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        退黃散的皮膚刺激性和過敏性實(shí)驗(yàn)研究

        2024-11-29 00:00:00蔡敏芳鄧萬娟羅萍羅玲艷楊康杰朱麗錢海兵

        [摘" "要]" "目的:探究退黃散對(duì)皮膚的刺激作用及過敏反應(yīng),為其在臨床上的應(yīng)用提供毒理學(xué)依據(jù)。方法:家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn):選取家兔4只,雌雄各半。采用自身對(duì)照法,對(duì)家兔脊柱兩側(cè)進(jìn)行備皮(3 cm×3 cm),左側(cè)予退黃散,右側(cè)予溫水,1次/d,連續(xù)給藥14 d,觀察抹藥局部是否有紅斑、水腫等現(xiàn)象,對(duì)皮膚進(jìn)行刺激反應(yīng)及強(qiáng)度評(píng)分,末次給藥后取給藥部位皮膚進(jìn)行HE染色觀察組織病理情況;豚鼠皮膚過敏性試驗(yàn):選取豚鼠30只,雌雄各半,將其分為空白對(duì)照組(溫水)、陽性對(duì)照組(2, 4二硝基氯苯:致敏濃度1%、激發(fā)濃度1%)和給藥組(退黃散藥液適量),每組10只。于第1、7、14天在豚鼠左側(cè)備皮區(qū)域致敏,末次致敏結(jié)束后第14天對(duì)右側(cè)備皮區(qū)域進(jìn)行激發(fā),在激發(fā)后1、24、48和72 h觀察豚鼠皮膚是否出現(xiàn)紅斑、水腫等過敏反應(yīng),并計(jì)算各組豚鼠反應(yīng)平均值和致敏率。結(jié)果:退黃散對(duì)家兔皮膚無刺激,病理檢查未見組織病理學(xué)改變;在豚鼠皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)中,皮膚未出現(xiàn)紅斑及水腫現(xiàn)象,致敏率為0%。結(jié)論:退黃散對(duì)家兔皮膚無刺激性,對(duì)豚鼠皮膚無過敏性,具備較好的安全性,可在臨床推廣使用。

        [關(guān)鍵詞]" "退黃散;刺激性;過敏性;家兔;豚鼠

        [中圖分類號(hào)]" "R285" " " " " " " "[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]" "A" " " " " " " "[文章編號(hào)]" "1674-7887(2024)02-0128-04

        Experimental study on irritation and allergy of Tuihuangsan*

        CAI Minfang**, DENG Wanjuan, LUO Ping, LUO Lingyan, YANG Kangjie, ZHU Li, QIAN Haibing***" " " " (1Department of Chinese Medicine Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guizhou 550000)

        [Abstract]" "Objective: To study the skin irritation and allergic reactions of Tuihuangsan and to provide a toxicological basis for its use in clinical practice. Methods: Skin stimulation experiment in rabbits: 4 rabbits, male and female, were used. The skin of both sides of the spine of rabbits was prepared(3 cm×3 cm) by the self-control method, and the left side was administered with Tuihuangsan and the right side was administered with warm water once a day, and the drug was repeatedly administered for 14 days, and the skin was observed for erythema and edema, and the skin was scored for irritation and intensity. Thirty guinea pigs, half male and half female, were selected and divided into a blank control group(warm water), a positive control group(2, 4-dinitrochlorobenzene: sensitising concentration of 1%, excitation concentration of 0.1%) and Tuihuangsan group, with 10 guinea pigs in each group. The guinea pigs were sensitized on the left side of the skin preparation area on days 1, 7 and 14, and the right side of the skin preparation area was stimulated on day 14 after the last sensitization, and the guinea pigs were observed for erythema, edema and other allergic reactions at 1 h, 24 h, 48 h and 72 h after the stimulation, and the mean values of reactions and sensitization rates were calculated for each group. Results: The skin of rabbits was not irritated by the antireflux powder, and no histopathological changes were observed in the pathological examination; in the guinea pig skin sensitization test, no erythema and edema were observed in the skin, and the sensitization rate was 0%. Conclusion: Tuihuangsan is non-irritating to the skin of rabbits and non-allergenic to the skin of guinea pigs, which is of good safety and can be promoted for use in the clinic.

        [Key words]" "Tuihungsan; irritation; allergic; rabbit; guinea pig

        新生兒黃疸是新生兒疾病中的常見病癥,是由多種因素導(dǎo)致的膽紅素生成增多但排泄減少的疾病?;純旱闹饕R床癥狀為皮膚黏膜及鞏膜黃染。目前,臨床治療以藍(lán)光照射為主,但同時(shí)存在諸多不良反應(yīng)[1]。退黃散是由貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院自制中藥復(fù)方,以棉茵陳、梔子、大黃、酒黃芩、田基黃為主要成分,具有清熱、利濕、退黃的功效[2]。臨床上多用于新生兒黃疸之苔黃濕熱郁蒸證,療效顯著。本課題根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督總局發(fā)布的《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[3]對(duì)退黃散的刺激性和過敏性進(jìn)行評(píng)估,為其安全使用于臨床提供科學(xué)依據(jù)。

        1" "材料與方法

        1.1" "實(shí)驗(yàn)動(dòng)物" "家兔,白色,體質(zhì)量1.5~2 kg,4只,雌雄各半;豚鼠,白色,體質(zhì)量300~400 g,30只,雌雄各半(購(gòu)于長(zhǎng)沙市天勤生物科技有限公司,許可證號(hào):SCXK(湘)2019-0015)。所購(gòu)動(dòng)物于清潔實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。均由專人飼養(yǎng),定期更換墊料。實(shí)驗(yàn)室光照充足,通風(fēng)良好,室溫22~24 ℃,相對(duì)濕度50%~70%。本研究已通過貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào):20210123)。

        1.2" "儀器" "烘箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠,GZX-9240MBE);倒置顯微鏡(奧林巴斯公司,型號(hào):BX53F);組織切片機(jī)(浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司,型號(hào):RM2265)電子天平(常熟市雙杰測(cè)試儀器廠,型號(hào):JJ224B)。

        1.3" "試劑及受試藥物" "退黃散(貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑中心,批號(hào):20220125);0.9%氯化鈉溶液(科倫藥業(yè)有限公司,批號(hào):E122082005);2, 4-二硝基氯苯(西亞化學(xué)科技(山東)有限公司,批號(hào):20220504);HE試劑盒(北京索萊寶科技有限公司,批號(hào):20220928)。

        1.4" "方法

        1.4.1" "家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)[4]" "實(shí)驗(yàn)開始前24 h對(duì)皮膚無破損的健康成年家兔脊背兩側(cè)皮膚進(jìn)行備皮,不損傷表皮,備皮面積約3 cm×3 cm。取退黃散藥液涂抹于左側(cè)備皮區(qū)域,在給藥區(qū)域反復(fù)擦拭3次,確保藥液被皮膚充分吸收,用無菌紗布和無菌膠帶固定給藥部位4 h。給藥對(duì)側(cè)皮膚作為自身對(duì)照組,給予溫水,1次/d,持續(xù)14 d,給藥后1 h觀察給藥部位有無紅斑、水腫等反應(yīng)。皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[5]:總分為8分。(1)紅斑。0分,無紅斑;1分,輕度紅斑,勉強(qiáng)可見;2分,中度紅斑,明顯可見;3分,重度紅斑;4分,紫紅色紅斑到輕度焦痂形成。(2)水腫。0分,無水腫;1分,輕度水腫,勉強(qiáng)可見;2分,中度水腫,明顯隆起;3分,重度水腫,皮膚隆起1 mm,輪廓清楚;4分,嚴(yán)重水腫,皮膚隆起1 mm以上并有擴(kuò)大。皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):lt;0.5分,無刺激性;0.5~lt;3.0分,輕度刺激性;3.0~lt;6.0分,中度刺激性;≥6.0分,重度刺激性。皮膚刺激反應(yīng)平均值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。第14天完成相同操作并觀察其反應(yīng),處死家兔并剪去給藥部位及對(duì)側(cè)皮膚,進(jìn)行石蠟包埋,HE染色后觀察其組織病理變化情況。

        1.4.2" "豚鼠皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)[6]" "使用隨機(jī)對(duì)照法將30只豚鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(溫水3 mL)、陽性對(duì)照組(2, 4-二硝基氯苯:致敏濃度1%、激發(fā)濃度0.1% 3 mL)、給藥組(退黃散藥液3 mL),每組10只,雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前1 d對(duì)受試動(dòng)物脊背兩側(cè)皮膚進(jìn)行備皮,面積約4 cm×4 cm。將溫水、致敏濃度的2, 4-二硝基氯苯、退黃散藥液分別涂抹于對(duì)應(yīng)組動(dòng)物的左側(cè)備皮區(qū)域,并用無刺激的紗布和膠帶固定6 h。分別在第1、7、14天致敏,末次致敏結(jié)束后第14天,將溫水、激發(fā)濃度的2, 4-二硝基氯苯、退黃散藥液分別涂抹在相應(yīng)組動(dòng)物的右側(cè)備皮區(qū)域6 h,并于給藥后第1、24、48和72 h觀察豚鼠是否有皮膚紅斑、水腫等過敏反應(yīng)。皮膚過敏反應(yīng)平均值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計(jì)動(dòng)物數(shù),致敏率=皮膚過敏反應(yīng)陽性(不論程度輕重)動(dòng)物數(shù)/受試動(dòng)物總數(shù),致敏率:≤10%,無致敏性;gt;10%~30%,輕度致敏性;gt;30%~60%,中度致敏性;gt;60%~80%,高度致敏性;gt;80%~100%,極度致敏性。反應(yīng)平均值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。

        2" "結(jié)" " " 果

        2.1" "家兔皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)結(jié)果" "在14 d給藥實(shí)驗(yàn)期間,家兔給予退黃散藥液一側(cè)皮膚未出現(xiàn)任何紅斑及水腫現(xiàn)象,每只受試動(dòng)物的給藥側(cè)皮膚紅斑及水腫評(píng)分均為0分,皮膚刺激程度為無刺激。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示,家兔的給藥側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚結(jié)構(gòu)正常清晰,均未見棘層及角質(zhì)層萎縮變薄,無表皮壞死或炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化,見圖1。

        2.2" "豚鼠皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)結(jié)果" "對(duì)豚鼠備皮區(qū)域進(jìn)行3次致敏后,陽性對(duì)照組受試動(dòng)物的給藥區(qū)域均出現(xiàn)不同程度的紅斑,同時(shí)伴有破皮結(jié)痂現(xiàn)象。退黃散組及空白對(duì)照組未見異常。激發(fā)后,空白對(duì)照組和給藥組的皮膚紅斑水腫評(píng)分均為0分,致敏率為0%,表現(xiàn)為無致敏性;陽性對(duì)照組所有激發(fā)部位均有不同程度的紅斑發(fā)生,陽性率為100%,見圖2。

        3" "討" " " 論

        新生兒血清膽紅素>85 μmol/L(5 mg/dL),并伴有目黃身黃小便黃等癥狀即為新生兒黃疸[7]。在新生兒早期,高膽紅素血癥是一種常見的疾病,如治療不及時(shí),可能會(huì)造成聽力和智力的損傷,甚至?xí)l(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害,情況嚴(yán)重時(shí)還會(huì)導(dǎo)致致死率、致殘率高的膽紅素腦病[8]。藍(lán)光照射主要通過光波透射入皮下血液以溶解血中未結(jié)合膽紅素,從而降低膽紅素、消除黃疸。雖然藍(lán)光照射是目前臨床運(yùn)用最廣泛的方法,但其不能從根本上抑制膽紅素的產(chǎn)生,長(zhǎng)時(shí)間的藍(lán)光照射會(huì)致使小兒高熱、腹瀉、皮疹等,甚者還會(huì)誘發(fā)黑色素瘤、造成視網(wǎng)膜損傷[9]。

        隋代巢元方所著《諸病源候論·小兒雜病諸候》中闡述了:“小兒在胎,其母臟氣有熱。熏蒸于胎,至生下小兒,體皆黃,謂之胎疸也”的理論。本文認(rèn)為該病的發(fā)生是由于母體在妊娠過程中,胎兒感受母體濕熱邪毒所致。因此在臨床上治療應(yīng)采取清熱解毒,利濕退黃之法[10]。中醫(yī)常說“黃為脾之主色”,因此黃之主病主要從脾胃論治,小兒屬“純陽之體”,極易受濕熱之邪侵襲,濕熱蘊(yùn)阻中焦,導(dǎo)致脾胃運(yùn)化失常,熏蒸肝膽,膽汁外溢而致體面目發(fā)黃。傳統(tǒng)中醫(yī)主要通過口服中藥湯劑進(jìn)行治療,療效較好。但小兒口服用藥難度大,方中用藥峻猛,常引發(fā)嘔吐、腹瀉等胃腸道反應(yīng)[11]。此外,如藥味苦、小兒不愿意服用等,也影響了口服中藥在臨床上的應(yīng)用效果。近年來,中藥藥浴和灌腸逐漸被作為輔助手段應(yīng)用于臨床治療,但由于患兒配合度較低,操作難度較大等原因而未得到廣泛應(yīng)用。中藥外敷法通過透膚深入,可以讓藥物直接作用于相應(yīng)部位,有效避免了口服藥物的毒副反應(yīng),其簡(jiǎn)、便、效、廉的特點(diǎn)使其在臨床得到廣泛使用[12]。

        退黃散由《傷寒論》治療黃疸經(jīng)典方茵陳蒿湯加減化裁而來,主要由棉茵陳、梔子、大黃、酒黃芩、田基黃組成,治療濕熱導(dǎo)致的黃疸。方中以棉茵陳為君,性苦微寒,苦泄降下,寒能清熱,退黃利膽;臣以梔子泄三焦?jié)駸?;大黃瀉火解毒通利大便;酒黃芩清熱燥濕,瀉火解毒;田基黃清熱利濕解毒[13]。全方以寒涼藥物為主,五藥合用共奏利濕退黃之效?,F(xiàn)代藥理研究[14]發(fā)現(xiàn),茵陳中含有的香豆素類、黃酮類等化合物具有較強(qiáng)的效抗炎抑菌作用。大黃中含有的揮發(fā)油、有機(jī)酸等物質(zhì)具有消炎利膽的作用,同時(shí)起到調(diào)理消化功能的作用[15]。梔子中含有的環(huán)烯醚萜類和黃銅,具有一定的抗炎性和抗氧化性,并能刺激膽汁的分泌[16]。

        該制劑借助藥物透皮吸收的方式,將其直接作用于患者的皮膚,在院內(nèi)的應(yīng)用效果顯著,但對(duì)皮膚是否存在過敏或刺激作用尚需相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在皮膚刺激實(shí)驗(yàn)中,家兔給藥側(cè)與自身對(duì)照側(cè)皮膚相比未見紅腫異常,無皮膚刺激性。在家兔給藥的皮膚組織病理切片的觀察中,給藥側(cè)均未見任何病理改變;在豚鼠皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)中,給藥組和空白對(duì)照組的致敏率均為0%,陽性藥物組為100%,給藥組未見過敏反應(yīng)。在整個(gè)皮膚刺激性及過敏性實(shí)驗(yàn)中,無1例死亡。本研究結(jié)果顯示,退黃散無刺激及過敏性,為臨床的安全用藥提供了科學(xué)的依據(jù)。

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        [收稿日期] 2023-06-12

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