SIRT1 and the CaN/NFAT pathway was verified by co-treatment of goat myoblasts with the SIRT1 inhibitor EX-527 and RES. The results showed that， compared with the control group， the expression of the SIRT1 gene and key genes in the CaN/NFAT pathway at the mRNA level in goat myoblasts treated with 150 mg·kg^-1 RES was significantly upregulated （Plt;0.001）， the expression of MYH7 protein was significantly upregulated （Plt;0.01）， and the expression of MYH4 protein was significantly downregulated （Plt;0.01）. After PROX1 gene interference， the mRNA and protein expression levels of key genes in the CaN/NFAT pathway， MYH7 and MYH4 showed opposite trends， which were altered when the interference fragments and RES co-treated the myoblasts. The protein-protein docking results indicated that SIRT1 and PROX1 proteins could interact. After myoblasts treated with the SIRT1 inhibitor， the mRNA expression levels of key genes （NFATc TNNC TNNI MYOZ2， SLN） in the CaN/NFAT pathway were significantly downregulated compared to the control group （Plt;0.01）. Following RES intervention， the mRNA expression levels of TNNC1 and TNNI1 were significantly upregulated （Plt;0.01）. This study initially revealed the mechanism of RES regulating the transformation of muscle fiber types through SIRT1/PROX1/CaN/NFAT pathway， which provides a theoretical basis for the subsequent improvement of livestock and poultry meat quality.

Key words： resveratrol（RES）; CaN/NFAT signaling pathway; goat myoblasts; myofiber transformation

*Corresponding author：JIANG Qinyang， E-mail：jiangqinyang@126.com

肌纖維是構成骨骼肌的基本單位，而肌纖維直徑、數(shù)量及類型分布都與肉質性狀密切相關^［1］。根據(jù)肌球蛋白重鏈（myosin heavy chain， MyHC）亞型，可以將肌纖維分為Ⅰ型（慢速氧化型）、ⅡA型（快速氧化型）、ⅡB型（快速酵解型）和ⅡX型（中間型）四種類型^［2］，慢速Ⅰ型肌纖維由MYH7基因編碼，ⅡA、ⅡX和ⅡB 3個快速亞型肌纖維分別由MYH2、MYH1和MYH4基因編碼^［3］。嫩度是肉品質量的重要指標，與肌纖維結構、疏松程度和化學組成有關^［4］。研究表明，肌纖維的直徑與肌肉嫩度呈正相關，Ⅰ型肌纖維與Ⅱb型肌纖維相比，直徑較細，剪切力更低，表現(xiàn)出更好的嫩度特性^［5］。肌纖維的類型在畜禽生長過程中并不是固定不變的，但不同類型肌纖維之間可以相互轉化，即遵循Ⅰ型Ⅱa型Ⅱx型Ⅱb型的順序^［6］。

果蠅Prospero 同源異形盒蛋白1（PROX1）是脊椎動物體內(nèi)的核轉錄因子，擁有2個高度保守的結構域-同源異型結構域和 Prospero 結構域^［7］。PROX1不僅能夠調(diào)控成肌細胞分化，在調(diào)控骨骼肌肌纖維類型轉化中也具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，PROX1在人、嚙齒動物的慢肌上能夠異性表達，不僅如此，PROX1基因能夠激活Ｔ細胞核因子（NFAT）信號通路從而維持慢肌纖維類型特異基因表達^［8］；研究證明PROX1的缺失能夠促進肌纖維類型由慢肌纖維向快肌纖維的轉化^［9-10］。

CaN是一種鈣離子/鈣調(diào)蛋白激活的磷酸酶，它與細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化密切相關。在肌纖維類型轉換中，CaN主要通過調(diào)節(jié)NFAT的活性影響肌細胞增強因子2（MEF2）等相關基因的表達，從而導致肌纖維的類型轉變^［11］。研究發(fā)現(xiàn)，穴位埋線使運動性疲勞模型大鼠通過CaN/NFAT信號途徑，參與了MHC亞型的轉化，增加了比目魚肌II型肌纖維轉向I型肌纖維的優(yōu)勢^［12］。研究發(fā)現(xiàn)， 鴨發(fā)育早期骨骼肌中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶α（CnAα）與肌纖維類型和肌纖維生長發(fā)育密切相關^［13］。作為免疫抑制藥物環(huán)孢菌素A和FK506的靶點，NFAT（活化T細胞核因子）家族的轉錄因子一直是備受關注的焦點。NFAT轉錄因子家族的大多數(shù)成員是鈣調(diào)磷酸酶活性的底物^［14-15］。研究表明，鈣/鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶/NFAT信號在脊椎動物的心血管和骨骼肌發(fā)育中至關重要^［16］。研究結果顯示，10 mmol·L^-1甜菜堿通過上調(diào)NFATc1基因表達促進 C2C12 成肌細胞的分化，調(diào)節(jié)快速到緩慢肌肉纖維類型的轉換^［17］。

白藜蘆醇（resveratrol）是一種多酚類化合物，存在于多種植物中，其中在葡萄皮和紅酒中含量尤其豐富^［18］。RES具有廣泛的生物活性，具有抗炎癥和抗氧化作用，預防早期動脈粥樣硬化，治療肥胖和糖尿病^［19］。研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加 RES 可以改善豬背最長肌肉，并且通過 lncRNA-KEAP1-NRF2 軸改善豬骨骼肌的抗氧化反應，從而最終改善肉質性狀^［20］。適當添加RES可以通過刺激IRS1/AKT/p70S6K/4EBP1通路促進山羊成肌細胞分化，進而提高育肥山羊的產(chǎn)肉性能、凈肉率和改善肉質^［21］。而且諸多研究報道RES是沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）的天然激活劑。例如，RES通過SIRT1/ERK1/2/NF-kB信號通路下調(diào)血管平滑肌細胞中的內(nèi)皮素B型受體^［22］；研究發(fā)現(xiàn)RES通過激活SIRT1/PGC-1α信號通路促進線粒體生物發(fā)生，進而促進牛肌管肌纖維類型的轉化^［23］。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在努比亞山羊中過表達PROX1基因可以通過激活CaN/NFAT信號通路促進快速酵解型肌纖維向慢速氧化型肌纖維的轉化^［24］。因此，本研究擬通過體外體內(nèi)試驗探究RES通過激活SIRT1基因調(diào)控PROX1/CaN/NFAT信號通路影響肌纖維類型轉化的作用途徑，解釋RES改善山羊肉品質的分子機制。

1 材料與方法

1.1 采樣對象

試驗選取12只180日齡健康狀況良好去勢努比亞山羊（（28.25±0.26）kg），隨機分為2組，分別為CON組（飼喂基礎日糧）、RES組（基礎日糧+150 mg·kg^-1 RES），每組6個重復。山羊自由采食基礎日糧，自由飲水和舔食鹽磚。本研究RES 為白色粉末狀固體，購自中國西安萬方生物科技有限公司，純度為98.9%。試驗期為120 d 飼喂試驗結束時，禁食24 h、禁水2 h屠宰取山羊背最長肌組織為試驗樣品。山羊骨骼肌成肌細胞（3月齡胎羊）由廣西大學動物科學技術學院遺傳育種實驗室儲存。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)

從液氮罐中取出5代山羊成肌細胞，立刻放入37 ℃水浴鍋中解凍，后1 000 r·min^-1離心5 min，棄掉凍存液，加1 mL 10% FBS，重懸細胞，將細胞懸液移入培養(yǎng)皿，加入2 mL 10% FBS，混勻后置于 37 ℃、50 mL·L^-1 CO 2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞匯合度達到70%左右時開始傳代，進行后續(xù)試驗。

1.2.2 細胞轉染

將細胞接種于6孔板上，當細胞密度約70%時進行細胞轉染。將試劑A（Opti-MEM培養(yǎng)基375 μL、Lipofectamine^TM 3000 11.25 μL）加到試劑B（Opti-MEM培養(yǎng)基 375 μL、P3000TM Reagent 15 μL、PROX1干擾片3.75 μg）中，室溫靜置15 min。加入6孔板中，培養(yǎng)48 h后收取細胞。PROX1基因干擾序列為GCGATGTCATCATTCCGAA。

1.2.3 細胞誘導分化

將培養(yǎng)皿中的細胞傳至6孔板中培養(yǎng)。待細胞匯合度約80%時，棄掉培養(yǎng)基，PBS清洗細胞，棄掉PBS，向孔中加入2 mL誘導分化培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每2 d換液一次，并在顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。

1.2.4 總RNA提取和cDNA合成

1.2.4.1 細胞總RNA提?。?/p>

取出培養(yǎng)皿，棄掉廢液，PBS清洗2～3次，加入1 mL Trizol，10～15 min后吹打重懸，轉入1.5 mL的EP管中，使用Trizol法對細胞總RNA進行提取，使用紫外分光光度計測定 RNA 的濃度及純度。

1.2.4.2 組織總RNA提?。?/p>

剪0.5 cm3大小組織于1.5 mL離心管中，加入1 mL Trizol，置于冷凍研磨儀中研磨10 min，后續(xù)步驟同“1.2.4.1”。

1.2.4.3 cDNA合成：

利用RNA PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser試劑盒反轉錄為cDNA，具體操作步驟按照說明書進行。合成后的cDNA置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.5 實時熒光定量PCR檢測基因表達水平

根據(jù)GenBank發(fā)布的山羊基因序列，用Primer Premier 5.0設計基因特異性引物，引物序列見表 以GAPDH基因為內(nèi)參，所有引物由南寧捷尼斯生物科技有限公司合成。反應程序為：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共 40 個循環(huán)。每個樣品進行3次重復，用2^-ΔΔCt法^［25］計算基因的相對表達量。

1.2.6 Western blot

將細胞胰酶消化收集于1.5 mL離心管中。加入250 μL的含有蛋白酶抑制劑混合物（PMSF， 1 mmol·L^-1）的RIPA裂解液，充分裂解細胞30 min，4 ℃、12 000 r·min^-1離心5 min，吸取上清。BCA試劑盒測定蛋白濃度進行SDS-PAGE檢測MYH7、MYH4蛋白的表達量。

1.2.7 siRNA-PROX1和RES共處理山羊成肌細胞

試驗設置為3組，分別是對照組（CON組）、干擾組（siRNA-PROX1組）和siRNA-PROX1和RES共處理組（siRNA-PROX1+RES組），每組設置3個生物學重復。轉染48 h后，觀察細胞狀態(tài)，siRNA-PROX1+RES組更換為含 20 μmol·L^-1 RES的誘導分化培養(yǎng)基，CON組與siRNA-PROX1組更換為含等量DMSO的誘導分化培養(yǎng)基，誘導分化 6 d。

1.2.8 SIRT1蛋白與PROX1蛋白對接

1.2.8.1 蛋白結構預處理：

使用的蛋白結構文件來自PDB數(shù)據(jù)庫（HTTPS：//WWW.RCSB. ORG/），通過discovery studio軟件進行蛋白質的預處理，刪除其中的水分子、加氫以及電荷，提取結構中的原配體，并轉化蛋白質為PDBQT格式，并運用pymol軟件進行處理后蛋白的可視化。

1.2.8.2 蛋白-蛋白對接：

使用discovery studio軟件中的ZDOCK模塊進行蛋白與蛋白對接；利用pymol分析蛋白之間的極性相互作用；利用ligplot分析蛋白之間的二維相互作用。

1.2.9 SIRT1抑制劑EX-527和RES共處理山羊成肌細胞

試驗設置為3組，分別為對照組（CON組）、EX-527處理組（EX-527組）、EX-527與RES共處理組（EX-527+RES組），EX-527+RES組細胞用 10 μmol·L^-1 EX-527處理 48 h后更換含 20 μmol·L^-1 RES的誘導分化培養(yǎng)基，EX-527組細胞用 10 μmol·L^-1 EX-527處理 48 h后更換含等量DMSO的誘導分化培養(yǎng)基，每組 3個生物學重復，誘導分化 6 d。

1.2.10 數(shù)據(jù)分析

所有結果基于3～7個獨立生物學重復，采用SPSS 24.0軟件分析試驗數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)結果用“平均值±標準誤（mean±SEM）”表示，*Plt;0.05表示數(shù)據(jù)差異顯著，**Plt;0.01及***Plt;0.001表示數(shù)據(jù)差異極顯著，使用GraphPad Prism（v. 10.0.3）作圖。

2 結 果

2.1 RES對山羊背最長肌CaN/NFAT信號通路的影響

利用RT-qPCR檢測對照組與150 mg·kg^-1 RES組山羊背最長肌肌纖維四型標志基因與CaN/NFAT信號通路關鍵基因的表達情況發(fā)現(xiàn)，150 mg·kg^-1 RES組NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN和MYH7基因的mRNA表達量極顯著高于CON組（Plt;0.01），而MYH2和MYH4基因的mRNA表達量顯著低于CON組（Plt;0.05）（圖1A）。Western blot檢測MYH7與MYH4蛋白表達水平，結果表明R150組MYH7蛋白的表達水平與CON組相比極顯著上調(diào)（Plt;0.01），MYH4蛋白的表達水平極顯著降低（Plt;0.01）（圖1B、C）。

2.2 RES對山羊成肌細胞肌纖維四型標志基因及CaN/NFAT信號通路的影響

利用 20 μmol·L^-1 RES處理成肌細胞誘導分化 6 d，進行RT-qPCR檢測，結果如圖2所示，在成肌細胞分化 6 d時RES處理組NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN和MYH7、MYH2、MYH1基因mRNA表達量顯著升高（Plt;0.05），MYH4基因mRNA表達量極顯著降低（Plt;0.001）。

2.3 siRNA-PROX1和RES共處理對CaN/NFAT通路的影響

RT-qPCR結果如圖3A所示，干擾PROX1基因后，NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN和MYH7基因mRNA表達量顯著下調(diào)（Plt;0.001），MYH4基因mRNA表達量顯著上調(diào)（Plt;0.05）。Western blot結果如圖3B、C所示，干擾PROX1基因后，MYH7蛋白的表達水平極顯著下調(diào)（Plt;0.01），MYH4蛋白的表達水平顯著上調(diào)（Plt;0.05）；而siRNA-PROX1+RES組與siRNA-PROX1組相比，MYH7蛋白的表達水平極顯著上調(diào)（Plt;0.001），MYH4蛋白的表達水平顯著下調(diào)（Plt;0.05）。表明干擾PROX1基因可以抑制CaN/NFAT信號通路關鍵基因的表達，而RES可以挽救由于PROX1基因抑制對CaN/NFAT信號"" 通路及肌纖維四型基因造成的影響。

體外體內(nèi)試驗結果表明，RES能夠上調(diào)PROX1基因，激活CaN/NFAT信號通路，促進肌纖維類型由快速酵解型轉化為慢速氧化型，進而改善山羊的肉質。

2.4 RES對SIRT1基因表達的影響

國內(nèi)外研究表明，RES可作為SIRT1基因的激動劑，能夠直接激活SIRT1基因，為檢測RES對SIRT1基因的影響，本試驗對CON組與補飼150 mg·kg^-1 RES組山羊背最長肌的SIRT1基因的mRNA表達水平進行RT-qPCR檢測，結果如圖4A所示，與CON組相比，150 mg·kg^-1 RES極顯著上調(diào)SIRT1基因的mRNA表達水平（Plt;0.01）。利用RT-qPCR檢測成肌細胞RES組與CON組SIRT1基因的mRNA表達水平，結果如圖4B所示，與CON組相比，RES組SIRT1基因的mRNA表達水平極顯著上調(diào)（Plt;0.001）。

2.5 SIRT1與PROX1的蛋白對接

2.5.1 蛋白3D結構的預處理

從PDB數(shù)據(jù)庫中查詢PROX1和SIRT1蛋白結構，通過discovery studio軟件預處理蛋白質，并使用pymol軟件對處理后的蛋白進行可視化，結果如圖5所示。

2.5.2 蛋白-蛋白對接

使用discovery studio軟件中的ZDOCK模塊對SIRT1和PROX1蛋白進行蛋白-蛋白對接。利用pymol分析蛋白之間的極性相互作用（圖 6），結果顯示SIRT1帶正電的ARG257、ARG499和ARG621與PROX1蛋白帶負電的GLU730和GLU676形成鹽橋相互作用；運用ligplot分析蛋白之間的二維相互作用（圖7），結果顯示 PROX1 蛋白的 ARG621、TYR643和SER724等與SIRT1蛋白的GLU676、GLU673和GLN277等形成氫鍵相互作用，綜上，表明SIRT1蛋白與PROX1蛋白可以互作。

2.6 EX-527和RES共處理對PROX1/CaN/NFAT信號通路的影響

將SIRT1抑制劑EX-527與RES共處理山羊成肌細胞，誘導分化6 d，RT-qPCR檢測結果如圖8所示，與CON組相比，EX-527組抑制SIRT1后，NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN的mRNA表達量極顯著下調(diào)（Plt;0.01），而與EX-527組相比，EX-527+RES組TNNC1、TNNI1的mRNA表達量極顯著上調(diào)（Plt;0.01），NFATc1、MYOZ2、SLN的mRNA表達量并無顯著變化。可以得出結論，RES能夠通過上調(diào)SIRT1基因的表達，激活PROX1/CaN/NFAT信號通路，促進肌纖維類型由快速酵解型向慢速氧化型轉化。

3 討 論

肌肉纖維的類型和肉品質相關，肌纖維類型組成不同，宰后肌肉顏色、pH、系水力等肌肉品質性狀也不同^［26］。近年來國內(nèi)外許多研究發(fā)現(xiàn)，RES對骨骼肌肌纖維類型的轉化也有一定影響。研究發(fā)現(xiàn)，每天以100 mg·kg^-1 RES添加量飼喂小鼠6周，可提高小鼠比目魚?。⊿OL）、趾長伸?。‥DL）中Ⅰ型及Ⅱa型肌纖維比例^［27］。肉牛日糧添加450 mg·kg^-1 RES可通過激活Akt/FoxO通路促進牛肌纖維類型從Ⅱ型到Ⅰ型的轉化^［28］。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加RES延緩了肉仔雞胸肌和腿肌pH的下降，降低了滴水損失以及剪切力，改善了肌肉顏色^［29］。在育肥豬飼糧中添加300或600 mg·kg^-1 RES提高了豬背最長肌宰后24 h pH、肌紅蛋白含量，降低了肌肉剪切力、滴水損失^［30］，同時還發(fā)現(xiàn)其提高了背最長肌MyHCⅡa mRNA的表達，降低了MyHCⅡb mRNA的表達。本研究發(fā)現(xiàn)，山羊飼料中添加150 mg·kg^-1 RES及干擾PROX1基因后，利用RT-qPCR檢測，結果顯示，與CON組相比山羊背最長肌肌纖維四型標志基因與CaN/NFAT通路關鍵基因的表達量均顯著升高（Plt;0.05），并且Western blot結果也表明與肌纖維轉化相關的關鍵基因MYH7和MYH4與對照組相比表現(xiàn)出極顯著差異（Plt;0.01），與上述文獻結果相符。

有研究表明，RES能夠激活SIRT1基因。發(fā)現(xiàn)兩個功能性白藜蘆醇分子能夠介導7-氨基-4-甲基香豆素與SIRT1的N-端結構域相互作用，從而促進SIRT1的活化^［31］。RES可能通過 AMPK/PGC-1α信號通路和牛肌管中的線粒體生物發(fā)生促進肌纖維類型從快肌纖維向慢肌纖維的轉變^［32］。研究發(fā)現(xiàn)，RES以SIRT1為靶點，增加其去乙酰酶活性，導致FOXO1去乙?；瑥亩种破滢D錄活性，最終導致Atrogin-1和MuRF-1下調(diào)從而通過泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）增加肌肉蛋白的水解活性^［33］。本試驗通過RT-qPCR分別檢測RES處理的成肌細胞與補飼150 mg·kg^-1 RES的山羊背最長肌中SIRT1基因表達量也發(fā)現(xiàn)，RES組SIRT1基因表達量均極顯著高于對照組（Plt;0.01），RES能夠促進SIRT1基因的表達，與文獻報道結果相符。

研究發(fā)現(xiàn)，EX-527可以作為SIRT1的抑制劑^［34］。本試驗后續(xù)對SIRT1與PROX1進行蛋白-蛋白對接，結果顯示 PROX1 蛋白的 ARG621、TYR643 和 SER724 等與 SIRT1 蛋白的 GLU676、GLU673 和 GLN277 等形成氫鍵相互作用，表明 SIRT1與PROX1蛋白可以互作。有研究表明，TNNC1與TNNC2基因在肌纖維發(fā)育與分化過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用，可作為檢測肌纖維類型的分子標記^［35］。本試驗將RES和EX-527共處理山羊成肌細胞，結果顯示，與CON組相比，EX-527組CaN/NFAT信號通路關鍵基因NFATc1、TNNC1、TNNI1、MYOZ2、SLN的mRNA表達量極顯著下調(diào)（Plt;0.01），而經(jīng)過RES處理后TNNC1、TNNI1的mRNA表達量極顯著上調(diào)（Plt;0.01）。表明RES可以減緩EX-527的抑制作用，激活SIRT1基因調(diào)控CaN/NFAT信號通路促進肌纖維類型轉化，與文獻報道結果相符。

4 結 論

本研究發(fā)現(xiàn)，RES能夠通過激活SIRT1基因調(diào)控山羊背最長肌和山羊成肌細胞中PROX1/CaN/NFAT信號通路促進成肌細胞分化和肌纖維類型由快速酵解型向慢速氧化型轉化，改善肉質，為后續(xù)更加深入地研究白藜蘆醇對改善山羊肌肉肉質的研究提供部分理論基礎。

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