摘 要： 旨在研究中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)斷奶湖羊生長(zhǎng)性能、瘤胃發(fā)酵及菌群組成的影響。選取100只健康，體況良好，平均體重（14.55±0.21） kg的2月齡湖羊，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為5組，每組4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)5只羊。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，復(fù)方A1和A2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.5%的健脾四胃方劑A，復(fù)方B1和B2組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.3%、0.5%的健脾四胃方劑B。結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，復(fù)方A2組平均日增重顯著提高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05）；復(fù)方A1、B2組的氨態(tài)氮（NH 3-N）含量顯著提高（P＜0.05），微生物蛋白（MCP）含量顯著降低（P＜0.05），復(fù)方A2組的的pH極顯著降低（P＜0.01），丙酸含量極顯著提高（P＜0.01）、乙酸與丙酸的比值極顯著降低（P＜0.01），總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高（P＜0.01）；復(fù)方A1、A2組的瘤胃微生物的物種數(shù)與Chao 1 指數(shù)顯著提高（Plt;0.05），Shannon 指數(shù)極顯著提高（Plt;0.01），螺旋體門 （Spirochaetota）的相對(duì)豐度極顯著降低（Plt;0.01），且復(fù)方A2組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對(duì)豐度極顯著提高（Plt;0.01）；復(fù)方A1、A2組的理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、真/優(yōu)桿菌屬（Eubacterium_ventriosum_group）相對(duì)豐度顯著降低（Plt;0.05），未知屬擬桿菌目RF16菌（Bacteroidales_RF16_group）相對(duì)豐度顯提高（Plt;0.05）；復(fù)方A2組的月形單胞菌屬（Selenomonas）相對(duì)豐度顯著降低（Plt;0.05），奎因氏菌屬（Quinella）相對(duì)豐度顯著提高（Plt;0.05）。以上結(jié)果表明，在飼糧中添加中藥健脾四胃復(fù)方制劑可以促進(jìn)斷奶湖羊的生長(zhǎng)性能，改善瘤胃發(fā)酵，提高瘤胃菌群的多樣性和豐富度。

關(guān)鍵詞： 中藥復(fù)方；斷奶湖羊；生產(chǎn)性能；瘤胃發(fā)酵；瘤胃菌群

中圖分類號(hào)：S853.9;S826.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A"""" 文章編號(hào)： 0366-6964（2025）01-0466-13

收稿日期：2024-01-15

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（32060768）；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助

作者簡(jiǎn)介：李 瑋（1999-），男，黑龍江哈爾濱人，碩士生，主要從事反芻動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究，E-mail：1219960380@qq.com

*通信作者：宋小珍，主要從事牛羊營(yíng)養(yǎng)調(diào)控及中藥添加劑開發(fā)研究，E-mail：songxz1234@163.com

Effects of Chinese Medicine Jianpisiwei Formulas on Growth Performance， Rumen Fermentation

and Microbiota Composition of Weaned Hu Sheep

LI" Wei WU" Xilong ZHAO" Xingrui XU" Lanjiao YANG" Xiaobin2， SONG" Xiaozhen^1*

（1.Jiangxi Provincial Key Laboratory of Animal Nutrition/Engineering Research Center for

Nutritional Feed Development， Jiangxi Agricultural University， Nanchang 330045，" China;

2.Jiangxi

Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Company Limited， Nanchang 331700， China）

Abstract： "The aim of this experiment was to study the effects of Chinese medicine Jianpisiwei formulas on the growth performance， rumen fermentation and microbiota composition of weaned Hu sheep. A total of 100 healthy 2-month-old Hu sheep with average body weight of （14.55±0.21） kg were randomly divided into 5 groups with 4 replicates in each group and 5 sheep per replicate. The control group was fed with basal diet，" A1 and A2 groups were fed basal diet supplemented with 0.3% and 0.5% Jianpisiwei formula A， the B1 and B2 groups were fed basal diet supplemented with 0.3% and 0.5% Jianpisiwei formula B. The results showed that compared with the control group， the average daily weight gain of the A2 group was significantly increased （Plt;0.05）， the feed-to-gain ratio was significantly decreased （Plt;0.05）， the content of ammonia nitrogen （NH 3-N） in the A1 and B2 groups was significantly increased （Plt;0.05）， the content of microbial protein （MCP） was significantly decreased （Plt;0.05）， the pH value of the the A2 group was significantly decreased （Plt;0.01）， and the content of propionic acid was significantly increased （Plt;0.01）. The ratio of acetic acid to propionic acid was significantly decreased （Plt;0.01）， the total volatile fatty acids were significantly increased （Plt;0.01）， the number of species and Chao 1 index in the the A1 and A2 groups were significantly increased （Plt;0.05）， the Shannon index was significantly increased （Plt;0.01）， the relative abundance of Spirochaetota was significantly decreased （Plt;0.01）， and the relative abundance of Euryarchaeota in the A2 group was significantly increased （Plt;0.01）；The relative abundance of Rikenellaceae_RC9_gut_group and Eubacterium_ventriosum_group in the A1 and A2 groups decreased significantly （Plt;0.05）， while the relative abundance of Bacteroidales_RF16_group increased significantly （Plt;0.05）. The relative abundance of Selenomonas in the A2 group was significantly decreased （Plt;0.05）， while the relative abundance of Quinella increased significantly （Plt;0.05）. The above results indicated that the addition of Chinese medicine Jianpisiwei formulas to the diet could promote the growth performance， improve rumen fermentation， and increase the diversity and richness of rumen flora in weaned Hu sheep.

Key words： Chinese medicine formula; Hu sheep; production performance; rumen fermentation; rumen flora

*Corresponding author： SONG Xiaozhen，E-mail： songxz1234@163.com

斷奶是羔羊生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵階段^［1］。斷奶期羔羊的消化和免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善，加之母子分離、飼養(yǎng)方式以及飼糧結(jié)構(gòu)的改變，極易引起羔羊斷奶應(yīng)激。斷奶應(yīng)激使羔羊內(nèi)分泌激素失調(diào)，免疫力下降，胃腸健康受損，導(dǎo)致湖羊飼料轉(zhuǎn)化率下降，生長(zhǎng)性能低下，同時(shí)還會(huì)影響羔羊后期育肥，降低養(yǎng)殖效益^［2-3］。為了緩解湖羊斷奶應(yīng)激，提高羔羊的生產(chǎn)性能，一些抗應(yīng)激、改善胃腸消化、提高免疫功能的飼料添加劑被大量開發(fā)研究。中藥源自天然，含有多種活性物質(zhì)，在提高畜禽生產(chǎn)性能、增強(qiáng)免疫力、改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)等方面發(fā)揮著重要作用^［4］，在畜牧養(yǎng)殖減抗替抗過程中被廣為關(guān)注和研究。據(jù)報(bào)道，飼料中添加2%的健脾中藥（山楂、陳皮、五味子等）可顯著提高50日齡“冀合白豬”的日增重，降低料重比^［5］。中藥復(fù)方制劑（生地、馬齒莧、蒼術(shù)、苦參、山楂等）可改善1日齡雛雞的消化機(jī)能，增強(qiáng)食欲，從而促進(jìn)生長(zhǎng)^［6］。本試驗(yàn)使用的中藥健脾四胃方劑A由山藥、山楂、蒼術(shù)等組方而成，其中山藥有補(bǔ)脾養(yǎng)胃的作用，可用于治療脾胃虛弱、食欲不振、脾虛泄瀉；其活性成分為多糖和總黃酮^［7］。山楂為消導(dǎo)藥，具有消食健胃，主治消化不良，其活性成分為多糖、有機(jī)酸、總黃酮^［8］。蒼術(shù)為健脾藥，具有燥濕健脾，止痛止瀉的作用，其活性成分為多糖和精油，可保護(hù)胃腸道、提高免疫功能^［9］。方劑A采用山藥和山楂合用補(bǔ)脾健胃，主治斷奶后羔羊因脾胃虛弱而導(dǎo)致的消化不良、食欲不振。方劑B由山楂、木香、萊菔子等組成，木香為行氣藥，具有行氣止痛，消除胃腸鼓脹的作用，其活性成分為萜類化合物、類固醇、類黃酮，可以緩解機(jī)體疼痛，抵抗炎癥^［10］。萊菔子為消食藥，具有消食除脹、增強(qiáng)胃腸活動(dòng)的作用，其活性成分為酚類化合物、硫苷類、有機(jī)酸類^［11］。方劑B主治益氣健脾，針對(duì)斷奶后羔羊的脾虛氣虛，免疫力低下。本試驗(yàn)擬選用這兩個(gè)中藥方劑，針對(duì)斷奶湖羊消化道發(fā)育不完善、免疫力低下等問題，研究不同復(fù)方制劑、不同添加水平對(duì)斷奶湖羊生長(zhǎng)性能、瘤胃發(fā)酵及瘤胃菌群組成的影響，為中藥飼料添加劑的研發(fā)及其在斷奶羔羊健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

中藥健脾四胃復(fù)方制劑A由山藥、山楂、蒼術(shù)、木香、萊菔子、青皮、甘草等按等比例組成，中藥健脾四胃復(fù)方制劑B由山楂、木香、萊菔子、青皮、黃芪、甘草等按2∶2∶1∶1∶1∶1組成，均由江西中成人藥業(yè)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采取單因素設(shè)計(jì)，選取100只健康、體重（14.55±0.21）kg且遺傳背景相近的2月齡湖羊，隨機(jī)分為5組，每組20只羊，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只羊，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，復(fù)方A1組（基礎(chǔ)飼糧+0.3%的健脾四胃方劑A），復(fù)方A2組（基礎(chǔ)飼糧+0.5%的健脾四胃方劑A），復(fù)方B1組（基礎(chǔ)飼糧+0.3%的健脾四胃方劑B），復(fù)方B2組（基礎(chǔ)飼糧+0.5%的健脾四胃方劑B）。試驗(yàn)期共70 d，其中預(yù)試期10 d，正試期60 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧與飼養(yǎng)管理

基礎(chǔ)飼糧參照我國(guó)《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 816—2004）設(shè)計(jì)配方，精粗比為4∶6，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平如表1所示。

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2022年11月到2023年1月在江西春暉羊業(yè)有限公司完成，每日飼喂2次（8：00和16：00），先精料后粗料各組試驗(yàn)羊自由采食、飲水，羊舍每周清糞并消毒1次。依據(jù)每日剩料情況，調(diào)整飼喂量。飼養(yǎng)試驗(yàn)期間各組飼喂方式、試驗(yàn)環(huán)境及管理模式均與羊場(chǎng)相同。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

在正式試驗(yàn)期第1天和第60天飼喂前空腹稱重，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)羊的初重和末重，飼養(yǎng)期間每日準(zhǔn)確記錄投料量及剩料量，計(jì)算每組的平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、平均日增重（ADG）。

平均日增重=（末重-初重）/試驗(yàn)天數(shù)；

平均日采食量=總采食量/試驗(yàn)天數(shù)；

料重比=平均日采食量/平均日增重。

1.4.2 瘤胃發(fā)酵及微生物菌群組成

于正試期第60天，從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2頭羊，將胃管式采液器，從羔羊口腔緩慢插入瘤胃，用50 mL注射器抽取瘤胃液。為了避免唾液污染，丟棄前30 mL瘤胃液，后續(xù)采集的瘤胃液于4層紗布過濾，取濾液用2 mL凍存管分裝置于液氮中保存，用于測(cè)定瘤胃微生物區(qū)系組成；另取過濾后的瘤胃液20 mL于凍存管中保存于-80℃冰箱以待瘤胃發(fā)酵參數(shù)的測(cè)定。

瘤胃pH使用S-320型酸度計(jì)測(cè)定；菌體蛋白（MCP）含量采用試劑盒（G-CLONE，中國(guó)）測(cè)定，測(cè)定方法按照試劑盒說明書進(jìn)行；氨態(tài)氮（NH 3N）濃度參考馮宗慈和高民^［12］的方法進(jìn)行測(cè)定，使用氣相色譜儀（Agilent GC8860 GC，美國(guó)）測(cè)定瘤胃液中揮發(fā)性脂肪酸的含量。

根據(jù)前期的生長(zhǎng)性能及瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的結(jié)果選擇健脾四胃復(fù)方A進(jìn)行瘤胃菌群組成測(cè)定。利用16S rRNA測(cè)序技術(shù)測(cè)定對(duì)照組、A1、A2組共12個(gè)樣本的瘤胃菌群多樣性。瘤胃液微生物DNA的提取、基因組文庫(kù)構(gòu)建和測(cè)序等均由北京諾禾致源生物信息技術(shù)有限公司進(jìn)行。提取瘤胃液樣品總DNA后，對(duì)細(xì)菌16S rRNA V3～V4高變區(qū)兩側(cè)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所采用的細(xì)菌通用引物序列為341F（5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′）和806R（5′-GGACTACNNGGGTATCTAAT-3′） PCR。利用QIIME2測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行微生物多樣性檢測(cè)，分析在門水平和屬水平下的群落物種組成及豐度。

1.4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件行方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較，并進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析斷奶湖羊瘤胃發(fā)酵參數(shù)與菌群組成的相關(guān)性。試驗(yàn)結(jié)果用平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤表示，Plt;0.05表示差異顯著，Plt;0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與對(duì)照組相比，各健脾組的初重、末重、平均日采食量都無顯著變化（P＞0.05）；復(fù)方A2組平均日增重顯著提高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05），其他健脾組平均日增重、料重比變化不顯著（P＞0.05）。

2.2 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，復(fù)方A2組的pH極顯著降低（P＜0.01）；復(fù)方A1、B2組的NH 3-N含量顯著提高（P＜0.05）；復(fù)方A1、B2組的MCP含量顯著降低（P＜0.05）；復(fù)方B1、B2組乙酸含量顯著低于復(fù)方A2組（P＜0.05）；復(fù)方A2組的丙酸含量極顯著提高（P＜0.01），乙酸與丙酸的比值極顯著降低（P＜0.01）；復(fù)方A2組的總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高（P＜0.01）；其他瘤胃發(fā)酵指標(biāo)無顯著變化（P＞0.05）。

2.3 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊瘤胃菌群多樣性的影響

2.3.1 稀釋曲線分析

稀釋曲線用來評(píng)價(jià)對(duì)樣品（瘤胃液）的測(cè)序量是否能夠包含所有微生物種類，并間接反映樣品中菌群的相對(duì)豐度。如圖1所示，稀釋曲線趨于平緩，說明測(cè)序數(shù)據(jù)量合理，能夠反映大部分細(xì)菌區(qū)系的變化。

2.3.2 操作分類單元（OTU）聚類分析

由圖2可知，三個(gè)組總共有操作分類單元（OTU）7 625個(gè)。其中對(duì)照組的OTU數(shù)量為3 610個(gè)，復(fù)方A1組的OTU數(shù)量為3 879個(gè)，復(fù)方A2組的OTU數(shù)量為4 289個(gè)，其中三組共有的OTU有1 445個(gè)，占OTU總數(shù)量的18.95%。對(duì)照組獨(dú)有的OTU數(shù)量為1 443個(gè)，占OTU總數(shù)量的18.92%，復(fù)方A2組獨(dú)有的OTU數(shù)量為1 886個(gè)，占OTU總數(shù)量的24.73%，復(fù)方A1組獨(dú)有的OTU數(shù)量為1 588個(gè)，占OTU總數(shù)量的20.83%。

2.3.3 Alpha多樣性分析

由表4知，與對(duì)照組相比，復(fù)方A1、A2組的物種數(shù)與Chao 1 指數(shù)顯著提高（Plt;0.05），Shannon 指數(shù)極顯著提高（Plt;0.01），兩試驗(yàn)組之間差異不顯著（P＞0.05）。且三個(gè)組的Coverage 值均大于99%，說明測(cè)序樣品取樣充分，能準(zhǔn)確反映肉羊瘤胃微生物菌群的種類與結(jié)構(gòu)組成。

2.4 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊瘤胃菌群組成分析

2.4.1 湖羊瘤胃門水平物種組成分析

表5與圖3為3個(gè)組瘤胃液中相對(duì)豐度最高的前10種菌門的分析結(jié)果。結(jié)果顯示，3個(gè)組湖羊瘤胃液中的優(yōu)勢(shì)菌門均為擬桿菌門（Bacteroidota）和厚壁菌門（Firmicutes），兩種菌門占總細(xì)菌的92%～93%。與對(duì)照組相比，復(fù)方A2組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對(duì)豐度極顯著提高（Plt;0.01），復(fù)方A1組的廣古菌門（Euryarchaeota）的相對(duì)豐度變化不顯著（P＞0.05）；復(fù)方A1、A2組的螺旋體門 （Spirochaetota）的相對(duì)豐度極顯著降低（Plt;0.01）；其他菌門相對(duì)豐度無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.4.2 湖羊瘤胃屬水平物種組成分析

表6與圖4為3個(gè)組瘤胃液中相對(duì)豐度最高的前15種菌屬的分析結(jié)果。結(jié)果顯示3個(gè)組湖羊瘤胃液中的優(yōu)勢(shì)菌屬均為理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）和普雷沃氏菌屬（Prevotella）。與對(duì)照組相比，復(fù)方A1、A2組的理研菌科RC9菌屬（Rikenellaceae_RC9_gut_group）、真/優(yōu)桿菌屬（Eubacterium_ventriosum_group）相對(duì)豐度顯著降低（Plt;0.05）；復(fù)方A2組的月形單胞菌屬（Selenomonas）相對(duì)豐度顯著降低（Plt;0.05）；復(fù)方A1、A2組的未知屬擬桿菌目RF16菌（Bacteroidales_RF16_group）相對(duì)豐度顯提高（Plt;0.05）；復(fù)方A2組奎因氏菌屬（Quinella）相對(duì)豐度顯著提高（Plt;0.05）；其他菌屬相對(duì)豐度無顯著差異（Pgt;0.05）。

2.5 瘤胃菌群與瘤胃發(fā)酵參數(shù)的相關(guān)性分析

通過 Spearman 相關(guān)性分析，對(duì)斷奶湖羊羔羊瘤胃顯著變化的屬水平菌群的相對(duì)豐度與瘤胃發(fā)酵參數(shù)之間進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析（圖 5）。結(jié)果顯示，瘤胃pH與乙酸、丙酸、總揮發(fā)性脂肪酸呈顯著負(fù)相關(guān)（Plt;0.01），與乙丙比呈顯著正相關(guān)（Plt;0.01）。乙丙比與Quinella呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05）。

3 討 論

3.1 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊生產(chǎn)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，添加0.5%的健脾四胃復(fù)方制劑A可改善羔羊生產(chǎn)性能，可能與復(fù)方A的健脾益氣功效有關(guān)。有研究報(bào)道，山藥多糖可以提高仔豬的生長(zhǎng)性能促進(jìn)其生長(zhǎng)^［13］，山楂黃酮可以提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能^［14］，蒼術(shù)多糖能刺激早期斷奶仔豬淋巴細(xì)胞增殖和抗體產(chǎn)生，提高仔豬抗病能力，降低腹瀉率^［15］。付戴波等^［16］研究發(fā)現(xiàn)，以藿香和蒼術(shù)為主藥組成的中藥復(fù)方可以提高熱應(yīng)激條件下錦江黃牛的日增重，并降低料重比，促進(jìn)肉牛的生長(zhǎng)。吳道義等^［17］通過在中藥組方（山楂、神曲、麥芽、貫眾等）中添加微生態(tài)制劑對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵，制備成中藥微生態(tài)制劑飼喂貴州黑山羊，研究發(fā)現(xiàn)，中藥微生態(tài)制劑能夠提高貴州黑山羊生長(zhǎng)性能。這些結(jié)果與本研究一致。

3.2 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊瘤胃參數(shù)的影響

瘤胃pH是維持動(dòng)物瘤胃正常發(fā)酵的重要指標(biāo)之一，其變化與揮發(fā)性脂肪酸產(chǎn)生與緩沖液分泌的動(dòng)態(tài)平衡有關(guān)^［18］，其正常變化范圍為6.0～7.5^［19］。本研究顯示，各組湖羊瘤胃pH為6.90～7.25，均在正常范圍內(nèi)，表明飼糧中添加健脾四胃復(fù)方添加劑不會(huì)影響斷奶湖羊瘤胃微生物的正常代謝，且與對(duì)照組相比，復(fù)方A2組的瘤胃pH極顯著降低。有研究報(bào)道，山藥多糖對(duì)腸道微生態(tài)具有一定的調(diào)節(jié)作用^［20］。初步推測(cè)可能是中藥健脾四胃方劑中所含的多糖等活性成分促進(jìn)了斷奶湖羊瘤胃微生物降解代謝，產(chǎn)生了更多的揮發(fā)性脂肪酸，從而使pH降低。VFA （主要包括乙酸、丙酸、丁酸）是反芻動(dòng)物主要的能量來源^［21-22］，反芻動(dòng)物 70%～80% 的能量由 VFA提供。其中，丙酸發(fā)酵可提高能量利用率，對(duì)肉羊生長(zhǎng)有利^［23-24］。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方A2組丙酸含量極顯著提高、乙丙比極顯著下降、總揮發(fā)性脂肪酸極顯著提高。這提示添加中藥健脾四胃方劑A可能促進(jìn)了羔羊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。這與本試驗(yàn)中復(fù)方A2組日增重的增加結(jié)果一致。有研究報(bào)道，中藥多糖可以改變瘤胃的發(fā)酵模式^［25］，飼喂富含多酚和皂苷的植物提取物可以提高總VFA和丙酸含量，降低乙酸/丙酸的比值^［26］。在飼糧中添加0.75%的蒼術(shù)精油可以提高錦江黃牛瘤胃的蛋白質(zhì)、纖維等物質(zhì)的降解率^［27］。

NH 3-N由日糧中各種含氮物質(zhì)經(jīng)瘤胃降解產(chǎn)生，過高或過低都會(huì)對(duì)瘤胃微生物產(chǎn)生不利影響，其有效濃度為5.0～30.0 mg·dL^-1［28］。本研究顯示，各健脾組湖羊的瘤胃液NH 3-N濃度為6.30～8.35 mg·dL^- 均屬于正常范圍，且復(fù)方A1、B2的NH 3-N含量顯著高于對(duì)照組。仉連平等^［29］在湖羊羔羊的基礎(chǔ)日糧中添加中草藥添加劑（當(dāng)歸、黃芪、白術(shù)、山楂等）發(fā)現(xiàn)，中草藥制劑提高了瘤胃液中NH 3-N含量，與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)瘤胃NH 3-N含量升高可能是因?yàn)橹兴幗∑⑺奈阜絼┲泻械幕钚猿煞执龠M(jìn)瘤胃中蛋白質(zhì)的降解，從而為瘤胃微生物提供了充足的氮源。瘤胃液中的MCP主要由瘤胃細(xì)菌和原生動(dòng)物使用NH 3-N合成^［30］，其含量用于衡量瘤胃發(fā)酵。本研究顯示，復(fù)方A1、B2的MCP含量顯著低于對(duì)照組。有研究發(fā)現(xiàn)，Prevotella_1豐度與MCP顯著正相關(guān)^［31］，這可能是中藥健脾四胃方劑在一定程度上減少了瘤胃中利用氨合成MCP的微生物，從而導(dǎo)致MCP含量的下降。

3.3 中藥健脾四胃復(fù)方制劑對(duì)湖羊瘤胃菌群組成的影響

本試驗(yàn)通過16S rRNA測(cè)序技術(shù)，對(duì)斷奶湖羊瘤胃液菌群進(jìn)行檢測(cè)。Mao等^［32］研究顯示，測(cè)序覆蓋率大于97%意味著樣本取樣充分。本試驗(yàn)測(cè)序結(jié)果顯示，對(duì)照組、復(fù)方A1組、復(fù)方A2組的覆蓋指數(shù)都在99%以上，說明測(cè)序樣品取樣充分，本次測(cè)序結(jié)果能夠真實(shí)地反映斷奶湖羊瘤胃微生物種類和結(jié)構(gòu)多樣性。α多樣性指數(shù)中，Shannon和Simpson指數(shù)體現(xiàn)微生物菌群的多樣性，Shannon指數(shù)與菌群多樣性呈正相關(guān)，而Simpson指數(shù)與菌群多樣性呈負(fù)相關(guān)；物種數(shù)和Chao1指數(shù)體現(xiàn)微生物菌群的豐富度，且和菌群豐富度呈正相關(guān)。本試驗(yàn)中復(fù)方A1組與復(fù)方A2組的物種數(shù)與Chao1指數(shù)均顯著提高，且Shannon指數(shù)極顯著提高，可能是因?yàn)橹兴幗∑⑺奈阜絼〢中所含有的活性成分對(duì)斷奶湖羊瘤胃微生物的調(diào)控作用使其瘤胃液中菌群豐富度和多樣性得到提高。

在門水平上，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組和A1、A2組斷奶湖羊的瘤胃優(yōu)勢(shì)菌門均為Firmicutes和Bacteroidota，這與Wang等^［33］研究一致。且健脾四胃方劑A對(duì)斷奶湖羊瘤胃優(yōu)勢(shì)菌門的相對(duì)豐度無顯著影響。此外，本試驗(yàn)中復(fù)方A2組Euryarchaeota的相對(duì)豐度顯著增加，且隨著飼糧中健脾四胃方劑A添加劑量的增加Euryarchaeota的相對(duì)豐度逐漸上升，推測(cè)原因可能是健脾四胃方劑A為其生長(zhǎng)提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)其生長(zhǎng)。有研究報(bào)道，在牦牛飼料利用率和甲烷排放等方面廣古菌門發(fā)揮重要作用^［34］，低水平的甲烷排放與廣古菌門的存在密切相關(guān)^［35］，說明健脾四胃方劑A可能還在減少湖羊甲烷的排放，減少環(huán)境污染方面具有積極意義。有研究顯示在脾虛泄瀉模型大鼠中，Spirochaetota相對(duì)豐度顯著提高^［36］，本試驗(yàn)中，復(fù)方A1、復(fù)方A2組Spirochaetota相對(duì)豐度顯著降低，且隨著飼糧中健脾四胃方劑A添加劑量的增加Spirochaetota相對(duì)豐度逐漸下降，可能是因?yàn)槠渌械幕钚猿煞执龠M(jìn)了胃腸蠕動(dòng)，起到了健脾的功效，抑制了螺旋體門菌群的生長(zhǎng)。

在屬水平上，本試驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組和復(fù)方A1、A2組的斷奶湖羊瘤胃優(yōu)勢(shì)菌群為Rikenellaceae_RC9_gut_group和Prevotella。Rikenellaceae_RC9_gut_group屬于Rikenellaceae科，在碳水化合物或蛋白質(zhì)的發(fā)酵中發(fā)揮作用^［37］。有研究發(fā)現(xiàn)Rikenellaceae_RC9_gut_group相對(duì)豐度的增加與處于慢性應(yīng)激狀態(tài)下的小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生有著密切關(guān)系^［38］。本試驗(yàn)中復(fù)方A1、A2組的Rikenellaceae_RC9_gut_group相對(duì)豐度顯著下降，可能是因?yàn)橹兴幗∑⑺奈笍?fù)方制劑A具有健脾理氣的作用，調(diào)節(jié)了斷奶湖羊瘤胃微生態(tài)的平衡，促進(jìn)了斷奶湖羊瘤胃與其競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系菌群的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致其相對(duì)豐度下降，對(duì)斷奶湖羊的健康起到了保護(hù)作用。此外，Wang等^［39］研究發(fā)現(xiàn)，瘤胃液中丙酸濃度與Firmicutes和Rikenellaceae_RC9_gut_group的相對(duì)豐度呈負(fù)相關(guān)。本試驗(yàn)中瘤胃液中丙酸含量與Rikenellaceae_RC9_gut_group的相對(duì)豐度無顯著相關(guān)性。Prevotella是瘤胃中的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌，在纖維降解中起著關(guān)鍵作用^［40］，雖然本試驗(yàn)中對(duì)照組和復(fù)方A1、A2組斷奶湖羊Prevotella相對(duì)豐度無顯著差異，但是復(fù)方A2組高于對(duì)照組，可能是A2組的成分為Prevotella的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)。此外，復(fù)方A2組Prevotella相對(duì)豐度的提高促進(jìn)了纖維的降解率，與本試驗(yàn)瘤胃發(fā)酵復(fù)方A2組VFA的提高相互印證。Selenomonas屬于革蘭陰性厚壁菌，是一種淀粉降解菌^［41］，本試驗(yàn)中隨著健脾四胃方劑A添加劑量的增加Selenomonas相對(duì)豐度逐漸下降，且復(fù)方A2組Selenomonas的相對(duì)豐度顯著下降，可能是健脾四胃方劑A中所含的活性成分抑制了Selenomonas的繁殖。有研究報(bào)道，用大麥和小麥顆粒誘導(dǎo)奶牛亞急性瘤胃酸中毒（SARA）發(fā)現(xiàn)，Selenomonas數(shù)量顯著增加^［42］，這提示中藥健脾四胃復(fù)方制劑A可能對(duì)斷奶湖羊SARA的發(fā)生具有一定的預(yù)防作用。Selenomonas屬下含有反芻獸月形單胞菌（Selenomonas ruminantium），有研究結(jié)果顯示Selenomonas ruminantium與丙酸呈負(fù)相關(guān)^［43］，與本試驗(yàn)中復(fù)方A2組Selenomonas相對(duì)豐度與丙酸含量有負(fù)相關(guān)趨勢(shì)相似。此外，本試驗(yàn)中復(fù)方A1、A2組Eubacterium_ventriosum_group的相對(duì)豐度顯著下降，Bacteroidales_RF16_group的相對(duì)豐度顯著提高。有研究發(fā)現(xiàn)，多糖和黃酮類化合物可以調(diào)節(jié)腸道菌群吸收和代謝^［44］。本試驗(yàn)結(jié)果瘤胃菌群的變化可能是中藥健脾四胃復(fù)方制劑A中所含有的多糖以及黃酮類物質(zhì)等作用下發(fā)生相對(duì)豐度的增減。Quinella為韋榮菌科的一屬細(xì)菌，有研究報(bào)道，添加復(fù)方精油能夠顯著提高韋榮球菌屬的相對(duì)豐度^［45］。本試驗(yàn)中隨著健脾四胃方劑A添加劑量的增加Quinella相對(duì)豐度逐漸提高，且復(fù)方A2組Quinella的相對(duì)豐度顯著提高，可能與中藥健脾四胃復(fù)方制劑A中精油類物質(zhì)為其提供了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)了Quinella的生長(zhǎng)。瘤胃細(xì)菌群落極其復(fù)雜，是外界因素與動(dòng)物自身相互作用的結(jié)果，其影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

在飼糧中添加0.5%的中藥健脾四胃復(fù)方制劑A，可提高斷奶湖羊瘤胃微生物的豐富度和多樣性，促進(jìn)瘤胃丙酸型發(fā)酵，提高湖羊的生長(zhǎng)性能。

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（編輯 范子娟）