摘要：淀粉約占小麥籽粒干重的70%，是粒重的決定因子，TaAGPL1 基因編碼腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）的胞質(zhì)型大亞基，在小麥淀粉合成中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在近年來審定的239 份小麥品種中，TaAGPL1 基因序列中僅B拷貝上存在13個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（SNPs），根據(jù)序列多態(tài)性將小麥品種分成2種單倍型（Hap1和Hap2），將單倍型與千粒重進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，Hap2為優(yōu)異單倍型；根據(jù)編碼域1 944位點(diǎn)A/C堿基突變，開發(fā)了酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列（CAPS）功能標(biāo)記；對Hap1和Hap2品種間TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平和AGPase酶活性進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)它們在灌漿后14和21 d的Hap2小麥籽粒中均顯著提高。研究結(jié)果為現(xiàn)代高淀粉含量或高千粒重小麥品種的篩選和創(chuàng)制提供理論基礎(chǔ)和篩選依據(jù)。

關(guān)鍵詞：小麥；TaAGPL1；淀粉；AGPase酶活性；功能標(biāo)記

doi：10.13304/j.nykjdb.2024.0303

中圖分類號：S512，Q78 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：10080864（2024）11004313

小麥（Triticum aestivum L.）是我國重要口糧作物之一，其產(chǎn)量對保證我國糧食安全具有重要意義。隨著人口增加、耕地面積減少以及氣候變暖，當(dāng)前小麥產(chǎn)量難以滿足需求[1]。因此，發(fā)掘小麥產(chǎn)量潛力仍然是育種工作的首要任務(wù)。小麥產(chǎn)量由單位面積穗數(shù)、每穗粒數(shù)以及千粒重三要素構(gòu)成[2]。千粒重的增加相對獨(dú)立，是三要素中遺傳相對穩(wěn)定的性狀，受環(huán)境條件的影響相對較小，具有較高的遺傳力，受遺傳特性影響最大，可在育種早期世代進(jìn)行有效的選育[34]。淀粉占小麥籽粒干重的70%左右，顯著影響籽粒的千粒重和最終產(chǎn)量[5]。淀粉合成是由一系列酶控制的復(fù)雜過程，其中AGPase被認(rèn)為是小麥、水稻和玉米等作物淀粉合成過程中的限速酶，其活性與淀粉含量和粒重呈顯著正相關(guān)[6-9]。AGPase 是由成對的2個(gè)大亞基（AGPL）和成對的2個(gè)小亞基（AGPS）組成的異源四聚體。前期研究表明，胞質(zhì)型TaAGPL1 基因的轉(zhuǎn)錄水平與淀粉積累速率呈顯著正相關(guān)，同時(shí)TaAGPL1 過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小麥植株AGPase酶活性、淀粉含量與粒重均顯著提高，表明TaAGPL1 在小麥淀粉合成和粒重形成中發(fā)揮重要的作用[10]。因此，提高胚乳中參與淀粉生物合成的關(guān)鍵酶的表達(dá)可能是提高小麥產(chǎn)量的有效途徑[1112]。

單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，具有遺傳穩(wěn)定性好、代表性強(qiáng)、效率高和不受限于DNA片段長度的變化等優(yōu)點(diǎn)[13]。功能標(biāo)記是指從影響性狀變異基因的功能域開發(fā)出來的多態(tài)性標(biāo)記，其與控制性狀變異的基因座位完全連鎖，比隨機(jī)DNA標(biāo)記的作用更大[14]。近年來關(guān)于淀粉合成關(guān)鍵基因TaAGPL1 等位變異位點(diǎn)的檢測和功能標(biāo)記的開發(fā)相繼報(bào)道，Rose等[15]克隆到小麥胞質(zhì)型AGPase大亞基基因（TaAGPL1）3個(gè)拷貝的序列，并對47份國外春冬性小麥品種中的TaAGPL1 基因3個(gè)拷貝的多態(tài)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)TaAGPL1-1A、TaAGPL1-1B 和TaAGPL1-1D 分別存在2、5 和1 種單倍型；TaAGPL1-1B 基因有58個(gè)SNPs位于非編碼區(qū)，其中有9個(gè)SNPs為編碼區(qū)的同義替換；關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，僅TaAGPL1-1B 有4 個(gè)SNPs（6 T/C、2 249C/A、2 872 T/C、3 098 T/C）與穗粒數(shù)和千粒重顯著相關(guān)。Hou等[16]利用245份中國微核心小麥種質(zhì)（1940—1990 年的小麥品種資源）分析了TaAGPL1 基因3 個(gè)拷貝的序列多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)僅TaAGPL-1B 基因序列上存在27個(gè)不同于國外小麥品種的SNP 位點(diǎn)，其中啟動子上有5 個(gè)InDels和13 個(gè)SNPs，基因編碼域有9 個(gè)同義替換的SNPs；對不同小麥品種群體的千粒重進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)有3 個(gè)SNPs（-122 T/C、150 C/T、283 G/C）與小麥千粒重顯著相關(guān)聯(lián)，并開發(fā)了基于BSrD Ⅰ限制性核酸內(nèi)切酶的CAPS功能標(biāo)記。

育種過程中育種家們普遍選擇了高粒重的小麥材料，使得控制重要農(nóng)藝性狀的關(guān)鍵基因序列上優(yōu)異等位變異在我國小麥中的分布頻率逐漸增高[9，17]。雖然上述研究對小麥品種間TaAGPL1 基因的優(yōu)異等位變異位點(diǎn)進(jìn)行了挖掘，但研究對象育成較早，或者與我國小麥品種血緣關(guān)系較遠(yuǎn)。鑒于TaAGPL1 是淀粉合成的關(guān)鍵基因，本文分析了近年來（2000年左右）審定的239份小麥品種間TaAGPL1 基因序列的多態(tài)性，發(fā)掘出與淀粉含量或千粒重相關(guān)聯(lián)的等位變異位點(diǎn)，進(jìn)一步開發(fā)出功能標(biāo)記，以期為黃淮麥區(qū)小麥粒重的遺傳改良和品種選育提供理論依據(jù)和篩選標(biāo)記。

1 材料與方法

1.1 供試材料

選用近年來我國不同麥區(qū)審定的239份小麥品種構(gòu)成的自然群體為供試材料，在小麥生長發(fā)育期間2019/2020、2020/2021 和2021/2022 共3個(gè)年度種植于河南農(nóng)業(yè)大學(xué)原陽科教園區(qū)，行長3 m，行寬1.5 m，行距25 cm，株距10 cm，水肥管理、防治蟲害、除草等按照常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行田間管理。小麥灌漿過程中的新鮮籽粒取樣后存放于-80 ℃ 冰箱備用，用于基因轉(zhuǎn)錄水平和AGPase 酶活性的測定，小麥成熟籽粒用于千粒重統(tǒng)計(jì)。

1.2 千粒重統(tǒng)計(jì)

用數(shù)粒板隨機(jī)取1 000粒小麥種子，用上海佑科儀器儀表有限責(zé)任公司生產(chǎn)的電子天平（產(chǎn)品型號：JA2003N）進(jìn)行稱重，每種小麥籽粒均重復(fù)稱重3次（如果兩兩之間的千粒重差值大于0.5 g，則需重新稱重），計(jì)算平均值。

1.3 DNA 的提取

取小麥分蘗期的葉片，長度約2～3 cm，采用CTAB法[18]提取小麥總DNA。

1.4 引物的設(shè)計(jì)及擴(kuò)增

根據(jù)TaAGPL1 基因的3個(gè)拷貝（TaAGPL1-1A：TraesCS1A02G419600；TaAGPL1-1B： TraesCS1B02G449700; TaAGPL1-1D： TraesCS1D02G427400）（http：//plants. ensembl. org/Triticum_aestivum/Info/Index）中的序列差異設(shè)計(jì)TaAGPL1-1A/1B/1D 特異的啟動子以及編碼域擴(kuò)增引物；設(shè)計(jì)TaAGPL1-1B 基因定量引物和以小麥肌動蛋白基因（Actin）為內(nèi)參基因的引物（表1）。引物合成與測序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

以隨機(jī)選擇的150 份小麥品種的DNA為模板，分別利用TaAGPL1-1A/1B/1D-Pro-F/R，TaAGPL1-1A/1B/1D-CDS-F1/R1 與TaAGPL1-1A/1B/1D-CDS-F2/R2 這3 對引物，使用高保真酶KODOneTM PCR Master Mix（東洋紡生物公司）擴(kuò)增TaAGPL1 基因的啟動子與編碼區(qū)序列。

1.5 TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平測定

用RNA 提取試劑盒（TransGen Biotech，ET121-01）分別混合提取2種單倍型5～10個(gè)小麥品種的籽粒RNA，并運(yùn)用試劑盒（Vazyme，R223-01）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。采用RT-qPCR方法測定2種單倍型小麥籽粒內(nèi)TaAGPL1-1B 基因的表達(dá)量。TaAGPL1-1B 基因定量引物序列和以小麥肌動蛋白基因（Actin）為內(nèi)參基因的定量引物序列見表1。用熒光定量試劑（Vazyme，Q711-02）配置qPCR反應(yīng)體系，每管15 μL，每個(gè)樣品3次生物學(xué)重復(fù)。利用相對定量分析法（2-ΔΔCT 法）計(jì)算基因表達(dá)量[19]。

1.6 AGPase 酶活性測定

AGPase 酶活性測定的試劑盒（Solarbio，BC0430）購自索萊寶生物技術(shù)有限公司，具體測定方法參照試劑盒說明書。

1.7 基因序列分析和單倍型鑒定

使用DNAMAN 軟件對TaAGPL1 基因3 個(gè)拷貝的啟動子與編碼區(qū)序列測序結(jié)果進(jìn)行拼接以及序列比對；利用DnaSP 5.10 軟件（http：//www.ub.edu/DnaSP）對TaAGPL1-1B 多態(tài)性變異位點(diǎn)進(jìn)行單倍型鑒定。

1.8 數(shù)據(jù)處理

利用WPS Excel軟件進(jìn)行基礎(chǔ)數(shù)據(jù)處理，用SPSS 25.0軟件進(jìn)行差異顯著性分析和方差分析（ANOVA法）和多重比較（LSD法），用Origin 2021軟件制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 TaAGPL1 基因等位變異位點(diǎn)的檢測與單倍型的劃分

在小麥品種間基因組上分別擴(kuò)增得到TaAGPL1（TaAGPL1-1A/1B/1D）的編碼域與啟動子序列，對測序結(jié)果進(jìn)行拼接和序列比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TaAGPL1-1A/1D 的編碼域和啟動子序列在小麥品種間沒有發(fā)現(xiàn)等位變異位點(diǎn)，但TaAGPL1-1B基因序列上存在13個(gè)SNPs（圖1）。TaAGPL1-1B基因編碼域總長3 351 bp，包含15個(gè)外顯子（黑色方塊）和14個(gè)內(nèi)含子，第8和第11個(gè)外顯子上存在2個(gè)SNPs（1 944 A/C、2 567 C/T），第11和第12個(gè)內(nèi)含子上存在2個(gè)SNPs（2 613 G/A、2 793 C/T）；TaAGPL1-1B 基因啟動子區(qū)域總長2 225 bp（?2 225～0），存在9 個(gè)SNPs 多態(tài)性變異位點(diǎn)（?2 142 A/T、?1 864 A/C、?1 859 C/T、?1 732 G/A、?1 603 G/C、?1 514 C/T、?1 297 G/A、?1 288 G/A、?122 C/T）。這13個(gè)SNPs緊密連鎖形成2種單倍型，分別命名為Hap1和Hap2。

2.2 TaAGPL1-1B 優(yōu)異單倍型與淀粉含量之間的相關(guān)性

淀粉作為小麥籽粒中最重要的組成成分，其含量在很大程度上能反映小麥千粒重。相對于淀粉含量而言，小麥千粒重的檢測容易且結(jié)果準(zhǔn)確，故本研究將上述單倍型與千粒重進(jìn)行了相關(guān)分析，以解釋單倍型與淀粉含量之間的關(guān)系。對近年來我國不同麥區(qū)審定的239份小麥品種進(jìn)行單倍型鑒定，其中36個(gè)小麥品種屬于Hap1，平均千粒重為（41.07±0.60） g，出現(xiàn)頻率15.06%；203 個(gè)小麥品種屬于Hap2，平均千粒重為（43.39±0.25）g，出現(xiàn)頻率84.94%（表2和3）。2種單倍型的千粒重達(dá)極顯著差異，其中Hap2 為高千粒重單倍型。

2.3 TaAGPL1-1B 的功能標(biāo)記

分析Hap1和Hap2在1 944 bp位點(diǎn)的序列發(fā)現(xiàn)，SNP（A/C）位于序列ATAGAC和ATCGAC內(nèi)，后者可被限制性內(nèi)切酶TaqⅠ識別并切開，而前者不能被切開（圖2）。根據(jù)該位點(diǎn)差異開發(fā)出CAPS功能標(biāo)記用于區(qū)分2種單倍型，將該標(biāo)記命名為CAPS-1944。利用TaAGPL1-1B 基因特異的CAPS標(biāo)記識別的SNP位點(diǎn)上下游序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增引（表1）。通過擴(kuò)增不同單倍型小麥中TaAGPL1-1B 基因片段均能獲得單一擴(kuò)增條帶（443 bp）。然后使用Taq Ⅰ對純化的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，電泳檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Hap1小麥品種擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切后仍為單一條帶，而Hap2單倍型小麥品種擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切后則變?yōu)?個(gè)片段，分別為401和42 bp（圖2）。因此，CAPS-1944 分子標(biāo)記能夠區(qū)分TaAGPL1-1B 基因的2種單倍型，可被應(yīng)用于高淀粉含量或高千粒重小麥新品種的分子標(biāo)記輔助選擇育種。

2.4 高粒重的小麥品種屬于Hap2

TaAGPL1-1B 基因的等位變異可能會導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄水平的變化，進(jìn)而對AGPase 酶活性產(chǎn)生影響。為了檢測TaAGPL1-1B 基因等位變異位點(diǎn)引起的基因轉(zhuǎn)錄水平變化和AGPase酶活性差異，對不同單倍型小麥品種籽粒發(fā)育過程中的TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平和AGPase的酶活性進(jìn)行測定，結(jié)果如圖3所示?？梢钥闯?，在小麥籽粒灌漿后的第14 d，Hap2 的TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于Hap1，同時(shí)Hap1和Hap2的AGPase酶活性分別是（26.21±1.5）和（132.51±4.76） U·g-1，二者差異極顯著；在小麥籽粒灌漿后的第21 d，Hap2的TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平高于Hap1約3倍，而Hap1和Hap2的酶活性分別是（32.60±3.67）和（89.72±3.22） U·g-1，二者差異也達(dá)到極顯著水平，結(jié)果表明，單倍型Hap2 TaAGPL1-1B 基因具有更高的轉(zhuǎn)錄水平和AGPase 酶活性，為優(yōu)異單倍型，這與千粒重關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果相一致。AGPase催化淀粉合成的第一步，被認(rèn)為是淀粉生物合成過程中的限速酶，TaAGPL1 基因作為AGPase的大亞基基因，其轉(zhuǎn)錄水平能影響AGPase的酶活力，TaAGPL1-1B 基因的等位變異通過改變TaAGPL1-1B 基因的轉(zhuǎn)錄來提高AGPase的酶活力，可以有效加速還原糖在淀粉合成中的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而增加小麥的淀粉合成和千粒重。

3 討論

大多數(shù)作物在馴化和育種過程中會發(fā)生顯著的遺傳變化，對應(yīng)性狀的優(yōu)異基因及其優(yōu)異等位變異也經(jīng)歷作物生長世代的選擇[20]。在育種過程中高粒重或高淀粉含量是小麥育種的重要目標(biāo)性狀。我國現(xiàn)行國標(biāo) （GB/T 15683—2008） [21]采用比色法測定直鏈淀粉含量，主要原理是基于碘離子與直、支鏈淀粉生成的顯色反應(yīng)物，由于支鏈淀粉能與碘結(jié)合形成紫色絡(luò)合物，會對直鏈淀粉的測定造成干擾，引起測定誤差，進(jìn)而影響總淀粉含量的測定結(jié)果，同時(shí)應(yīng)用該方法檢測時(shí)間較長，部分試驗(yàn)步驟不易操作，試驗(yàn)的重復(fù)性與再現(xiàn)性較差[2223]。小麥千粒重與淀粉含量呈極顯著正相關(guān)[24]，TaAGPL1 作為小麥淀粉合成過程中的重要基因[10]，其優(yōu)異等位變異位點(diǎn)也在小麥育種過程中被不斷選擇，故將其等位變異位點(diǎn)與千粒重進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，以解釋TaAGPL1 優(yōu)異等位變異位點(diǎn)與淀粉含量之間的關(guān)系。前人根據(jù)47份國外小麥品種的測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TaAGPL1 基因的3個(gè)拷貝中只有B拷貝序列出現(xiàn)多態(tài)性，有67個(gè)SNPs和13個(gè)Indels，其中45個(gè)SNPs和13個(gè)Indels位于內(nèi)含子上，其余9 個(gè)SNPs 位于外顯子上，僅有4個(gè) SNPs（6 T/C、2 249 C/A、2 872 T/C、3 098 T/C）與小麥千粒重顯著相關(guān)聯(lián)[15]。Hou等[16]研究245份90年代審定的小麥品種發(fā)現(xiàn)，小麥品種間也僅有B拷貝序列上存在27個(gè)等位變異位點(diǎn)，其中啟動子上有5 個(gè)InDels（-1 777： 10 bp；-1 731： 3 bp；-1 610： 33 bp；-1 523： 1 bp；-1 476： 1 bp）和13個(gè)SNPs（-1 654 A/C、-1 650 G/A、-1 646 G/A、-1 606T/A、-1 301 G/C、-1 220 C/G、-1 174 C/G、-871 G/A、-691 G/A、-428 G/C、-367 T/C、-298 C/T、-122 T/C），基因編碼域有9 個(gè)SNPs（150 C/T、283 G/C、1 044 C/G、1 053 T/C、1 539 T/G、1 944 C/A、2 567 T/C、2 793 T/C、2 838 G/T），其中有3 個(gè)SNPs（-122T/C、150 C/T、283 G/C）與小麥千粒重顯著關(guān)聯(lián)。與這些研究結(jié)果相比，本研究在我國不同麥區(qū)239份現(xiàn)代小麥品種內(nèi)發(fā)現(xiàn)，僅TaAGPL1-1B 基因序列上存在13個(gè)SNPs位點(diǎn)，其中有9個(gè)SNPs位于啟動子（-2 142 A/T、-1 864 A/C、-1 859 C/T、-1 732 G/A、-1 603 G/C、-1 514 C/T、-1 297 G/A、-1 288 G/A、-122 C/T），有4個(gè)SNPs位于基因編碼域（1 944 A/C、2 567 C/T、2 613 G/A、2 793 C/T），這些SNPs連鎖形成2種單倍型與現(xiàn)代小麥品種的千粒重顯著關(guān)聯(lián)，但這13個(gè)SNP位點(diǎn)與上述國外小麥品種中出現(xiàn)的SNP 位點(diǎn)均不一致[15]，與Hou等[16]發(fā)現(xiàn)的SNP 位點(diǎn)有4 處相一致（圖1），表明TaAGPL1基因序列變異僅出現(xiàn)在B拷貝中，但隨著育種年代的推進(jìn)，新育成小麥品種中TaAGPL1-1B序列多態(tài)性的數(shù)量逐漸減少，且出現(xiàn)了新的SNP位點(diǎn)變異。

另外，本研究通過對2種單倍型小麥品種中的TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平和AGPase酶活性進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)，優(yōu)異單倍型Hap2的TaAGPL1-1B 基因轉(zhuǎn)錄水平和酶活性顯著高于非優(yōu)異單倍型Hap1（圖3），推測TaAGPL1-1B 基因的等位變異通過改變基因的轉(zhuǎn)錄水平來影響AGPase的酶活性，進(jìn)而調(diào)控小麥籽粒的淀粉合成和千粒重。Hou等[16]在我國20世紀(jì)90年代育成的小麥品種間發(fā)現(xiàn)TaAGPL1-1B 優(yōu)異單倍型千粒重為39.14～41.37 g，而本研究中TaAGPL1-1B 優(yōu)異單倍型的千粒重為43.14～43.64 g，高于前者，這與不同年代小麥品種間千粒重性狀不斷增加的趨勢相一致[2526]，表明TaAGPL1 基因B拷貝的等位變異位點(diǎn)在小麥育種過程中表現(xiàn)出較強(qiáng)的選擇性，可能是小麥品種演化過程中千粒重增加的主要因子之一。利用TaAGPL1-1B 基因開發(fā)的功能標(biāo)記，可在小麥溫室加代或生長發(fā)育的任何時(shí)期進(jìn)行快速和準(zhǔn)確選擇高淀粉含量或高粒重的小麥株系，加快小麥育種進(jìn)程。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ SHIFERAW B， SMALE M， BRAUN H J， et al .. Crops that feed

the world 10. Past successes and future challenges to the role

played by wheat in global food security [J]. Food Secur.， 2013，

5（3）： 291-317.

［2］ KUMAR A， MANTOVANI E E， SEETAN R， et al.. Dissection of

genetic factors underlying wheat kernel shape and size in an Elite×

Nonadapted cross using a high density SNP linkage map [J/OL].

Plant Genome， 2016， 9（1）： 0081 [2024-05-30]. https：//doi.org/

10.3835/plantgenome2015.09.0081.

［3］ ZHANG J J， SHE M Y， YANG R C， et al .. Yield-related QTL

clusters and the potential candidate genes in two wheat DH

populations [J/OL]. Int. J. Mol. Sci.， 2021， 22（21）： 11934

[2024-05-30]. https：//doi.org/10.3390/ijms222111934.

［4］ CHANG C， LU J， ZHANG H P， et al .. Copy number variation

of cytokinin oxidase gene Tackx4 associated with grain weight

and chlorophyll content of flag leaf in common wheat [J/OL].

PLoS One， 2015， 10（12）： e0145970 [2024-05-30]. https：//doi.

org/10.1371/journal.pone.0145970.

［5］ ABDEL-AAL E S M， HUCL P， CHIBBAR R N， et al ..

Physicochemical and structural characteristics of flours and

starches from waxy and nonwaxy wheats [J]. Cereal Chem.，

2002， 79（3）： 458-464.

［6］ TUMCEL A， OKITA T W. Improving starch yield in cereals by

over-expression of ADPglucose pyrophosphorylase： expectations

and unanticipated outcomes [J]. Plant Sci.， 2013， 211： 52-60.

［7］ YANG Y， GAO T， XU M J， et al .. Functional analysis of a

wheat AGPase plastidial small subunit with a truncated transit

peptide [J/OL]. Molecules， 2017， 22（3）： 386 [2024-05-30].

https：//doi.org/10.3390/molecules22030386.

［8］ BATRA R， SARIPALLI G， MOHAN A， et al .. Comparative

analysis of AGPase genes and encoded proteins in eight

monocots and three dicots with emphasis on wheat [J/OL].

Front. Plant Sci.， 2017， 8：00019 [2024-05-30]. https：//doi.org/

10.3389/fpls.2017.00019.

［9］ TANG X J， PENG C， ZHANG J， et al .. ADP-glucose

pyrophosphorylase large subunit 2 is essential for storage

substance accumulation and subunit interactions in rice

endosperm [J]. Plant Sci.， 2016， 249： 70-83.

［10］ KANG G Z， LIU G Q， PENG X Q，et al .. Increasing the starch

content and grain weight of common wheat by overexpression

of the cytosolic AGPase large subunit gene [J]. Plant Physiol.

Biochem.， 2013， 73： 93-98.

［11］ BAHAJI A， LI J， SáNCHEZ-LóPEZ á M， et al .. Starch

biosynthesis， its regulation and biotechnological approaches to

improve crop yields [J]. Biotechnol. Adv.， 2014， 32（1）： 87-106.

［12］ HOU J， JIANG Q Y， HAO C Y， et al .. Global selection on

sucrose synthase haplotypes during a century of wheat

breeding [J]. Plant Physiol.， 2014， 164（4）： 1918-1929.

［13］ ANDERSEN J R， LüBBERSTEDT T. Functional markers in

plants [J]. Trends Plant Sci.， 2003， 8（11）： 554-560.

［14］ THIEL T， KOTA R， GROSSE I， et al .. SNP2CAPS： a SNP and

INDEL analysis tool for CAPS marker development [J/OL].

Nucleic Acids Res.， 2004， 32（1）： e5 [2024-05-30]. https：//doi.

org/10.1093/nar/gnh006.

［15］ ROSE M K， HUANG X Q， BR?Lé -BABEL A. Molecular

characterization and sequence diversity of genes encoding the

large subunit of the ADP-glucose pyrophosphorylase in wheat

（Triticum aestivum L.） [J]. J. Appl. Genet.， 2016， 57（1）： 15-25.

［16］ HOU J， LI T， WANG Y M， et al .. ADP-glucose

pyrophosphorylase genes， associated with kernel weight，

underwent selection during wheat domestication and breeding [J].

Plant Biotechnol. J.， 2017， 15（12）： 1533-1543.

［17］ 陳杰，冉午玲，陳建輝，等. 黃淮麥區(qū)（南片）小麥粒重基因

TaGS-D1 和TaCwi-A1 等位變異檢測及效應(yīng)分析[J].麥類作

物學(xué)報(bào)， 2023， 43（4）： 409-416.

CHEN J， RAN W L， CHEN J H， et al .. Allelic variation

detection and effect analysis of grain weight genes TaGS-D1

and TaCwi-A1 in wheat from the Huanghuai wheat region

（southern region） [J]. J. Triticeae Crops， 2023， 43（4）： 409-416.

［18］ SAGHAI-MAROOF M A， SOLIMAN K M， JORGENSEN R A，

et al .. Ribosomal DNA spacer-length polymorphisms in barley：

mendelian inheritance， chromosomal location， and population

dynamics [J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 1984， 81（24）： 8014-

8018.

［19］ LIVAK K J， SCHMITTGEN T D. Analysis of relative gene

expression data using real-time quantitative PCR and the 2

（-Delta Delta C （T） ） Method [J]. Plant J.， 2001， 25（4）： 402-408.

［20］ SHI J P， LAI J S. Patterns of genomic changes with crop

domestication and breeding [J]. Curr. Opin. Plant Biol.， 2015，

24： 47-53.

［21］ 金玉紅，張開利，張興春，等.雙波長法測定小麥及小麥芽中直

鏈、支鏈淀粉含量[J].中國糧油學(xué)報(bào)， 2009， 24（1）： 137-140.

JIN Y H， ZHANG K L， WANG X C， et al .. Determination of

amylose and amylopectin in wheat and wheat malt by Dual-

Wavelength spectrophotometry [J]. J. Chin. Cereals Oils

Assoc.， 2009， 24（1）： 137-140.

［22］ 戴雙，程敦公，李豪圣，等.小麥直、支鏈淀粉和總淀粉含量

的比色快速測定研究[J]. 麥類作物學(xué)報(bào)， 2008， 28（3）：

442-447.

DAI S， CHENG D G， LI S H， et al .. Simultaneous and rapid

spectrophotometric determination of amylose， amylopectin， and

total starch in wheat grain [J]. J. Triticeae Crops， 2008， 28（3）：

442-447.

［23］ 李小明.直鏈淀粉快速檢測方法的研究與應(yīng)用[J].糧油食品

科技， 2018， 26（2）： 58-62.

LI X M. Study and application of rapid detection method of

amylose [J]. Sci. Technol. Cereals， Oils Foods， 2018， 26（2）：

58-62.

［24］ SMIDANSKY E D， ClANCY M， MEYER F D， et al .. Enhanced

ADP-glucose pyrophosphorylase activity in wheat endosperm

increases seed yield [J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA， 2002，

99（3）： 1724-1729.

［25］ 劉海浪，金彥剛，楊永樂，等. 2005—2019年江蘇省冬小麥品

種的性狀分析[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2022， 38（13）： 7-12.

LIU H L， JIN Y G， YANG R L， et al .. Character analysis of

winter wheat varieties in Jiangsu province from 2005 to 2019 [J].

Anhui Agric. Sci. Bull.， 2022， 38（13）： 7-12.

［26］ 王漢霞，單福華，田立平，等. 2006—2018年北京市審定冬小麥

品種的綜合性狀分析[J].麥類作物學(xué)報(bào)， 2020， 40（7）： 789-795.

WANG H X， SHAN F H， TIAN L P， et al .. Analysis of

comprehensive characteristics of wheat varieties registered in

Beijing from 2006 to 2018 [J]. J. Triticeae Crops， 2020， 40（7）：

789-795.