【摘要】近些年，牛肝中地塞米松的抽檢不合格現(xiàn)象時有發(fā)生，因而檢測牛肝中地塞米松的殘留具有重要意義。目前，檢測牛肝中地塞米松殘留最常用的方法是高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本文綜合評述了包括薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-質(zhì)譜法以及高效液相色譜法在內(nèi)的多種地塞米松檢測技術(shù)，并特別對高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行了深入分析，以期為后續(xù)研究提供參考和借鑒。

【關(guān)鍵詞】地塞米松；殘留檢測；牛肝

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.008

Review of Research on Detection Technology of Dexamethasone Residue in Bovine Liver

FU Chuling， GUO Siqi， LAN Yumeng， GUO Guoxian， SUN Weiwei， GU Meng， CAO Mengna

（Liaoning Inspection， Examination&Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China）

Abstract： In recent years， the phenomenon of unqualified dexamethasone residues in bovine liver has occurred from time to time， so it is important to detect dexamethasone residues in bovine liver. Currently， the most commonly used method for detecting dexamethasone residues in bovine liver is high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. This article comprehensively reviews various dexamethasone detection techniques， including thin-layer chromatography， enzyme-linked immunosorbent assay， gas chromatography-mass spectrometry， and high-performance liquid chromatography， with a particular in-depth analysis of highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， in order to provide a reference and reference for further research.

Keywords： dexamethasone； residue detection； bovine liver

1地塞米松概述

1.1地塞米松的理化性質(zhì)

地塞米松（Dexamethasone，DXM）是一種人工合成的糖皮質(zhì)類激素藥物。它的化學結(jié)構(gòu)是在潑尼松龍的基礎上進行了改良：在B環(huán)的第9位引入氟原子，在D環(huán)的第16位引入甲基。這兩個結(jié)構(gòu)上的改變顯著增強了地塞米松的抗炎活性。特別是第16位的甲基顯著降低了水鈉潴留副作用。

1.2地塞米松的作用及危害

地塞米松在獸醫(yī)臨床上被廣泛應用于治療畜禽的感染性疾病，然而，有些養(yǎng)殖企業(yè)經(jīng)常濫用地塞米松，甚至非法將其添加至飼料中。另外，地塞米松會殘留在動物的肝臟中。如果人長期食用含有地塞米松的牛肝，不僅會影響機體的激素平衡，引發(fā)代謝紊亂、骨質(zhì)疏松、肥胖等病癥，還有致癌風險[1]。地塞米松殘留超標的牛肝會對人體健康以及環(huán)境安全產(chǎn)生極大危害。

1.3地塞米松殘留限量規(guī)定

為了規(guī)范地塞米松的使用，GB 31650—2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》和《動物性食品中獸藥最高殘留限量》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235號）都明確規(guī)定了地塞米松在牛肝中的最大殘留限量為2.0μg/kg。

2檢測方法

目前，檢測地塞米松的方法有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。

2.1薄層色譜法

薄層色譜法是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，形成一均勻薄層，經(jīng)過點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定。K.E.Vanoosthuyze[2]等建立了糖皮質(zhì)激素（包含地塞米松）的高效薄層色譜法。薄層色譜法僅使用薄層板，不需要大型儀器，因而檢測成本較低，能夠快速分離和定性分析地塞米松，但此方法的靈敏度較低且前處理復雜，需要衍生化。

2.2酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是利用目標物抗體和抗原結(jié)合的特異性，通過酶標儀測定吸光度，根據(jù)吸光度的值得出地塞米松的含量。SN/T 4141—2015《畜及畜產(chǎn)品中糖皮質(zhì)激素殘留量檢測方法酶聯(lián)免疫法》規(guī)定，牛肝中地塞米松的測定限為0.20μg/ kg，回收率范圍為53.0%～89.2%。Kolanovic[3]等建立了酶聯(lián)免疫吸附法測定牛奶中殘留的地塞米松，檢測限為0.2 mg/kg，回收率范圍為68%～131%。該方法的優(yōu)點：靈敏度更高，不需要大型儀器，不需要專業(yè)的操作人員，操作者經(jīng)過簡單的培訓即可進行實驗操作，大部分樣品的前處理方法簡單、步驟少，所需試劑耗材量簡單，檢測成本低，檢測速度快。

2.3氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

氣相色譜技術(shù)以氣體為流動相，通過與地塞米松標準品比對待測組分的保留時間及峰面積，實現(xiàn)定性定量分析。在實際測定地塞米松時，基質(zhì)干擾可能導致雜質(zhì)峰的出現(xiàn)，這些雜質(zhì)峰若出現(xiàn)在地塞米松的保留時間范圍內(nèi)，可能被誤認為是待測組分。引入氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)后，可以在氣相色譜儀的分離富集基礎上，通過串聯(lián)質(zhì)譜儀對待測組分的特征離子裂解片段進行精確的定性定量分析。這種方法顯著提高了地塞米松的測定靈敏度和檢出限，有效克服了因雜質(zhì)峰與待測組分保留時間重疊而引起的分析誤判。因此，許多研究人員開始廣泛使用這一技術(shù)對地塞米松殘留進行分析。Hidalgo O H[4]等采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對尿液中地塞米松進行檢測，檢測限可以達到0.2 ng/mL，且實現(xiàn)了地塞米松和倍他米松的分離。與薄層色譜法相比，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的靈敏度、特異性高，但同樣需要衍生，過程煩瑣。

2.4高效液相色譜法

高效液相色譜以液體為流動相，通過保留時間來確定待測組分。待測物質(zhì)在適合的流動相下通過色譜柱進行分離，分離后的物質(zhì)進入檢測器進行檢測。在《豬可食性組織中地塞米松殘留檢測方法高效液相色譜法》（農(nóng)業(yè)部958號公告—6—2007）中，豬肝的檢測限為1μg/kg。高效液相色譜法樣品前處理一般不需要衍生化，比氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法簡單。但地塞米松和倍他米松分子結(jié)構(gòu)相似，使用高效液相色譜法很難完全分離兩者。與氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法相比，高效液相色譜法檢測結(jié)果準確、前處理方法簡單。但高效液相色譜法同樣需要使用大型儀器和固定的實驗場所，這導致該方法在便捷性方面有所欠缺，因而在基層檢測工作中難以廣泛推廣。

2.5高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性能力相結(jié)合，具有更好的選擇性和靈敏性，是目前檢測地塞米松最常用的方法。

2.5.1色譜柱的討論

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定地塞米松選用的色譜柱有BEH C18柱（1.7μm）、C18柱（5μm）、Atlantis d C18柱（3μm）等。色譜柱固定相粒徑越小，其表面積越大，所以小粒徑的固定相有助于提高色譜柱的分離效率。研究表明，地塞米松在色譜檢測中顯示出更優(yōu)的分離效果和較高的目標峰響應。此外，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的柱壓最高可達15，000 psi（約103 MPa），較高的柱壓可以縮短地塞米松與色譜柱和流動相平衡的時間，進而縮短洗脫時間，提升檢測效率。

2.5.2流動相的討論

Olivia Van den hauwe[5]等用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法方法測定牛肝中的倍他米松和地塞米松時，流動相為乙腈和0.3%甲酸水，回收率為56%～69%，最低檢測限為0.2×10-9。參照文獻和標準可知，使用負離子模式的電噴霧離子源時，甲酸水的濃度通常維持在0.1%～0.3%。這是因為目標物能與甲酸形成共軛離子[M+HCOO]-，需要一定濃度的甲酸以促進目標物的有效離子化，所以不能使用純水。需要注意的是，甲酸的濃度會直接影響儀器的響應值。研究發(fā)現(xiàn)，綜合比較0.1%甲酸水、0.2%甲酸水、0.3%甲酸水，當甲酸含量為0.1%時，地塞米松響應值最高。另外，使用甲酸含量為0.1%的甲酸乙腈溶液時，響應值也有所提升。由于倍他米松和地塞米松互為差向異構(gòu)體，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分離倍他米松和地塞米松時，倍他米松和地塞米松的母離子和碎片離子的定量離子對、定性離子對完全相同。因此，無法通過不同的定量離子對和定性離子對分離倍他米松和地塞米松，需要通過液相部分對地塞米松和倍他米松進行分離。通常，流動相流量越大，出峰效率越高，但同時柱壓會升高，離子化效率也會隨之降低。研究發(fā)現(xiàn)，綜合考慮柱壓、出峰效率和離子化效率，流動相的流量為0.3 mL/min時最為適宜。

2.5.3固相萃取小柱的討論

固相萃取對于樣品的凈化和濃縮起到了關(guān)鍵的作用。固相萃取小柱的選擇會影響樣品的回收率和儀器的使用壽命。使用了不正確的固相萃取小柱，樣品濃縮效果差，會影響實驗結(jié)果。如果固相萃取小柱凈化效果差，那么上機的樣品雜質(zhì)含量高，會影響儀器的使用壽命。不同的固相萃取小柱按類別不同填充了不同的填料，當樣品以液體形式流過時，填料對樣品中的目標化合物進行吸附，過濾掉樣品的本體干擾以及其余化合物干擾，再用適合的洗脫液進行洗脫，最終達到分離、凈化、濃縮的效果。

傳統(tǒng)的液液萃取方法雖然實驗材料簡單，但回收率偏低、實驗步驟復雜、背景干擾大、凈化效果差，且樣品容易產(chǎn)生假陽性。固相萃取法很好地克服了上述缺點，不僅可用于復雜樣品中微量或痕量目標化合物的提取，也可用于凈化、濃縮或富集。因此，將液液萃取方法與固相萃取法相結(jié)合，也是目前獸藥殘留分析中樣品前處理的主流方法。二者結(jié)合不但可以讓樣品得到很好的凈化和濃縮，提高方法靈敏度，還能延長儀器和色譜柱的壽命。由于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的色譜柱粒徑小，為了防止色譜柱的污染和堵塞，對通過色譜柱的樣品溶液有較高的要求。多個標準推薦使用不同規(guī)格的Silica固相萃取柱進行樣品凈化。研究表明，在處理含有較多雜質(zhì)的復雜樣品時，較大規(guī)格的Silica柱能更有效地除去這些雜質(zhì)，從而保護色譜柱并提高分析的可靠性。

與其余色譜法相比，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的準確度和靈敏度更高，而且對樣品的前處理過程進行了簡化，但高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法所需設備的成本較高，不適用于常規(guī)實驗室分析，同樣也較難實現(xiàn)大規(guī)模的現(xiàn)場檢測。

3結(jié)束語

在地塞米松殘留檢測方法中，薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法都不需要大型儀器，且人員培訓較為簡單，適合初期大規(guī)模檢測使用，但薄層色譜法前處理時需要對樣品進行衍生化處理，較為復雜，因而應用較少。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度雖高，但同樣需要對樣品進行衍生化處理。同時，儀器運行時間較長，因而應用同樣較少。高效液相色譜法前處理過程得到了簡化，具有較高的靈敏度和較快的運行時間，但受基質(zhì)干擾較大，對于同分異構(gòu)體的地塞米松和倍他米松分離較為困難。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法前處理過程較高效液相色譜法得到了進一步簡化，靈敏度也是最高的，適合痕量檢測，同時也能很好地分離地塞米松和倍他米松。但其檢測難度高，需要專業(yè)的檢測人員，且液質(zhì)儀器昂貴，維護和維修成本很高，通常應用于中心實驗室檢驗。

為了解決在不同場景和不同需求下對地塞米松檢測的問題，我們還需開發(fā)更多的檢測方法。隨著科技的日新月異，地塞米松殘留的檢測技術(shù)也在不斷發(fā)展和優(yōu)化。相信不久的將來，地塞米松殘留檢測會更加簡單、快捷并且準確，進而為消費者食用放心牛肝提供可靠保障。

【參考文獻】

[1]任宏彬，花錦，楊蒲晨，等.固相萃取-高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測牛奶中地塞米松殘留[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2021（2）：45-48.

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【作者簡介】

傅楚凌，女，1996年出生，學士，研究方向為獸藥殘留檢測。

（編輯：李鈺雙）