【摘要】本文對(duì)比了GB/T 5750.12—2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法第12部分：微生物指標(biāo)》和GB/T 5750.12—2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法微生物指標(biāo)》，分析了兩個(gè)版本標(biāo)準(zhǔn)的主要差異，旨在通過詳細(xì)的梳理，幫助檢測(cè)人員更準(zhǔn)確地理解新標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容。

【關(guān)鍵詞】生活飲用水；微生物指標(biāo)；比對(duì)分析

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.023

Comparative Analysis of Microbiological Indicators in the New and Old Versions of Standard examination methods for drinking water—Part 12： Microbiological indices

QIU Yue1， GUO Yucui1， LIU Qiwei2， HAN Juanzhu1， SUN Yuanyuuan1， LYU Xiaohui1

（1.Liaoning Inspection ，Examination & Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China； 2.Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110004， China） Abstract： This paper compares GB/T 5750.12—2023 Standard examination methods for drinking water—Part 12： Microbiolog6eRWIAsc2bt3+hjIQEa240foQcUjl4Rk34Vlb4HcW8c=ical indices with GB/T 5750.12—2006 Standard examination methods for drinking water—Microbiological parameters， analyzes the main differences between the two versions of the standards， and aims to help inspectors understand the content of the new standard more accurately through detailed analysis.

Keywords： drinking water； microbiological indicators； comparative analysis

0前言

為保障生活飲用水的質(zhì)量和衛(wèi)生，我國在1985年首次制定了《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法》，對(duì)生活用水的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。隨著監(jiān)測(cè)指標(biāo)和檢查方法的不斷增加和完善，相關(guān)部門兩次對(duì)生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行修訂。2006年國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局（國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)）發(fā)布了GB/T 5750.12—2006《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法微生物指標(biāo)》（以下簡稱“舊標(biāo)準(zhǔn)”），檢測(cè)指標(biāo)為菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲。2022年3月17日，發(fā)布了GB/T 5750.12—2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法第12部分：微生物指標(biāo)》（以下簡稱“新標(biāo)準(zhǔn)”），代替GB/T 5750.12—2006。新標(biāo)準(zhǔn)于2023年10月1日開始實(shí)施，對(duì)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全面監(jiān)控。

1調(diào)整適用范圍

在舊標(biāo)準(zhǔn)中，每一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)的檢測(cè)方法均列出了檢測(cè)適用范圍。新標(biāo)準(zhǔn)把每種檢測(cè)方法的適用范圍調(diào)整到標(biāo)準(zhǔn)的第1部分，統(tǒng)一為“本文件適用于生活飲用水和水源水中微生物指標(biāo)的測(cè)定”。調(diào)整后，使用者更加直觀明了地了解標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)范圍。

2新增規(guī)范性引用文件

舊標(biāo)準(zhǔn)中沒有列出規(guī)范性引用文件。新標(biāo)準(zhǔn)從實(shí)驗(yàn)用水、培養(yǎng)基和生物安全3個(gè)方面列出了規(guī)范性引用文件：GB 4789.28—2024《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》、GB/T 6682《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》、GB 19489《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》。

3新增或調(diào)整部分術(shù)語和定義

新舊標(biāo)準(zhǔn)中，總大腸菌群的定義沒有變化；新標(biāo)準(zhǔn)增加了大腸埃希氏菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌和最可能數(shù)4項(xiàng)術(shù)語并給予定義；新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)菌落總數(shù)、耐熱大腸菌群、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲4項(xiàng)重新定義，并對(duì)賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的具體形態(tài)進(jìn)行了注釋。

4新增或調(diào)整微生物檢測(cè)指標(biāo)

舊標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)指標(biāo)為生活飲用水中的菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌、賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲6項(xiàng)，新標(biāo)準(zhǔn)在此基礎(chǔ)上增加了2項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌。腸球菌能引起食物中毒，該指標(biāo)能反映水環(huán)境中糞便污染情況；產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌，廣泛存在于自然環(huán)境、動(dòng)物和人的糞便中，污染飲用水后可存活較長時(shí)間，能產(chǎn)生多種毒素，引起人壞死性腸炎，破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞，也是反映糞便污染情況的一項(xiàng)重要指標(biāo)，GB 5749—2022《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌在生活飲用水中不應(yīng)檢出。

5新增檢測(cè)方法

新標(biāo)準(zhǔn)中增加了6個(gè)檢測(cè)方法，分別為菌落總數(shù)酶底物法、賈第鞭毛蟲濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法、隱孢子蟲濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法、腸球菌多管發(fā)酵法、腸球菌濾膜法、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌濾膜法。

5.1培養(yǎng)基配制及保存條件對(duì)比

舊標(biāo)準(zhǔn)中培養(yǎng)基與試劑部分，各培養(yǎng)基成分中的水為蒸餾水和超純水；新標(biāo)準(zhǔn)中均改為純水。純水比蒸餾水的純化水平高，比超純水的制作工藝簡單，能更好地滿足實(shí)驗(yàn)要求。

舊標(biāo)準(zhǔn)中配制后的培養(yǎng)基要求貯存于冷暗處備用；新標(biāo)準(zhǔn)要求于0～4℃冷藏避光保存。明確保存溫度范圍可避免溫度有較大幅度的變化，避免受熱、吸潮，防止培養(yǎng)基被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，延長培養(yǎng)基保存時(shí)間。

新標(biāo)準(zhǔn)對(duì)培養(yǎng)基要求增加了質(zhì)量控制內(nèi)容，主要包括培養(yǎng)基檢驗(yàn)及對(duì)照試驗(yàn)要求。

5.2菌落總數(shù)檢測(cè)方法的對(duì)比

舊標(biāo)準(zhǔn)中菌落總數(shù)采用平皿計(jì)數(shù)法檢測(cè)，新標(biāo)準(zhǔn)為平皿計(jì)數(shù)法和酶底物法2種檢測(cè)方法。新舊標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于菌落總數(shù)平皿計(jì)數(shù)法檢測(cè)的差異分析見表1。

新標(biāo)準(zhǔn)增加了細(xì)菌酶底物法，是一種常見的微生物檢測(cè)方法，具有操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，其原理是利用復(fù)合酶技術(shù)，在培養(yǎng)基中加入多種獨(dú)特的酶底物，每一種酶底物都針對(duì)不同的細(xì)菌酶設(shè)計(jì)，將酶底物轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的產(chǎn)物。新標(biāo)準(zhǔn)使用基于復(fù)合酶底物技術(shù)（Multiple Enzyme Technology）的培養(yǎng)基，通過48 h培養(yǎng)，最大限度地釋放4-甲基傘形酮，經(jīng)366 nm紫外燈照射，對(duì)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光的培養(yǎng)盤孔槽計(jì)數(shù)并查閱MPN表，可以確定原始水樣中最可能的菌落總數(shù)，結(jié)果以MPN/mL表示。

5.3總大腸菌群檢測(cè)方法的變化

新舊標(biāo)準(zhǔn)中總大腸菌群的檢測(cè)方法均為多管發(fā)酵法、濾膜法和酶底物法3種。

5.3.1多管發(fā)酵法

新標(biāo)準(zhǔn)中增加了多管發(fā)酵法的“原理”：經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)24 h，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、經(jīng)證實(shí)試驗(yàn)和革蘭氏染色檢測(cè)水中總大腸菌群的方法。

舊標(biāo)準(zhǔn)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)的2.1.5.1.2中檢驗(yàn)污染較嚴(yán)重的水源水要求“每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管”；新標(biāo)準(zhǔn)改為“每個(gè)稀釋度接種5管單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，每個(gè)水樣共接種15管”。新標(biāo)準(zhǔn)明確指出乳糖蛋白胨培養(yǎng)液為單料，不易與雙料混淆。

舊標(biāo)準(zhǔn)中要求：所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸，則報(bào)告總大腸菌群陰性；新標(biāo)準(zhǔn)改為：報(bào)告總大腸菌群未檢出。陰性說明水樣中沒有大腸菌群，而未檢出表示水樣中沒有發(fā)現(xiàn)大腸菌群，有可能由于一些原因沒有檢測(cè)出來，個(gè)人認(rèn)為新標(biāo)準(zhǔn)的說法更科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)。

5.3.2酶底物法

新舊標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于總大腸菌群酶底物法檢測(cè)的差異分析見表2。

5.4耐熱大腸菌群檢測(cè)方法的變化

新舊標(biāo)準(zhǔn)中耐熱大腸菌群均有2種檢測(cè)方法：多管發(fā)酵法和濾膜法。

舊標(biāo)準(zhǔn)中培養(yǎng)溫度為44.5℃，新標(biāo)準(zhǔn)中培養(yǎng)溫度為（44.5±0.5）℃，兩者比較新標(biāo)準(zhǔn)中培養(yǎng)溫度范圍更大，降低了環(huán)境溫度和培養(yǎng)箱中溫度起伏變化的影響，存在1℃的溫差對(duì)菌體生長沒有影響。

舊標(biāo)準(zhǔn)中濾膜法培養(yǎng)基為固體和液體兩種，新標(biāo)準(zhǔn)中刪除了液體培養(yǎng)基只保留固體培養(yǎng)基，更便于菌體的分離、計(jì)數(shù)、鑒定和菌種保存。

5.5賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲檢測(cè)方法的變化

舊標(biāo)準(zhǔn)中賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的檢測(cè)方法均為免疫磁分離熒光抗體法，并進(jìn)行了統(tǒng)一編寫。新標(biāo)準(zhǔn)中則把這兩種檢測(cè)指標(biāo)的檢測(cè)方法進(jìn)行了拆分，但儀器設(shè)備、培養(yǎng)基、試驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理和質(zhì)量控制都相同；同時(shí)，這兩種檢測(cè)指標(biāo)均增加了濾膜濃縮/密度梯度分離熒光抗體法，在保證舊標(biāo)準(zhǔn)方法回收率的基礎(chǔ)上，可降低耗材成本和設(shè)備投入，具有成本低廉和性能穩(wěn)定的特點(diǎn)。

5.6腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌

舊標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了腸球菌和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌在飲用水中的參考限值，但并未規(guī)定檢測(cè)方法。新標(biāo)準(zhǔn)增加了這兩類微生物的檢測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法，腸球菌新增了多管發(fā)酵法和濾膜法；產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌新增了濾膜法。微生物檢測(cè)的覆蓋范圍更廣，水質(zhì)控制要求更高，減少疾病傳播。

6結(jié)束語

隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也隨之更新、日趨完善。此次《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法》中微生物指標(biāo)及相關(guān)檢測(cè)方法修訂后，適用范圍更加清晰，規(guī)范性引用文件更加明確，術(shù)語和定義更加規(guī)范，微生物檢測(cè)指標(biāo)更加完善嚴(yán)格，檢測(cè)方法更加完備。體現(xiàn)了國家對(duì)生活飲用水的更高和更合理的要求，也體現(xiàn)著檢測(cè)方法的進(jìn)步和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的與時(shí)俱進(jìn)，使得新標(biāo)準(zhǔn)更具科學(xué)性、合理性和國際性。

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【作者簡介】

邱月，女，1981年出生，高級(jí)農(nóng)藝師，學(xué)士，研究方向?yàn)槲⑸镲暳咸砑觿┊a(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)。

（編輯：侯睿琪）