背景：敲減核糖體RNA加工蛋白15（RRP15）可抑制肝細胞癌（HCC）增殖和生長，但其與HCC對索拉非尼敏感性之間的關(guān)系尚無文獻報道。目的：探討RRP15是否參與調(diào)節(jié)HCC對索拉非尼的敏感性及其可能機制。方法：采用real?time PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測人肝癌細胞株中的RRP15表達。通過感染敲減或過表達慢病毒調(diào)節(jié)肝癌細胞RRP15表達水平，以CCK?8實驗和集落形成實驗檢測RRP15表達改變對肝癌細胞索拉非尼敏感性的影響；通過檢測細胞內(nèi)活性氧（ROS）、Fe2+、脂質(zhì)過氧化物、還原型谷胱甘肽等鐵死亡標(biāo)志物水平探究RRP15表達改變對鐵死亡的影響。以鐵死亡抑制劑Ferrostatin?1聯(lián)合敲減RRP15驗證RRP15對索拉非尼敏感性和鐵死亡的調(diào)節(jié)作用。以裸鼠皮下成瘤實驗進一步明確RRP15表達與索拉非尼敏感性的關(guān)系。結(jié)果：索拉非尼能誘導(dǎo)肝癌細胞RRP15表達上調(diào)。肝癌細胞的RRP15表達水平與其對索拉非尼的敏感性呈負相關(guān)，敲減RRP15可增強肝癌細胞對索拉非尼的敏感性和索拉非尼誘導(dǎo)的鐵死亡，表現(xiàn)為肝癌細胞活性和集落形成能力進一步降低，細胞內(nèi)ROS、Fe2+和脂質(zhì)過氧化水平升高，F(xiàn)errostatin?1處理則能有效逆轉(zhuǎn)敲減RRP15的上述作用。機制研究表明敲減RRP15系通過抑制p62?KEAP1?NRF2信號通路誘導(dǎo)肝癌細胞鐵死亡和索拉非尼增敏。動物實驗表明敲減RRP15聯(lián)合索拉非尼處理能更有效地抑制裸鼠皮下移植瘤生長。結(jié)論：抑制RRP15可增強HCC對索拉非尼的敏感性，其機制可能與促進鐵死亡相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)可能為提高HCC患者對索拉非尼的治療反應(yīng)提供了一種新的策略。

關(guān)鍵詞 核糖體RNA加工蛋白15； 癌，肝細胞； 索拉非尼； 鐵死亡

RRP15 Regulates Sensitivity of Hepatocellular Carcinoma to Sorafenib Through Ferroptosis ZHAO Saili1， WANG Zhangding2， WANG Fenglan2， WANG Lei2， ZHANG Bin2， ZOU Xiaoping1，2，3. 1Department of Gastroenterology， Nanjing Drum Tower Hospital Clinical College， Xuzhou Medical University， Nanjing （210008）; 2Department of Gastroenterology， Nanjing Drum Tower Hospital， the Affiliated Hospital of Nanjing University Medical School， Nanjing; 3Department of Gastroenter?ology， Taikang Xianlin Drum Tower Hospital， the Affiliated Hospital of Nanjing University Medical School， Nanjing

Correspondence to： ZOU Xiaoping， Email： zouxiaoping795@hotmail.com

Background： Knockdown of ribosomal RNA processing 15 homolog （RRP15） inhibited the proliferation and growth of hepatocellular carcinoma （HCC）， but its relationship with the sensitivity of HCC to sorafenib has not been reported. Aims： To elucidate the role of RRP15 in modulating the sensitivity of HCC to sorafenib and to unravel the underlying mechanisms. Methods： The constitutive expression of RRP15 in human HCC cell lines was assessed using real?time PCR and Western blotting， and then manipulated via infection with either RRP15 knockdown or overexpression lentivirus. The impact of RRP15 expression on sorafenib sensitivity of HCC cells was investigated by CCK?8 and colony formation assays. Changes in ferroptosis markers， including reactive oxygen species （ROS）， Fe2+， lipid peroxide， reduced glutathione， etc in HCC cells were measured to determine the effect of RRP15 on ferroptosis. The combination of the ferroptosis inhibitor Ferrostatin?1 and RRP15 knockdown was used to verify the modulatory effect of RRP15 on sorafenib sensitivity and ferroptosis. Furthermore， xenograft tumor in nude mice was used to confirm the relationship between RRP15 and sorafenib sensitivity. Results： Sorafenib treatment induced RRP15 expression in HCC cells. The expression levels of RRP15 in HCC cells were negatively associated with the sensitivity to sorafenib. RRP15 knockdown enhanced the sorafenib sensitivity and sorafenib?induced ferroptosis in HCC cells， presenting as reduced cell viability， decreased colony formation ability， and increased intracellular ROS， Fe2+， and lipid peroxidation. Treatment with Ferrostatin?1 effectively compromised the increased ferroptosis and sorafenib sensitivity caused by RRP15 downregulation. Mechanistically， inactivation of p62?KEAP1?NRF2 pathway was involved in the RRP15 depletion?mediated ferroptosis and sorafenib sensitization in HCC cells. In in vivo study， RRP15 knockdown combined with sorafenib treatment notably inhibited the subcutaneous xenograft tumor growth in nude mice. Conclusions： This study demonstrates that inhibition of RRP15 significantly enhances the sensitivity of HCC to sorafenib， potentially through the promotion of ferroptosis. These findings may provide new strategies for improving the therapeutic response of HCC to sorafenib treatment.

Key words Ribosomal RNA Processing 15 Homolog; Carcinoma， Hepatocellular; Sorafenib; Ferroptosis

肝癌是威脅人類健康的重要疾病，其發(fā)病率和病死率在全球癌癥統(tǒng)計中分居第6和第3位[1]。肝癌患者早期癥狀不明顯，確診時多已處于中晚期，喪失手術(shù)機會，如不予積極治療，自然生存期僅3～4個月[2]。多激酶抑制劑索拉非尼（sorafenib）作為肝細胞癌（hepatocellular carcinoma， HCC）的經(jīng)典分子靶向藥物，目前已廣泛應(yīng)用于臨床，然而患者在使用索拉非尼約6個月后常出現(xiàn)耐藥性[3]，從而嚴(yán)重限制了進展期HCC患者的治療效果。

核糖體RNA加工蛋白15（ribosomal RNA pro?cessing 15 homolog， RRP15）是一種參與核糖體生物合成、核糖體RNA轉(zhuǎn)錄、核糖體應(yīng)激、細胞周期檢查點調(diào)控的多功能核仁蛋白。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)RRP15在HCC中高表達，并與腫瘤的惡性生物學(xué)行為和預(yù)后不良顯著相關(guān)；敲減RRP15可通過核糖體應(yīng)激或糖代謝重構(gòu)誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡或衰老，抑制HCC增殖和生長[4?5]。近期本課題組又發(fā)現(xiàn)RRP15在胰腺癌中高表達，并與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良顯著相關(guān)；敲減RRP15可抑制胰腺癌細胞增殖、侵襲、遷移，誘導(dǎo)細胞凋亡，并能抑制胰腺癌細胞自噬，誘導(dǎo)自噬性死亡[6]。國內(nèi)兩個團隊也先后獨立報道了RRP15在結(jié)直腸癌中高表達并與腫瘤TNM分期和預(yù)后不良相關(guān)，敲減RRP15可抑制腫瘤細胞的增殖、生長、遷移、侵襲能力以及上皮?間質(zhì)轉(zhuǎn)化[7?8]。最近還有研究[9]發(fā)現(xiàn)，RRP15可通過激活PATZ1相關(guān)LAMC2/ITGB4/FAK信號通路促進HCC遷移。上述研究結(jié)果表明RRP15可能是一個新的癌基因，參與促進腫瘤增殖、生長和轉(zhuǎn)移。然而，關(guān)于RRP15是否參與調(diào)節(jié)HCC對索拉非尼的敏感性及其可能機制，尚未見文獻報道。本研究對該問題進行探討，以期為增強HCC對索拉非尼的敏感性提供理論依據(jù)。

材料與方法

一、細胞培養(yǎng)、實驗動物和主要試劑

人肝癌細胞株Huh7、Hep3B、PLC5、HepG2均由南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院消化內(nèi)科實驗室保存，以含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基于37 ℃恒溫CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞密度達80%～90%時行細胞傳代處理。4～5周齡雄性BALB/c nude裸鼠購自江蘇華創(chuàng)信諾醫(yī)藥科技有限公司。

敲減慢病毒和過表達慢病毒購自上海吉凱基因醫(yī)學(xué)科技股份有限公司，RRP15 shRNA敲減慢病毒序列sh1： GGG AUG GAU GGA AGU ACA ATT; sh2： GGA AAG UGA UGG GCC AGA UTT。TRIzol 試劑（Invitrogen， Thermo Fisher Scientific）；HiScript Q RT SuperMix、ChamQ SYBR qPCR Master Mix、CCK?8試劑（南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；活性氧（reactive oxygen species， ROS）檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；亞鐵離子含量檢測試劑盒、還原型谷胱甘肽（glutathione， GSH）含量檢測試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；細胞脂質(zhì)過氧化物檢測試劑盒[東仁化學(xué)科技（上海）有限公司]；丙二醛（malondialdehyde， MDA）測試盒（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）；鐵死亡抑制劑Ferrostatin?1（MedChemExpress LLC）；RRP15抗體（Sigma?Aldrich， Merck KGaA）；p62抗體（杭州景杰生物科技股份有限公司）；Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1（Kelch?like ECH?associated protein 1， KEAP1）、鐵蛋白重鏈1（ferritin heavy chain 1， FTH1）抗體（愛博泰克生物科技有限公司）；核因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2?related factor 2， NRF2）抗體（Thermo Fisher Scientific）；β?actin抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）。

二、方法

1. 公共數(shù)據(jù)庫信息分析：從基因表達數(shù)據(jù)庫（Gene Expression Omnibus， GEO; https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）GSE192771數(shù)據(jù)集中提取人肝癌細胞株RRP15 mRNA表達數(shù)據(jù)進行分析。

2. 慢病毒感染：Huh7或PLC5細胞接種于6孔板，24 h后細胞密度達到30%～40%，根據(jù)相應(yīng)試劑說明書感染RRP15敲減慢病毒或過表達慢病毒，24 h后更換為新鮮完全培養(yǎng)基，繼續(xù)后續(xù)實驗。

3. Real?time PCR：TRIzol試劑提取細胞總RNA，測定RNA濃度和純度；參照試劑盒說明書將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，行real?time PCR擴增，PCR引物由北京擎科生物科技股份有限公司合成。β?actin（內(nèi)參）引物： F 5′?AGC GAG CAT CCC CCA AAG TT?3′， R 5′?GGG CAC GAA GGC TCA TCA TT?3′; RRP15引物： F 5′?CTG GGC AGA TGC TAT GGC TAA A?3′， R 5′?GGA CAA CAT CTG GCT TTA CTC TG?3′。2－ΔΔCt法計算目的基因mRNA相對表達量。

4. 蛋白質(zhì)印跡法：PBS洗滌細胞，加入RIPA裂解液，研磨、離心后將上清液移入新EP管中，BCA法測定蛋白濃度，將蛋白樣品定至同一濃度。使用SDS?PAGE膠以90 V 30 min， 120 V 45 min分離蛋白質(zhì)，濕轉(zhuǎn)200 mA 120 min，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，脫脂牛奶室溫封閉2 h后洗膜，一抗4 ℃孵育過夜；次日充分洗滌后二抗室溫孵育2 h，再次洗滌后以ECL發(fā)光液處理，電荷耦合器件（CCD）成像儀成像，ImageJ軟件分析目的蛋白相對表達量。

5. 半數(shù)抑制濃度（IC50）測定：取對數(shù)生長期細胞，計數(shù)后以3 000個/孔接種于96孔板，設(shè)置5個復(fù)孔；次日以不同濃度索拉非尼處理細胞，48 h后棄上清液，加入CCK?8工作液，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h；分光光度計測定各孔吸光度值，計算細胞抑制率。

6. 集落形成實驗：取對數(shù)生長期細胞，計數(shù)后以1 000個/孔接種于6孔板，次日以指定濃度索拉非尼處理細胞；14 d后細胞形成集落，以甲醇固定細胞15 min，結(jié)晶紫染色20 min，PBS洗滌細胞，細胞成像系統(tǒng)采集圖像。

7. 鐵死亡標(biāo)志物檢測：將細胞接種于6孔板，次日以指定濃度索拉非尼處理細胞，48 h后收集細胞，使用相應(yīng)試劑盒檢測細胞內(nèi)ROS、Fe2+、脂質(zhì)過氧化物、還原型GSH、MDA含量。

8. 動物實驗：動物實驗遵守南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院動物倫理要求。12只4～5周齡雄性裸鼠于恒溫37 ℃、通風(fēng)良好、潔凈的環(huán)境中適應(yīng)1周后開始實驗。每只裸鼠皮下注射2×106 Huh7細胞，每3～4 d測量1次腫瘤大小，計算腫瘤體積[V=（W2×L）/2，W為短徑，L為長徑]。待腫瘤體積達到50 mm3時，予30 mg·kg－1·d－1索拉非尼灌胃處理14 d。1個月后斷頸處死動物，取出皮下腫瘤并測量體積。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

每組實驗均獨立重復(fù)3次。應(yīng)用GraphPad Prism 9軟件進行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以x±s描述，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、索拉非尼誘導(dǎo)肝癌細胞RRP15表達上調(diào)

對提取自GEO數(shù)據(jù)庫GSE192771數(shù)據(jù)集的RRP15 mRNA表達數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果顯示經(jīng)索拉非尼處理的人肝癌細胞株中RRP15 mRNA表達顯著上調(diào)（圖1A）。為驗證這一結(jié)果，本研究使用不同濃度的索拉非尼處理人肝癌細胞株Huh7 48 h，以real?time PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測RRP15表達變化，結(jié)果證實RRP15 mRNA（圖1B）和蛋白（圖1C、1D）表達均顯著上調(diào)。

二、RRP15調(diào)節(jié)肝癌細胞對索拉非尼的敏感性

為了探究肝癌細胞中的RRP15表達是否與其對索拉非尼的敏感性相關(guān)，本研究首先使用蛋白質(zhì)印跡法檢測了多株人肝癌細胞株（Huh7、Hep3B、PLC5、HepG2）中的RRP15蛋白表達情況，結(jié)果顯示HepG2、Hep3B細胞RRP15蛋白表達水平較高，Huh7、PLC5細胞RRP15蛋白表達水平較低（圖2A）。進一步使用CCK?8實驗測定索拉非尼對不同肝癌細胞的IC50以評估藥物敏感性，結(jié)果顯示RRP15高表達的HepG2、Hep3B細胞IC50分別為11 μmol/L和17 μmol/L，而RRP15低表達的Huh7、PLC5細胞IC50分別為6.5 μmol/L和5.83 μmol/L（圖2B），選擇索拉非尼敏感的Huh7、PLC5細胞進行后續(xù)實驗。CCK?8實驗還表明，敲減RRP15和索拉非尼處理均可抑制肝癌細胞活性，兩者聯(lián)用抑制作用更為顯著（圖2C）。集落形成實驗表明敲減RRP15可增強索拉非尼對肝癌細胞集落形成能力的抑制作用（圖2D）；相反，過表達RRP15則可逆轉(zhuǎn)索拉非尼對肝癌細胞增殖的抑制作用（圖2E）。上述結(jié)果表明，肝癌細胞的RRP15表達水平與其對索拉非尼的敏感性呈負相關(guān)，抑制RRP15表達可顯著增強肝癌細胞對索拉非尼的敏感性。

三、RRP15通過鐵死亡調(diào)節(jié)肝癌細胞對索拉非尼的敏感性

有研究[10]顯示，相較于索拉非尼激酶抑制活性的促凋亡效應(yīng)，其誘導(dǎo)肝癌細胞鐵死亡的效應(yīng)更為顯著，由此推測RRP15可能通過鐵死亡調(diào)節(jié)肝癌細胞對索拉非尼的敏感性。實驗數(shù)據(jù)表明，與未予任何處理的對照組相比，單純索拉非尼處理組Huh7細胞內(nèi)FITC?A標(biāo)記的ROS熒光強度、脂質(zhì)過氧化物熒光強度和Fe2+水平升高（圖3A?3C），還原型GSH水平降低（圖3D），MDA產(chǎn)生增加（圖3E）；以相同濃度索拉非尼處理，敲減RRP15后，細胞內(nèi)ROS、Fe2+、脂質(zhì)過氧化物、MDA水平較單純索拉非尼處理組進一步升高（圖3A?3C、3E），還原型GSH水平進一步降低（圖3D）。相反，在PLC5細胞中過表達RRP15并使用索拉非尼處理，與單純索拉非尼處理組相比，細胞內(nèi)Fe2+水平降低（圖3F）、還原型GSH水平升高（圖3G）、MDA產(chǎn)生減少（圖3H）。上述結(jié)果表明，抑制RRP15表達可增強索拉非尼誘導(dǎo)的鐵死亡，而過表達RRP15則能減輕索拉非尼誘導(dǎo)的鐵死亡。

四、鐵死亡抑制劑Ferrostatin?1逆轉(zhuǎn)敲減RRP15誘導(dǎo)的索拉非尼敏感性增加

在Huh7細胞中敲減RRP15后，予索拉非尼單獨或與Ferrostatin?1聯(lián)合處理細胞48 h，CCK?8實驗表明加入Ferrostatin?1后，細胞死亡受到明顯抑制，存活率較敲減RRP15僅聯(lián)合索拉非尼處理組明顯升高（Plt;0.001；圖4A）。進一步檢測各組鐵死亡相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果顯示Ferrostatin?1的加入可使細胞內(nèi)MDA、Fe2+水平降低（P均lt;0.001；圖4B、4C），還原型GSH水平升高（P均lt;0.001；圖4D）。上述結(jié)果提示抑制鐵死亡能有效抑制由敲減RRP15誘導(dǎo)的索拉非尼敏感性增加，并進一步證實抑制RRP15表達系通過促進鐵死亡進程增強肝癌細胞對索拉非尼的敏感性。

五、RRP15通過p62?KEAP1?NRF2信號通路調(diào)節(jié)鐵死亡

有研究[11]表明，p62?KEAP1?NRF2信號通路在鐵死亡調(diào)控過程中扮演關(guān)鍵角色。為驗證RRP15是否系通過該通路影響肝癌細胞對索拉非尼的敏感性，本研究在敲減RRP15聯(lián)合索拉非尼處理的Huh7細胞中檢測了該信號通路相關(guān)蛋白的表達變化。蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示，索拉非尼單獨處理可抑制p62表達，從而誘導(dǎo)KEAP1表達上調(diào)，進而下調(diào)NRF2和FTH1表達，聯(lián)合敲減RRP15時，上述蛋白表達變化更為顯著（圖5A）。相反，在PLC5細胞中過表達RRP15并聯(lián)合索拉非尼處理，與單獨索拉非尼處理組相比，p62表達上調(diào)，KEAP1表達下調(diào)，NRF2、FTH1表達上調(diào)（圖5B）。上述結(jié)果表明抑制RRP15表達可通過抑制p62?KEAP1?NRF2信號通路誘導(dǎo)鐵死亡，從而增強肝癌細胞對索拉非尼的敏感性。

六、體內(nèi)實驗證實敲減RRP15可增強索拉非尼的抗肝癌效果

將經(jīng)不同處理的Huh7細胞接種至裸鼠皮下構(gòu)建異種移植瘤模型，結(jié)果顯示，與僅予對照shRNA處理相比，無論是敲減RRP15還是索拉非尼灌胃處理均可抑制移植瘤生長，兩者聯(lián)合使用抑制作用更明顯（圖6），在體內(nèi)水平證明抑制RRP15表達能顯著增強肝癌對索拉非尼治療的敏感性。

lt;F：＼排版文件＼胃腸病學(xué)＼胃腸病學(xué)2024年＼胃腸病學(xué)202402期＼趙賽利-5.tifgt;

注：RRP15為核糖體RNA加工蛋白15；KEAP1為Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1；NRF2為核因子E2相關(guān)因子2；FTH1為鐵蛋白重鏈1；β?actin為β?連環(huán)蛋白

A：敲減RRP15聯(lián)合索拉非尼（5 μmol/L）處理后Huh7細胞p62?KEAP1?NRF2通路相關(guān)蛋白表達變化（蛋白質(zhì)印跡法）；B：過表達RRP15聯(lián)合索拉非尼（5 μmol/L）處理后PLC5細胞p62?KEAP1?NRF2通路相關(guān)蛋白表達變化（蛋白質(zhì)印跡法）

圖5 RRP15通過p62?KEAP1?NRF2信號通路調(diào)節(jié)鐵死亡

并調(diào)控肝癌細胞對索拉非尼的敏感性

討 論

本研究針對RRP15是否會影響肝癌細胞對索拉非尼的敏感性展開探討，并揭示了RRP15影響肝癌細胞對索拉非尼敏感性的分子機制，為HCC的治療以及藥物增敏提供了新的理論依據(jù)。索拉非尼作為治療HCC的一線靶向藥物，可有效抑制腫瘤生長和血管生成，顯著提高了不可切除的進展期HCC患者的總生存率[3，12]。盡管索拉非尼已被廣泛應(yīng)用于臨床，但其治療效果短暫，幾乎所有患者均在用藥數(shù)月內(nèi)出現(xiàn)耐藥性[13]。因此，迫切需要探究導(dǎo)致HCC對索拉非尼耐藥的影響因素及其分子機制，以期為提高索拉非尼對HCC的療效提供理論依據(jù)和應(yīng)對策略。

鐵死亡是一種鐵代謝過程中產(chǎn)生過量氧自由基，導(dǎo)致細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化引起的細胞程序性死亡方式，與腫瘤細胞對化療藥物的敏感性密切相關(guān)，鐵死亡的激活或抑制可能作為調(diào)節(jié)患者對化療藥物治療反應(yīng)的潛在策略[14]。索拉非尼可誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生，ROS在線粒體、細胞質(zhì)和細胞核中過度積聚，造成細胞膜氧化性損傷，進而誘導(dǎo)鐵死亡[15]。索拉非尼耐藥也與鐵死亡密切相關(guān)，有研究[11]表明索拉非尼耐藥與p62?KEAP1?NRF2信號通路激活增加肝癌細胞對鐵死亡的抗性有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)索拉非尼可誘導(dǎo)肝癌細胞RRP15表達上調(diào)，而肝癌細胞的RRP15本底表達水平本身又與其對索拉非尼的敏感性呈負相關(guān)，由此推測RRP15可能參與調(diào)節(jié)肝癌細胞對索拉非尼的敏感性。本研究細胞水平實驗結(jié)果顯示，敲減RRP15聯(lián)合索拉非尼處理較兩者單用能更有效地抑制肝癌細胞的生長、增殖能力。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)敲減RRP15系通過抑制p62?KEAP1?NRF2信號通路誘導(dǎo)鐵死亡，從而顯著增強索拉非尼對肝癌細胞的殺傷能力。相反，過表達RRP15則部分抵消了索拉非尼誘導(dǎo)的鐵死亡，進而抑制索拉非尼對肝癌細胞的殺傷能力。本研究還通過動物實驗驗證了細胞水平的實驗結(jié)果，證實在體內(nèi)敲減RRP15可顯著增強肝癌對索拉非尼治療的敏感性，提高藥物的抗腫瘤效果。

綜上所述，本研究首次證實了RRP15與HCC索拉非尼耐藥之間的相關(guān)性。研究結(jié)果表明，RRP15與HCC對索拉非尼耐藥密切相關(guān)，抑制RRP15可增強HCC對索拉非尼的敏感性，其機制可能與促進鐵死亡相關(guān)。RRP15不僅可作為索拉非尼耐藥性的潛在預(yù)測指標(biāo)，還有望成為提高耐藥患者對索拉非尼敏感性的治療靶點，但目前尚缺乏索拉非尼敏感與耐藥HCC患者的RRP15表達數(shù)據(jù)，RRP15與鐵死亡標(biāo)志物之間的相關(guān)性亦尚未得到驗證。本研究發(fā)現(xiàn)可能為提高HCC患者對索拉非尼的治療反應(yīng)提供了一種新的策略。未來研究需要更翔實的體內(nèi)外數(shù)據(jù)驗證上述發(fā)現(xiàn)，并探索通過抑制RRP15提高索拉非尼對HCC患者治療效果的臨床轉(zhuǎn)化價值。此外，考慮到鐵死亡參與了多種類型腫瘤的進展和治療應(yīng)答，本研究發(fā)現(xiàn)也可能對其他類型腫瘤的診治具有借鑒意義。

參考文獻

[ 1 ] SUNG H， FERLAY J， SIEGEL R L， et al. Global cancer statistics 2020： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J]. CA Cancer J Clin， 2021， 71 （3）： 209?249.

[ 2 ] 王耀民，李亞玲. 分子靶向藥物治療肝細胞癌的研究進展[J]. 中山大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)科學(xué)版）， 2023， 44 （6）： 915?924.

[ 3 ] CHENG A L， KANG Y K， CHEN Z， et al. Efficacy and safety of sorafenib in patients in the Asia?Pacific region with advanced hepatocellular carcinoma： a phase Ⅲ randomised， double?blind， placebo?controlled trial[J]. Lancet Oncol， 2009， 10 （1）： 25?34.

[ 4 ] 趙典，張斌，鄒曉平. 核糖體RNA加工蛋白15在肝細胞癌中的表達、功能和臨床意義[J]. 胃腸病學(xué)， 2020， 25 （2）： 70?75.

[ 5 ] ZHAO D， QIAN L， ZHUANG D， et al. Inhibition of ribosomal RNA processing 15 homolog （RRP15）， which is overexpressed in hepatocellular carcinoma， suppresses tumour growth via induction of senescence and apoptosis[J]. Cancer Lett， 2021， 519： 315?327.

[ 6 ] LIANG F， LV Y， QIAO X， et al. Cinchonine?induced cell death in pancreatic cancer cells by downregulating RRP15[J]. Cell Biol Int， 2023， 47 （5）： 907?919.

[ 7 ] DENG Z， XU Y， CAI Y， et al. Inhibition of ribosomal RNA processing 15 homolog （RRP15） suppressed tumor growth， invasion and epithelial to mesenchymal transition （EMT） of colon cancer[J]. Int J Mol Sci， 2023， 24 （4）： 3528.

[ 8 ] DONG Z， LI J， DAI W， et al. RRP15 deficiency induces ribosome stress to inhibit colorectal cancer proliferation and metastasis via LZTS2?mediated β?catenin suppression[J]. Cell Death Dis， 2023， 14 （2）： 89.

[ 9 ] PAN T， LI J， ZHANG O， et al. Knockdown of ribosome RNA processing protein 15 suppresses migration of hepatocellular carcinoma through inhibiting PATZ1?associated LAMC2/FAK pathway[J]. BMC Cancer， 2024， 24 （1）： 334.

[10] LOUANDRE C， EZZOUKHRY Z， GODIN C， et al. Iron?dependent cell death of hepatocellular carcinoma cells exposed to sorafenib[J]. Int J Cancer， 2013， 133 （7）： 1732?1742.

[11] SUN X， OU Z， CHEN R， et al. Activation of the p62?Keap1?NRF2 pathway protects against ferroptosis in hepatocellular carcinoma cells[J]. Hepatology， 2016， 63 （1）： 173?184.

[12] VOGEL A， SABOROWSKI A. Current strategies for the treatment of intermediate and advanced hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Treat Rev， 2020， 82： 101946.

[13] LADD A D， DUARTE S， SAHIN I， et al. Mechanisms of drug resistance in HCC[J]. Hepatology， 2024， 79 （4）： 926?940.

[14] WANG Y， WU X， REN Z， et al. Overcoming cancer chemotherapy resistance by the induction of ferroptosis[J]. Drug Resist Updat， 2023， 66： 100916.

[15] WANG C， CHENG X， PENG H， et al. NIR?triggered and ROS?boosted nanoplatform for enhanced chemo/PDT/PTT synergistic therapy of sorafenib in hepatocellular carci?noma[J]. Nanoscale Res Lett， 2022， 17 （1）： 92.

（2024?02?07收稿；2024?02?20修回）

（本文編輯：蔣曉玲）