摘要：【目的】利用葡萄自然群體對(duì)已有9個(gè)無(wú)核分子標(biāo)記進(jìn)行評(píng)價(jià)，驗(yàn)證其無(wú)核檢測(cè)通用性效果，為加快無(wú)核葡萄新品種選育進(jìn)程提供技術(shù)支持?！痉椒ā恳?8個(gè)無(wú)核種質(zhì)和120個(gè)有核種質(zhì)組成的自然群體為試材，對(duì)國(guó)內(nèi)外已發(fā)表的9個(gè)常用葡萄無(wú)核分子標(biāo)記進(jìn)行通用性驗(yàn)證?！窘Y(jié)果】SCAR類(lèi)型標(biāo)記GSLP1-569、SCC8-1080和SCF27-2000的鑒定準(zhǔn)確率分別為57.12%、72.20%和75.38%，無(wú)核檢測(cè)率分別為90.51%、79.18%和67.82%。SSR類(lèi)型標(biāo)記p1-VvAGL11、p2-VvAGL11、p3-VvAGL11、5U_VviAGL11、VMC7F2和VVSD10的鑒定準(zhǔn)確率分別是88.47%、67.43%、71.94%、68.47%、67.99%和61.60%，無(wú)核檢測(cè)率分別是87.74%、77.22%、90.72%、90.80%、79.10%和63.03%；卡方分析表明與無(wú)核表型極顯著相關(guān)的等位點(diǎn)分別是250 bp、171 bp、195 bp、315 bp、197 bp和105 bp?！窘Y(jié)論】SCAR標(biāo)記SCF27-2000和SSR標(biāo)記p1-VvAGL11準(zhǔn)確率高，綜合表現(xiàn)最優(yōu)，適用于無(wú)核葡萄新品種的分子輔助選擇。

關(guān)鍵詞：葡萄；無(wú)核；分子標(biāo)記；準(zhǔn)確率；驗(yàn)證

中圖分類(lèi)號(hào)：S663.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1009-9980（2024）07-1438-

Validation of the generality of molecular markers for seedless fruit ingrape

ZHANG Quan1，2，LIU Chonghuai2，F(xiàn)AN Xiucai2，ZHANG Ying2，SUN Lei2，JIANG Jianfu2*，GUO Dalong1*

（1College of Horticulture and Plant Protection，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471000，Henan，China;2Zheng- zhou Fruit Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450000，Henan，China）

Abstract：【Objective】The natural population of grape（Vitis vinifera L.）was used to evaluate the uni-versality of 9 molecular markers for seedless fruit in order to provide technical support for the breeding of new seedless grape varieties.【Methods】DNA was extracted from healthy and young samples of a natural population consisting of 88 seedless germplasmes and 120 nucleatedgermplasmes.PCR amplifi-cation was performed using 9 reported molecular markers for seedless fruit of grape.Then，the PCR products were detected by 1.5%agarose gel electrophoresis and capillary electrophoresis，and the spe-cific bands were analyzed.The accuracy rate and seedless detection rate were calculated respectively to verify the versatility of 9 molecular markers for seedless fruit of grape.【Results】Among 208 grape germplasmes，16 germplasmes were detected by SCAR marker GSLP1-569，including 14 seedless germplasmes and 2 seeded germplasmes.The 14 seedless varieties were Summer Black，Changwuhebai Etc.among others.And，among them，12 germplasmes were Thompson Seedless and its derivatives.The identification accuracy and nuclear-free detection rate were 57.12%and 90.51%，respectively.Addi-tionally，the 1080 bp specific band was amplified by SCC8-1080 in 53 seedless germplasmes and 19 seeded germplasmes，and the statistical identification accuracy and seedless detection rate were 72.20%and 79.18%，respectively.Moreover，the 2000 bp specific band was amplified by SCF27-2000 in 87seedless germplasmes and 55 seeded germplasmes.The statistical identification accuracy and seedless detection rate were 75.38%and 67.82%，respectively.Furthermore，a total of 6 isotopic point and 8 gen-otypes were detected by the SSR marker p1-VvAGL11.The chi-square test showed that the allele 250 bp was significantly correlated with the nuclear-free phenotype and 257 bp was significantly correlated with nucleated phenotype.The genotype 250/250 was significantly correlated with the nuclear-free phe-notype，and the genotype 257/257 was significantly correlated with the nuclear phenotype.The statisti-cal identification accuracy and nuclear-free detection rate of the marker were 88.47%and 87.74%，re-spectively.A total of 3 isotopic point and 5 genotypes were detected by the marker p2-VvAGL11.The chi-square test showed that the allele 171 bp was significantly correlated with the nuclear-free pheno-type.The 158 bp was significantly correlated with the nuclear phenotype.The genotype 158/171 was significantly correlated with the seedless phenotype，and the genotype 158/158 was significantly corre-lated with the nuclear phenotype.The accuracy of marker identification and seedless detection rate were 67.43%and 77.22%，respectively.A total of 14 isotopic point and 30 genotypes were detected by the marker p3-VvAGL11.The chi-square test showed that the allele 195 bp was significantly correlated with the nuclear-free phenotype and 185 bp was significantly correlated with the nucleated phenotype.The genotype 185/195 was significantly associated with the nuclear-free phenotype.The genotype 185/185 was significantly correlated with the nuclear phenotype，and the accuracy and nuclear-free detection rate of the marker were 71.94%and 90.72%，respectively.A total of 24 isotopic point and 75 genotypes were detected by the marker 5U_VviAGL11.The chi-square test indicated that the allele 315 bp was significantly correlated with the nuclear-free phenotype and 305 bp was significantly associated with nu-cleated phenotype.The genotype 307/315 was significantly correlated with the nuclear-free phenotype.The accuracy and nuclear-free detection rate of the marker were 68.47%and 90.80%，respectively.A to-tal of 8 isotopic point were detected in the marker VMC7F2，and the allele 197 bp was significantly cor-related with the seedless phenotype by chi-square test.199 bp was significantly correlated with one phe-notype.The genotype 197/199 was significantly associated with the nuclear-free phenotype.The geno-type 199/199 was significantly correlated with the nuclear phenotype，and the accuracy and non-nuclear detection rate of the marker were 67.99%and 79.10%，respectively.A total of 9 isotopic point and 21 genotypes were detected by the marker VVSD10.The chi-square test showed that the allele 105 bp was significantly correlated with the nuclear-free phenotype，and the genotype 105/105 was significantly correlated with the nuclear-free phenotype.The identification accuracy and nuclear-free detection rate of the marker were 61.60%and 63.03%，respectively.【Conclusion】Among the SCAR type markers，SCF27-2000 had the highest accuracy and true positive rate，and the performance was the best.And，GSLP1-569 was more suitable for the hybrid offspring of Thompson seedless series.Among the SSR markers，p 1-VvAGL11 had good accuracy and seedless detection rate，and the 1 negative and 1 positive were low，showing the best performance，while p3-VvAGL11 and 5U_VviAGL11 had higher seedless detection rate，and 5U_VviAGL11 contained more genetic information.

Keywords：Grape;Seedless;Molecular marker;Accuracy;Verify

葡萄（Vitis vinifera L.）是葡萄科葡萄屬植物，被廣泛應(yīng)用于鮮食、釀酒、制汁、制干等[1]。無(wú)核葡萄因其食用方便，口感佳，而深受消費(fèi)者喜愛(ài)，因此無(wú)核已成為國(guó)內(nèi)外葡萄育種工作的重要目標(biāo)之一[2-3]。

葡萄童期較長(zhǎng)，無(wú)核表型僅能在成年結(jié)果植株中進(jìn)行篩選，造成無(wú)核葡萄新品種選育進(jìn)程緩慢[4]。DNA標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，為植物育種提供了新的方向，通過(guò)標(biāo)記輔助選擇（Marker assisted-selec-tion，MAS）可以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)性狀在幼苗期的鑒定，縮短育種周期[5]。因此，篩選準(zhǔn)確高效的葡萄無(wú)核分子標(biāo)記對(duì)育種工作有重要意義。目前國(guó)內(nèi)外基于葡萄無(wú)核主要位點(diǎn)SDI（Seed Development Inhibi-tor，種子發(fā)育抑制）開(kāi)發(fā)了一系列無(wú)核分子標(biāo)記[6-7]，主要包括序列特征擴(kuò)增區(qū)（Sequence Characterized Amplified Region，SCAR）和簡(jiǎn)單重復(fù)序列（Simple Sequence Repeats，SSR）兩種標(biāo)記[8-10]。MEJíA等[11]通過(guò)集群分離分析法（Bulk Segregant Analysis，BSA），利用紅寶石無(wú)核×蘇丹娜的雜交群體開(kāi)發(fā)了SCAR標(biāo)記SCF27-2000，該標(biāo)記可以結(jié)合無(wú)核相關(guān)基因擴(kuò)增出2.0 kb的特異性片段。GSLP1-569是王躍進(jìn)等[12]采用自動(dòng)熒光DNA序列分析儀對(duì)葡萄無(wú)核基因的RAPD標(biāo)記UBC-269450進(jìn)行測(cè)序后，按照該序列人工合成的寡聚核苷酸，利用該標(biāo)記可以對(duì)攜帶無(wú)核基因或表達(dá)無(wú)核性狀的葡萄DNA擴(kuò)增出約590bp的特殊片段。馬亞茹等[13]通過(guò)紅地球×森田尼無(wú)核及F1雜交群體開(kāi)發(fā)了SSR標(biāo)記VvSD10，可以在111bp等位點(diǎn)對(duì)葡萄無(wú)核性狀進(jìn)行鑒定?，F(xiàn)有的葡萄無(wú)核分子標(biāo)記準(zhǔn)確率多在特定雜交群體中進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證效率與親本關(guān)聯(lián)度較高，但在自然群體中的鑒定效率尚不明確，不能滿(mǎn)足葡萄無(wú)核育種需求[14]。

筆者在本試驗(yàn)中在國(guó)內(nèi)外研究的基礎(chǔ)上，對(duì)已報(bào)道的3個(gè)SCAR標(biāo)記和6個(gè)SSR標(biāo)記進(jìn)行通用性驗(yàn)證，以期從中篩選出適用于自然群體的葡萄無(wú)核分子標(biāo)記，為加快無(wú)核葡萄新品種選育進(jìn)程提供技術(shù)參考。

1材料和方法

1.1材料

試驗(yàn)于2022—2023年在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹(shù)研究所進(jìn)行。試驗(yàn)共208份種質(zhì)，包含無(wú)核種質(zhì)88份和有核種質(zhì)120份（表1），試驗(yàn)所用材料均保存于國(guó)家葡萄種質(zhì)資源圃（鄭州）。

1.2 DNA提取

取葡萄健康幼嫩葉片，液氮研磨，采用CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒（北京艾德萊生物科技有限公司）提取葉片基因組DNA。利用Nano-Drop 1000 spectrophotometer（Themo Scientific）紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度和純度，然后將DNA濃度稀釋到工作液質(zhì)量濃度（約20 ng·μL-1），保存于-20℃，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3無(wú)核分子標(biāo)記選擇及PCR擴(kuò)增條件

選用9個(gè)已報(bào)道的與葡萄無(wú)核表型相關(guān)的分子標(biāo)記（表2），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，含F(xiàn)AM熒光探針的SSR引物由北京擎科生物科技股份有限公司合成。

PCR反應(yīng)體系如下：SCAR標(biāo)記PCR反應(yīng)體系25μL：2×Taq Master Mix 15μL，正、反向引物各1μL（20μmol·L-1），DNA模板（20 ng·μL-1）2μL，ddH2O 6μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性3 min；95℃變性10 s，適宜Tm值退火10 s，72℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min，擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。SSR標(biāo)記PCR反應(yīng)體系30μL：1×TSE101金牌Mix 27μL，正、反向引物各1μL，DNA模板1μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?8℃預(yù)變性3 min；98℃變性10 s，適宜Tm值退火10 s，72℃延伸5min，37個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。

1.4 PCR產(chǎn)物檢測(cè)

SCAR標(biāo)記的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳25～30 min（恒壓150 V），使用UV凝膠成像儀拍照記錄。SSR標(biāo)記的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳（2μL樣品+6μL溴酚藍(lán)），300 V電壓下12 min，獲取鑒定膠圖，通過(guò)膠圖確定模板濃度，加無(wú)菌水稀釋后采用熒光毛細(xì)管電泳（ABI 3730 XL遺傳分析儀）進(jìn)行驗(yàn)證。

1.5數(shù)據(jù)處理

參考馬亞茹等[13]、Baldi等[18]和Vihinen[19]的方法分別計(jì)算真陽(yáng)性（True Positive，TP）、真陰性（True Negative，TN）、假陽(yáng)性（False Positive，F(xiàn)P）、假陰性（False Negative，F(xiàn)N）、準(zhǔn)確率（Accuracy）和無(wú)核檢測(cè)率（Nuclear-free Detection Rate，NDR）。

準(zhǔn)確率=（TP+TN）/（TP+FP+TN+FN）×100%，無(wú)核檢測(cè)率=TP/（TP+FP）×100%。并利用SPSS軟件對(duì)樣本表型與不同的SSR標(biāo)記的等位點(diǎn)及基因型之間進(jìn)行卡方（χ2）獨(dú)立性檢驗(yàn)（p＜0.05），用于評(píng)估表型和試驗(yàn)數(shù)據(jù)之間的關(guān)聯(lián)程度。

2結(jié)果與分析

2.1 SCAR標(biāo)記驗(yàn)證及不同標(biāo)記間準(zhǔn)確率比較

在208個(gè)葡萄種質(zhì)中驗(yàn)證SCAR類(lèi)型無(wú)核標(biāo)記的通用性。結(jié)果如表3所示，標(biāo)記GSLP1-569在葡萄種質(zhì)間的鑒定準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是57.12%和90.51%。檢測(cè)到的16個(gè)種質(zhì)包含14個(gè)無(wú)核種質(zhì)和2個(gè)有核種質(zhì)，其中11個(gè)無(wú)核種質(zhì)是無(wú)核白及其衍生后代，可見(jiàn)GSLP1-569適合針對(duì)無(wú)核白及其后代的檢測(cè)。標(biāo)記SCC8-1080分別在53個(gè)無(wú)核種質(zhì)和19個(gè)有核種質(zhì)中擴(kuò)增出1080bp的特異性條帶，經(jīng)統(tǒng)計(jì)在208個(gè)葡萄種質(zhì)間的鑒定準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是72.20%和79.18%；標(biāo)記SCF27-2000分別在87個(gè)無(wú)核種質(zhì)和55個(gè)有核種質(zhì)中擴(kuò)增出2000bp的特異性條帶，在208個(gè)種質(zhì)間的鑒定準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是75.38%和67.82%。3個(gè)SCAR類(lèi)型標(biāo)記中SCF27-2000的準(zhǔn)確率和真陽(yáng)性最高；標(biāo)記GSLP1-569有較高的無(wú)核檢測(cè)率、假陰性和真陰性。鑒定結(jié)果表明，在針對(duì)自然群體的檢測(cè)中SCF27-2000綜合表現(xiàn)最優(yōu)，適用于無(wú)核葡萄新品種的SCAR分子輔助選擇。

2.2 SSR標(biāo)記檢測(cè)標(biāo)記位點(diǎn)及基因型分析

對(duì)6個(gè)SSR無(wú)核標(biāo)記的通用性進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果表明：6個(gè)標(biāo)記分別檢測(cè)到3～24個(gè)不等的標(biāo)記位點(diǎn)，這些位點(diǎn)大小為101～321 bp，標(biāo)記p2-VvAGL11檢測(cè)到的位點(diǎn)最少，5U_VviAGL11檢測(cè)到的位點(diǎn)最多。每個(gè)標(biāo)記表現(xiàn)最好的標(biāo)記位點(diǎn)如表4所示，經(jīng)卡方檢驗(yàn)與種子有無(wú)均呈極顯著相關(guān)，檢測(cè)出這些位點(diǎn)的種質(zhì)中無(wú)核種質(zhì)占41.4%～89.4%，p1-VvAGL11的250 bp占比最高，同時(shí)在41.7%的三倍體種質(zhì)中檢測(cè)到該位點(diǎn)。這些位點(diǎn)在56.1%～88.1%的無(wú)核葡萄種質(zhì)中檢測(cè)到，5U_VviAGL11的315 bp占比最高，在三倍體種質(zhì)中未檢測(cè)到該位點(diǎn)。

6個(gè)標(biāo)記分別檢測(cè)到5～75種數(shù)量不等的基因型，標(biāo)記p2-VvAGL11檢測(cè)到的基因型數(shù)量最少，5U_VviAGL11檢測(cè)到的數(shù)量最多。每個(gè)標(biāo)記表現(xiàn)最好的基因型如表5所示，經(jīng)卡方檢驗(yàn)與葡萄種子有無(wú)極顯著相關(guān)。檢測(cè)到這6種基因型的種質(zhì)中，71%～93.3%的種質(zhì)為無(wú)核表型，標(biāo)記5U_VviA-GL11檢測(cè)到的種質(zhì)中無(wú)核種質(zhì)占比最高；無(wú)核種質(zhì)中24.4%～86.7%的種質(zhì)檢測(cè)出這6種基因型，其中p1-VvAGL11檢測(cè)到的250/250在無(wú)核種質(zhì)中占比最高；有核種質(zhì)中僅有1.7%～24.2%檢測(cè)到這6種基因型；5U_VviAGL11檢測(cè)到的307/315在有核種質(zhì)中占比最低。

2.3 SSR標(biāo)記驗(yàn)證及不同標(biāo)記間準(zhǔn)確率比較

對(duì)6個(gè)SSR類(lèi)型無(wú)核標(biāo)記進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果（表6）顯示p1-VvAGL11準(zhǔn)確率最高，達(dá)到88.47%，無(wú)核檢測(cè)率為87.74%。p3-VvAGL11和5U_VviAGL11的無(wú)核檢測(cè)率較高，分別為90.72%和90.80%，同時(shí)二者的真陰性也最高，分別為95.00%和95.83%。p1-VvAGL11真陽(yáng)性最高，為89.44%；6個(gè)標(biāo)記假陽(yáng)性均表現(xiàn)良好，最高是VVSD10，為32.92%，最低是p3-VvAGL11，僅為5.00%。整體上p1-VvAGL11綜合表現(xiàn)最優(yōu)，適用于無(wú)核葡萄新品種的SSR分子輔助選擇。

3討論

葡萄基因型高度雜合，童期長(zhǎng)，導(dǎo)致育種進(jìn)程相對(duì)緩慢[20]。通常對(duì)果實(shí)無(wú)核表型的篩選，只能等植株成年之后才能進(jìn)行。而利用準(zhǔn)確率高的分子標(biāo)記進(jìn)行輔助選擇育種，可以有效縮短育種年限，提高育種效率，推動(dòng)無(wú)核葡萄育種的進(jìn)程[21]。

國(guó)內(nèi)外對(duì)開(kāi)發(fā)葡萄無(wú)核分子標(biāo)記進(jìn)行了系統(tǒng)研究，屈田田等[22]通過(guò)不同葡萄雜交組合實(shí)生后代對(duì)GSLP1-569進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明其在檢測(cè)無(wú)核白的后代時(shí)有著更高的準(zhǔn)確性。在本研究中，GSLP1-569檢測(cè)出的14個(gè)無(wú)核品種中有11個(gè)品種與無(wú)核白有遺傳關(guān)聯(lián)，證實(shí)GSLP1-569較為適合檢測(cè)無(wú)核白及其衍生后代。朱瑜等[23]利用該標(biāo)記對(duì)木納格的胚挽救后代進(jìn)行鑒定，成功獲得了21個(gè)無(wú)核株系。SCC8-1080是Lahogue等[15]運(yùn)用BSA技術(shù)開(kāi)發(fā)出的離無(wú)核位點(diǎn)更近的SCAR標(biāo)記，也是目前應(yīng)用較多的標(biāo)記之一[22]。Ryan等[24]通過(guò)對(duì)火焰無(wú)核及其F1組成的雜交群體進(jìn)行檢測(cè)，證實(shí)SCC8-1080能準(zhǔn)確鑒定F1中無(wú)核表型的植株，宣旭嫻[25]研究表明該標(biāo)記在無(wú)核群體中對(duì)殘核和三倍體中的無(wú)核分型正確率分別是52.94%和50.00%，在自然群體中其無(wú)核分型正確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是73.08%和43.18%。在本研究中，該標(biāo)記的準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是72.20%和79.18%，這種差異可能是試驗(yàn)材料選擇差異造成的。SCF27-2000是Mejía等[11]利用RAPD標(biāo)記技術(shù)通過(guò)對(duì)隨機(jī)引物篩選之后進(jìn)行測(cè)序分析轉(zhuǎn)化而成的SCAR標(biāo)記，宣旭嫻[25]的研究結(jié)果表明，該標(biāo)記在無(wú)核群體中對(duì)殘核、軟核和三倍體品種無(wú)核分型正確率分別是94.12%、100%和66.67%，在自然群體中的無(wú)核分型正確率是92.31%，無(wú)核檢測(cè)率為42.11%。Akkurt等[26]利用Alphonse Lavallee與無(wú)核白的372株F1雜交后代對(duì)SCF27-2000進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明該標(biāo)記更適用對(duì)親本均為無(wú)核的雜交后代進(jìn)行鑒定。王勇等[27]利用SCF27-2000在14份葡萄種質(zhì)資源和火州黑玉3個(gè)雜交組合共116株胚挽救后代中檢測(cè)到84株攜帶目的基因片段，其中81株與田間鑒定結(jié)果吻合，正確率96.4%，并認(rèn)為該標(biāo)記是一個(gè)顯性或主效基因標(biāo)記，可以用來(lái)進(jìn)行葡萄雜交后代無(wú)核單株的早期篩選。

p1-VvAGL11、p2-VvAGL11和p3-VvAGL11是Mejía等[8]將遺傳圖譜和物理圖譜與歐亞種葡萄的公共基因組序列進(jìn)行整合，對(duì)無(wú)核葡萄雜交后代進(jìn)行QTL分析之后篩選出的三個(gè)SSR類(lèi)型標(biāo)記，并證實(shí)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)越近的標(biāo)記越適合用于基因的輔助選擇。安棟梁[28]在自然群體中的驗(yàn)證表明，p3-VvA-GL11驗(yàn)證結(jié)果最優(yōu)，無(wú)核品種擴(kuò)增結(jié)果中雜合基因型ab的解釋率為58.86%，在有核品種擴(kuò)增結(jié)果中純合基因型BB解釋率達(dá)到66.67%，可以有效區(qū)分種子狀況。在針對(duì)p3-VvAGL11的研究中Ocarez等[17和陳豆豆等[20]分別認(rèn)為與194bp和187bp標(biāo)記位點(diǎn)極顯著相關(guān)，而筆者在本研究結(jié)果中表明，195 bp位點(diǎn)與無(wú)核表型相關(guān)性最顯著。在進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證試驗(yàn)時(shí)，儀器或試驗(yàn)操作會(huì)造成擴(kuò)增片段長(zhǎng)度出現(xiàn)偏差[29]，因此使用該類(lèi)型標(biāo)記時(shí)，應(yīng)加入標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行校對(duì)，從而減小試驗(yàn)誤差。在本研究中，p1-VvA-GL11、p2-VvAGL11和p3-VvAGL11在自然群體中鑒定準(zhǔn)確率分別是88.47%、67.43%和71.94%，無(wú)核檢測(cè)率分別是87.74%、77.22%和90.72%，相比之下p1-VvAGL11表現(xiàn)出更高的準(zhǔn)確性，而p3-VvAGL11則表現(xiàn)出更高的無(wú)核檢測(cè)率。5U_VviAGL11是Ocarez等[17]根據(jù)p3-VvAGL11等位點(diǎn)的分子多樣性重新設(shè)計(jì)的位于VvAGL11啟動(dòng)子區(qū)域的SSR標(biāo)記，含有更豐富的遺傳信息。前人驗(yàn)證表明其等位點(diǎn)306 bp與無(wú)核表型極顯著相關(guān)，270 bp和298 bp與無(wú)核相關(guān)[20]，在本研究中，5U_VviAGL11在自然群體中鑒定準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率分別是68.47%和90.8%。VMC7F2是Cabezas等[16]利用QTL定位到與葡萄無(wú)核性狀有關(guān)基因后經(jīng)篩選設(shè)計(jì)的SSR標(biāo)記，其198bp等位點(diǎn)與無(wú)核表型顯著相關(guān)。Akkurt等[26]使用SCC8-1080、SCF27-2000和VMC7f2在Al-phonse Lavallee與無(wú)核白的372株F1雜交后代中進(jìn)行檢測(cè)，分別檢測(cè)到40、80和174個(gè)無(wú)核株系，并選用了在3個(gè)標(biāo)記中均表現(xiàn)無(wú)核特征的20個(gè)子代進(jìn)行研究，結(jié)果顯示VMC7f2與無(wú)核性狀關(guān)聯(lián)最緊密。

除筆者在本研究中所用的SCAR和SSR類(lèi)型標(biāo)記外，單核苷酸多態(tài)性（Simple Nucleotide Polymor-phisms，SNP）技術(shù)逐漸成為研究熱點(diǎn)[30]，Ocarez等[17]用20K SNP芯片對(duì)573個(gè)無(wú)核單株進(jìn)行基因分型和精細(xì)化QTL定位分析，并根據(jù)p3_VvAGL11等位基因的分子多樣性重新設(shè)計(jì)了該標(biāo)記，得到了SNP標(biāo)記E7_VviAGL11。隨著高通量自動(dòng)化檢測(cè)方法的更新?lián)Q代，基因芯片、高通量檢測(cè)技術(shù)等SNP檢測(cè)技術(shù)也逐漸普及，能夠更快速、成本更低且更準(zhǔn)確地檢測(cè)出已知的SNP位點(diǎn)，為無(wú)核葡萄育種提供參考。對(duì)于育種工作者而言，高效、準(zhǔn)確的無(wú)核鑒定標(biāo)記可加快田間育種進(jìn)度，降低育種成本，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。本研究試驗(yàn)材料中，出現(xiàn)個(gè)別名稱(chēng)中有“無(wú)核”的品種，在田間調(diào)查時(shí)出現(xiàn)種子充分發(fā)育情況，這可能是命名問(wèn)題或者引種記錄錯(cuò)誤所致，種子狀況以田間調(diào)查結(jié)果為準(zhǔn)。

4結(jié)論

通過(guò)由88份無(wú)核種質(zhì)和120份有核種質(zhì)組成的葡萄自然群體對(duì)3個(gè)SCAR無(wú)核標(biāo)記和6個(gè)SSR無(wú)核標(biāo)記進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明SCAR類(lèi)型標(biāo)記中SCF27-2000準(zhǔn)確率和真陽(yáng)性最高，表現(xiàn)最優(yōu)，GSLP1-569更適用于無(wú)核白系列的雜交后代；SSR標(biāo)記中p1-VvAGL11有著較高的準(zhǔn)確率和無(wú)核檢測(cè)率，且假陰性和假陽(yáng)性較低，表現(xiàn)最優(yōu)。

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