[摘要]目的：評價含有中藥復方提取物的一款防脫抑菌洗發(fā)劑的安全性及功效。方法：以丹參、黃芩、人參、側柏葉、姜根五種中藥提取物為原料，制備一款防脫抑菌洗發(fā)產品，按照相關標準和方法進行感官、理化、衛(wèi)生指標評價；采用急性眼刺激試驗、急性皮膚刺激試驗、人體皮膚斑貼試驗對洗發(fā)劑進行安全性評價；通過馬拉色菌抑菌性能測試、產品使用前后脫發(fā)計數、整體毛發(fā)密度視覺評估和受試者自評，考察洗發(fā)劑的抑菌防脫功效。結果：研制的洗發(fā)劑感官、理化、衛(wèi)生各項指標均符合國家標準；產品通過安全性評價，未發(fā)生不良反應；對馬拉色菌的抑菌率大于50%；產品使用前后防脫效果差異有統(tǒng)計學意義，且100%的受試者整體認同該產品。結論：該洗發(fā)產品性能優(yōu)良，對人體安全無刺激，抑菌及防脫效果顯著，具有良好的市場應用前景。

[關鍵詞]中藥復方；洗發(fā)劑；防脫；抑菌；安全性評價

[中圖分類號]R275.9" " [文獻標志碼]A" " [文章編號]1008-6455（2024）11-0011-06

Safety and Efficacy Evaluation of A Hair Loss Control and Antibacterial Shampoo Containing A Combination of Traditional Chinese Medicine

YIN Ying， YAO Minna， GUO Chao， WANG Yanhua， LI Ruili， DING Yi， WANG Jingwen

（ Department of Pharmacy， Xijing Hospital， Air Force Medical University， Xi’an 710032， Shaanxi， China ）

Abstract： Objective" To evaluate the safety， antibacterial efficacy and hair loss control effect of a shampoo containing Chinese herbal compound extracts. Methods" Five kinds of traditional Chinese medicine extracts such as Salvia miltiorrhiza， Scutellaria baicalensis， Ginseng， Cacumen Biotae and Ginger Root were used as raw materials for preparing a hair loss control and antibacterial shampoo. First， evaluation of the sensory， physical and chemical， and hygienic indicators of the shampoo in accordance with relevant standards and methods. Then， the safety evaluation of the shampoo was carried out by acute eye irritation test， acute skin irritation test， and human skin patch test. Finally， the antibacterial and hair loss control efficacy of shampoo product were investigated through Malassezia antibacterial ability test， hair loss counts， visual assessment of overall hair density， and subjects’self-evaluation after using the product. Results" The sensory， physical and chemical， and hygienic indicators of the shampoo were in line with the national standards. The product passed safety evaluation with no adverse reactions; The antibacterial rate of the shampoo against Malassezia was greater than 50%. The difference in hair loss control effect between before and after use of the product was significant， and 100% of the subjects approved of the product overall. Conclusion" The shampoo has excellent performance. It is safe and non-irritating to human skin， while the antibacterial and hair loss control effects are remarkable. These means the product has a good market application prospect.

Key words： traditional Chinese medicine compound; shampoo; hair loss control; antibacterial; safety evaluation

隨著社會發(fā)展，脫發(fā)發(fā)生率逐年攀升，防脫生發(fā)的需求日益增多。脫發(fā)常常是多因素共同作用的結果，其中脂溢性皮炎是最常見的因素之一。脂溢性脫發(fā)發(fā)病機制尚未完全明確，主要與遺傳易感性、性腺激素分泌失調、局部炎癥反應等有關，目前尚缺乏有效治療手段[1-3]。常見治療方法主要有毛發(fā)移植、藥物治療以及使用頭皮護理產品，但手術治療存在創(chuàng)傷大、費用高、毛囊獲取有限、炎癥并發(fā)癥等缺點[4]，非那雄胺、米諾地爾等藥物因治療周期長，易導致皮膚刺激、多毛癥、心動過速、性功能障礙等不良反應而受到限制[5-6]。因此，大多數人傾向于生活中日常防護，頭皮護理產品如洗發(fā)水等作為和頭發(fā)接觸最多的日用品，在解決毛發(fā)問題上有一定便利性，防脫洗發(fā)劑作為功能型洗發(fā)水的一種，順勢成為當前研究熱點。

我國傳統(tǒng)中藥應用于脫發(fā)治療已有悠久歷史，研究發(fā)現醫(yī)書中記載的具有防脫功效的中草藥主要通過促進頭皮血液循環(huán)、改善毛囊生長發(fā)育，以及抑菌抗炎等而發(fā)揮藥效[7]。因此，本文以丹參、黃芩、人參、側柏葉、姜根提取物為主要藥效成分，按照特定比例復配一款新的防脫抑菌洗發(fā)劑，采用家兔急性眼刺激試驗、急性皮膚刺激試驗、人體皮膚斑貼試驗對洗發(fā)劑進行安全性評價；通過馬拉色菌抑菌性能測試、產品使用前后脫發(fā)計數、整體毛發(fā)密度視覺評估，并結合受試者感官評價，考察洗發(fā)劑的抑菌、防脫、清潔、柔順、蓬松等功效。本研究可為所配洗發(fā)劑的安全性及防脫抑菌功效提供基礎數據，以期開發(fā)出具有防脫抑菌雙重功效的安全、穩(wěn)定的洗發(fā)產品。

1" 材料和方法

1.1 主要試劑與材料：月桂醇聚醚硫酸酯鈉[巴斯夫（中國）有限公司]、月桂醇硫酸酯銨[巴斯夫（中國）有限公司]、椰油酰胺丙基甜菜堿（廣州星業(yè)科技股份有限公司）、椰油酰胺MEA（巴斯夫（中國）有限公司）、乙二醇二硬脂酸酯[巴斯夫（中國）有限公司]、泛醇（山東巨榮生物工程有限公司）、吡羅克酮乙醇胺鹽（南京斯拜科生化實業(yè)公司）、吡哆素（廣州中廣生物科技有限公司）、蠶絲膠蛋白（蘭州沃特萊斯生物科技有限公司）、瓜爾膠羥丙基三甲基氯化銨（科譽新材料有限公司）、聚季銨鹽-7（廣州和順化工有限公司）、PEG120甲基葡糖二油酸酯[巴斯夫（中國）有限公司]、丹參提取物（西安綠天生物技術有限公司）、黃芩提取物（西安綠天生物技術有限公司）、人參提取物（西安綠天生物技術有限公司）、側柏葉提取物（廣州美懿生物科技有限公司）、姜根提取物（廣州美懿生物科技有限公司）、向日葵籽油（江西御美化妝品有限公司）、山茶籽油（江西御美化妝品有限公司）、生育酚（巴斯夫（中國）有限公司）、苯甲酸鈉（河南千志商貿有限公司）、苯氧乙醇（廣州中廣生物科技有限公司）、EDTA二鈉（南通奧凱生物技術開發(fā)有限公司）、檸檬酸（濰坊英軒實業(yè)有限公司）、氯化鈉（天津市津東天正精細化學試劑廠）、去離子水等。以上原料均為化妝品級。

1.2 主要儀器與設備：電動攪拌器（上海科興儀器有限公司）、電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）、BSA124S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、溫度計（常州雙誠熱工儀表廠）、PB-10 pH計（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、SNB-2粘度計（上海精密科學儀器有限公司）、恒溫恒濕培養(yǎng)箱（美國Thermo Scientific）、A-006生物安全柜（美國Thermo Scientific）、超凈工作臺（蘇州凈化設備有限公司）、A-023手持式裂隙燈（上海博覽光電儀器有限公司）、佳能數碼相機[佳能（中國）有限公司]、Photomax頭發(fā)生長分析管理系統(tǒng)（北京金宏帆商貿有限責任公司）等。

1.3 試驗菌株及試驗動物：馬拉色菌第5代（西安國聯質量檢測技術股份有限公司）；新西蘭兔購于陜西君行生物科技有限公司[實驗動物生產許可證號：SCXK（陜）2017-001，動物質量合格證號：61003200000958，動物使用許可證號：SYXK（陜）2021-009]，適應飼養(yǎng)7 d，溫度：21℃～24℃，相對濕度：55%～67%。

1.4 受試者納入和排除標準

1.4.1 納入標準：18～60歲，健康男性或女性；頭發(fā)長度5～40 cm；有脫發(fā)困擾或者頭發(fā)稀疏的受試者，且按60次梳發(fā)法脫發(fā)計數大于10根、2周洗脫期后仍大于10根者；近1個月內沒有進行過染發(fā)、燙發(fā)、定型等特殊美發(fā)處理者；能夠閱讀和理解知情同意書的所有內容，并自愿簽署知情同意書；試驗期間同意不使用任何對結果有影響的化妝品、藥物和保健品。

1.4.2 排除標準：妊娠或哺乳期女性，或近期有備孕計劃者；重度雄激素源性脫發(fā)、斑禿、炎性瘢痕性脫發(fā)或其他患有頭皮/毛發(fā)疾病患者；患有精神類或心理疾病者；有長期睡眠、情緒控制障礙者；近3個月內使用過具有防脫發(fā)功效的化妝品或其他具有此類功效或生發(fā)功效的產品者；近6個月內服用過或局部使用過任何影響頭發(fā)生長的藥物者；曾接受過頭發(fā)移植治療者；頭發(fā)卷曲者；體質高度敏感者；近2個月內參加過其他臨床試驗者；臨床評估認為不適合參加試驗者。

本次共納入30名受試者，最終完成30名，男15名，女15名，年齡35～59歲，平均年齡為46.64歲。

1.5 方法

1.5.1 洗發(fā)劑配方：參照洗發(fā)水的配制原則，通過原料的配伍、實驗和篩選，本實驗最終采用的洗發(fā)劑配方見表1，該配方以月桂醇聚醚硫酸酯鈉為主要表面活性劑，中藥復方添加質量分數0.5%丹參提取物、0.5%黃芩提取物、0.4%人參提取物、0.3%側柏葉提取物、0.3%姜根提取物，pH調節(jié)至5.5～6.0，此外，還添加了去屑止癢劑吡羅克酮乙醇胺鹽，以及多種發(fā)用調理劑如泛醇、蠶絲膠蛋白、向日葵籽油、山茶籽油等改善毛發(fā)柔順度。

1.5.2 洗發(fā)劑的配制工藝：將瓜爾膠羥丙基三甲氧基氯化銨在冷水中預分散，待分散均勻后加入EDTA二鈉，攪拌均勻，加熱至70℃；依次加入表面活性劑月桂醇聚醚硫酸酯鈉、月桂基硫酸銨、椰油酰胺丙基甜菜堿；保持70℃加入椰油酰胺MEA、乙二醇雙硬脂酸酯，至完全熔化，保溫20 min；加入吡羅克酮乙醇胺鹽攪拌均勻；降溫至40℃，加入聚季銨鹽-7、PEG120甲基葡糖二油酸酯攪拌均勻，再加入生育酚、山茶籽油、向日葵籽油攪拌均勻；再依次加入預溶解好的各種提取物混合物（丹參、黃芩、人參、側柏葉、姜根），以及吡哆素，攪拌30 min；降至室溫，加入蠶絲膠蛋白、泛醇、苯甲酸鈉、苯氧乙醇攪拌均勻；攪拌30～40 min，測pH值，用檸檬酸調節(jié)pH值為5.5～6.0，氯化鈉調節(jié)到適宜黏度，成品出料。

1.5.3 洗發(fā)劑感官、理化、衛(wèi)生指標評價：參考國家標準（GB/T 29679-2013）要求及《化妝品安全技術規(guī)范》2015版規(guī)定，對所制洗發(fā)劑的外觀、色澤、香氣、耐熱、耐寒、pH值、泡沫高度、有效物含量、細菌總數、霉菌和酵母菌總數、耐熱大腸菌群等各項指標進行評價。

1.5.4 洗發(fā)劑的安全性評價

1.5.4.1 急性眼刺激試驗：依據《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）第6章5法，試驗使用3只家兔，做30 s沖洗試驗，輕輕拉開家兔的下眼瞼，滴入所制洗發(fā)劑0.1 ml于家兔一側眼結膜囊中，使上下眼瞼被動閉合1 s，至第30秒時，用足量、流速較快但又不會引起動物眼損傷的水流沖洗30 s，另一側眼睛不處理作自身對照。于滴入所制洗發(fā)劑后1 h、24 h、48 h、72 h以及第4天和第7天對動物眼睛進行檢查。

1.5.4.2 急性皮膚刺激試驗：依據《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）第6章4法，試驗前24 h，將4只家兔背部脊柱兩側背毛剪掉，用剃毛器剃去殘留被毛，不可損傷表皮，去毛范圍約3 cm×3 cm。試驗時取所制洗發(fā)劑0.5 ml，直接涂抹在每兔一側去毛皮膚上，然后用紗布（2.5 cm×2.5 cm）和一層玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布固定。敷貼2 h；另一側皮膚不處理，作正常對照。試驗結束后用溫水除去殘留洗發(fā)劑，分別于清除洗發(fā)劑后1 h、24 h、48 h、72 h觀察涂抹部位皮膚有無紅斑和水腫形成，根據反應程度按皮膚刺激反應評分標準進行評分。計算所有受試動物各時點的皮膚刺激反應評分總積分及積分均值。取24 h、48 h、72 h各觀察時點最高積分均值，判斷皮膚刺激強度。

1.5.4.3 人體皮膚斑貼試驗：選用合格的斑試器材，以封閉性斑貼試驗方法，將所制洗發(fā)劑約0.020～0.025 g置于斑試器內，外用低致敏膠帶貼敷于受試者背部，24 h后去除洗發(fā)劑，分別于去除后0.5 h、24 h、48 h觀察皮膚反應，參考《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）中皮膚反應分級標準記錄結果，見表2。

1.5.5 洗發(fā)劑的功效評價

1.5.5.1 抑菌性能測試：依據GB 15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄C C4溶出性抗（抑）菌產品抑菌性能試驗方法檢驗。將馬拉色菌24 h斜面培養(yǎng)物用PBS洗滌，制成菌懸液，分別在每個被試樣品和對照品內滴加100μl，混合均勻后開始計時，作用2、5、10、20 min，用無菌鑷分別將0.5 ml樣品投入含5 ml PBS的試管內，充分混勻，適當稀釋后取0.5 ml，置于平皿，用涼至40℃～45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15 ml作傾注，轉動平皿使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，（35±2）℃培養(yǎng)48 h，作活菌菌落計數。抑菌率=（對照樣品平均菌落數-被試樣品平均菌落數）/對照樣品平均菌落數×100%。評價標準為抑菌率≥50%～90%，產品有抑菌作用，抑菌≥90%，產品有較強抑菌作用。

1.5.5.2 產品使用前后脫發(fā)計數人體測試：受試者每次來訪前（48±4）h內不能洗發(fā)，訪視當天不能自行梳發(fā)。每次到達試驗機構適應環(huán)境30 min后，技術人員采用相同規(guī)格的梳子（梳齒密度適中，齒間距0.9～1.1 mm，梳齒長度為2.0～3.0 cm，梳子長度不少于10 cm），按照從左前到左后，右前到右后的順序，勻速梳理60次（左右各30次）。收集脫落頭發(fā)，并進行計數。

1.5.5.3 產品使用前后整體毛發(fā)密度視覺評估人體測試：受試者剃發(fā)1.5 cm×1.5 cm區(qū)域并修剪（頭頂偏顳側），Photomax拍照并用Trichoscan分析局部毛發(fā)密度、數量，受試者使用測試產品4周、8周后皮膚科醫(yī)生視覺評估及圖像評估整體頭發(fā)密度（整頭加頭頂區(qū)），參考表3記錄頭發(fā)密度分級評分結果。

1.5.5.4 受試者自評：受試者使用測試產品4周、8周后到訪分別完成問卷調查，對產品使用感受進行自我評估，統(tǒng)計好評率。1分表示非常不認同；2分表示比較不認同；3分既不否定也不認同；4分表示比較認同；5分表示非常認同。

1.6 統(tǒng)計學分析：應用SPSS 24.0統(tǒng)計分析軟件進行數據的統(tǒng)計分析。計量資料采用（xˉ±s）表示，并進行正態(tài)分布檢驗，若測試數據為正態(tài)分布，則采用t檢驗方法進行統(tǒng)計分析；若測試數據為非正態(tài)分布，則采用秩和檢驗方法進行統(tǒng)計分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2" 結果

2.1 洗發(fā)劑感官、理化、衛(wèi)生指標評價：結果顯示，研制的防脫抑菌洗發(fā)劑的感官、理化、衛(wèi)生各項指標均符合國家標準（GB/T 29679-2013）要求及《化妝品安全技術規(guī)范》2015版規(guī)定。見表4。

2.2 洗發(fā)劑的安全性評價

2.2.1 急性眼刺激試驗：結果顯示，在觀察期內，3只家兔的角膜、虹膜均未出現眼損害現象，其中一只家兔在24 h觀察時出現結膜充血的現象，最高積分均值為0.33，且積分在72 h內均降至0。根據《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）第6章5法中眼刺激分級標準判定，防脫抑菌洗發(fā)劑對家兔的急性眼刺激性屬微刺激性。急性眼刺激試驗結果顯示不同時間點角膜、虹膜、結膜水腫及結膜充血積分值均為0。

2.2.2 急性皮膚刺激試驗：結果顯示，在觀察期內，所有受試動物皮膚均未出現紅斑，也均無水腫形成。根據《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）第6章4法中皮膚刺激強度分級，防脫抑菌產品對家兔的急性皮膚刺激性屬無刺激性。急性皮膚刺激性試驗結果顯示不同時間點紅斑、水腫、總積分及積分均值均為0。

2.2.3 人體皮膚斑貼試驗：防脫抑菌洗發(fā)劑人體皮膚斑貼試驗結果顯示，皮膚不良反應分級按照《化妝品安全技術規(guī)范》（2015年版）中規(guī)定的“人體試用試驗安全性評價”中皮膚不良反應分級標準來判斷，30名受試者觀察區(qū)域皮膚反應均為0級，說明皮膚未發(fā)生不良反應。見表5。

2.3 洗發(fā)劑的功效評價

2.3.1 抑菌性能測試：結果顯示，洗發(fā)劑作用時間2 min，即對馬拉色菌的抑菌率＞50%，根據GB 15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄C C4判定所制產品具有抑菌作用。當洗發(fā)劑作用時間10 min，抑菌率＞90%，說明產品有較強抑菌活性。見表6。

2.3.2 洗發(fā)劑使用前后脫發(fā)計數人體測試：結果顯示，使用防脫抑菌洗發(fā)劑4周后，與使用前相比，受試者脫發(fā)計數改善率為14.23%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；使用樣品8周后，與使用前相比，受試者脫發(fā)計數改善率為27.76%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見表7。

2.3.3 洗發(fā)劑使用前后整體毛發(fā)密度視覺評估人體測試：結果顯示，使用防脫抑菌洗發(fā)劑4周后，與使用前相比，受試者整體毛發(fā)密度視覺評估改善率為21.15%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；使用防脫抑菌洗發(fā)劑8周后，與使用前相比，受試者整體毛發(fā)密度視覺評估改善率為42.31%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見表8。

2.3.4 受試者自評：受試者使用洗發(fā)劑后的主觀評估結果顯示，使用防脫抑菌洗發(fā)劑56 d后，100%的受試者整體認同該產品，認為使用產品后掉發(fā)減少，頭發(fā)數量和密度增加，且清潔、柔順、蓬松等功效也得到認可。安全評估結果同樣顯示，受試者使用洗發(fā)劑56 d，皮膚均未出現不良反應，100%的受試者認為該產品溫和不刺激。

3" 討論

脂溢性脫發(fā)是一種多因素引起的慢性疾病，發(fā)病機制尚未完全明確，中藥提取物因其多成分、多靶點、多途徑的治療優(yōu)勢，在防脫產品開發(fā)中具有良好的應用前景。趙海婷等[7]對近20年中醫(yī)藥治療脫發(fā)的方劑進行統(tǒng)計，發(fā)現補虛藥、清熱藥、活血化瘀藥是目前中藥防脫生發(fā)研究的重點領域，約占70%。本研究以丹參、黃芩、人參、側柏葉、姜根提取物為主要藥效成分進行配伍，參照洗發(fā)水的配制原則，通過大量的實驗和篩選，最終按照特定比例復配出一款新的防脫抑菌洗發(fā)劑。

其中丹參是經典的活血化瘀類中藥。根據中醫(yī)理論，當血脈瘀滯、血行不暢可使新血難生、毛竅瘀阻、毛發(fā)失養(yǎng)而細軟枯澤、松動脫落，活血化瘀類中藥則可通過改善毛囊微循環(huán)來發(fā)揮祛瘀生新、濡養(yǎng)毛發(fā)的作用。現代藥理研究發(fā)現，在睪酮誘導的小鼠病理脫發(fā)模型中，丹參水提物能有效促進毛發(fā)再生，其作用機制可能與平衡激素水平、抗氧化和促進血管內皮生長因子表達有關[8]。丹參酮也對二氫睪酮誘導的雄激素性禿發(fā)大鼠模型有治療作用，且可調節(jié)大鼠的血清雌二醇水平[9]。

黃芩屬于清熱燥濕藥，現代藥理研究已證實黃芩中的有效成分如黃芩素、黃芩苷等均具有顯著的抑菌活性[10]。馬拉色菌是皮膚科感染性疾病的常見真菌，脂溢性皮炎的發(fā)生與發(fā)展也與馬拉色菌屬的感染密切相關[11]。本研究對研制的洗發(fā)劑進行抑菌性能測試，發(fā)現產品作用時間僅2 min，即對馬拉色菌的抑菌率＞50%，作用時間10 min，抑菌率＞90%，說明產品有較強的抑菌活性，可改善毛發(fā)生長條件，防止脫發(fā)。邢飛[12]研究亦發(fā)現黃芩苷還可通過激活毛囊經典Wnt/β-catenin通路和增加毛囊真皮乳頭細胞活性促進毛發(fā)生長。

人參屬于補虛藥，作為補益藥之上品，具有滋養(yǎng)頭皮、防脫固發(fā)的潛力[13]。Kim SN等[14]研究發(fā)現人參皂苷可通過與米諾地爾類似的作用機制促進頭發(fā)生長。側柏葉是中醫(yī)藥治療脫發(fā)的外用方中使用頻率次數最高的組方藥之一，現代研究表明側柏葉中的總黃酮及揮發(fā)性成分都具有防脫生發(fā)的效果[15]，范娜[16]研究發(fā)現側柏葉揮發(fā)油可通過激活PI3K-Akt、Wnt/β-catenin等多條信號通路刺激毛囊從休止期到生長期的轉換，促進毛囊發(fā)育，從而促進毛發(fā)生長。姜根中的提取物則可以刺激頭皮局部血液循環(huán)，增加毛囊的營養(yǎng)供給，改善毛囊的新陳代謝和毛發(fā)生長[17]。

我國中草藥資源豐富，中醫(yī)理論底蘊深厚，以中草藥為原料的洗發(fā)護發(fā)產品具有綠色天然、副作用小、療效顯著的特點。目前防脫生發(fā)中藥研究多為單味藥提取物及中藥活性單體成分，少有中藥復方，然而單一中草藥在體外培養(yǎng)毛發(fā)生長方面起到的促進作用有限，且根據中醫(yī)互補理論，采用中草藥復配方式是更有效的。本研究將各功效活性成分科學配比，協(xié)同增效，人體功效評價結果也證實所研制的洗發(fā)劑使用前后防脫效果顯著，且100%的受試者整體認同該產品，認為使用產品后掉發(fā)減少，頭發(fā)數量和密度增加，是一款性能優(yōu)良，對人體無刺激，具有抑菌和防脫雙重功效的安全、穩(wěn)定的洗發(fā)產品，具有廣闊的市場應用前景。

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[收稿日期]2023-07-14

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